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單細胞分選的使用方法和應用2020/07/14

單細胞分選控制臺可通過計算機USB接口控制流體閥和顯微LED照明光源，同時也可以自由地控制顯微鏡熒光快門，并且整合了高速控制閥實現(xiàn)流體快速、精密控制。一、使用方法細胞分選儀配備高精度微移液管支架，控制臺始終保證微量吸液管位于視場的正中心，并且微移液管控制臺可非常容易地安裝在物鏡上，同時軟件可對移液管的位置進行偏差校準。微移液管的可通過轉(zhuǎn)動控制臺的旋鈕進行手動聚焦，同時顯微鏡的圖像可跟進調(diào)整；玻璃微移液管更換便捷，當更換培養(yǎng)皿時簡單地取下來分選針頭即可。該系統(tǒng)采用液體靜壓力方式進行細胞沉積，微量吸

單克隆篩選利用選擇性培養(yǎng)基進行篩選2020/07/14

單克隆篩選在穩(wěn)定細胞系構建實驗中，部分外源基因能夠通過細胞質(zhì)進入細胞核內(nèi)，并通過分子間重組，整合進宿主細胞染色體，不同外源基因整合位點不同，只有整合到表達區(qū)的基因才會表達。想要獲得穩(wěn)定表達的細胞株，需要對轉(zhuǎn)染后得到的細胞池進行陽性克隆篩選，如果想要獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的單克隆細胞株，還需要進行單克隆篩選。原理：細胞池篩選系統(tǒng)可以分為非基因擴增選擇系統(tǒng)與基因擴增選擇系統(tǒng)兩種?；驍U增選擇系統(tǒng)及GS系統(tǒng)常用。轉(zhuǎn)染宿主細胞的質(zhì)粒帶有某種選擇性標記（例如代謝標記、抗生素標記等），將帶有標記的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入宿主細胞后，

單細胞分選對于高通量需求具有重要意義2020/07/09

單細胞分選可以依據(jù)熒光信號的強度挑出特定生物學屬性的細胞，相比起其他單細胞分離技術(如有限稀釋法、激光捕獲顯微切割、顯微操作等)，其特定類型的單細胞獲取更具準確性。另外，依賴于精確的液滴分析模式，采用32等份液滴分選模式，實現(xiàn)液滴的精確分析，可以準確判斷相應液滴中目標細胞的數(shù)量，因此可以準確完成單細胞的分離操作。單細胞分選儀具有高速分析能力，可以快速識別特定細胞，尤其對于低含量細胞的分選尤為重要，分選速度快，可以在短時間內(nèi)完成多孔板的操作。另外，流式細胞分選儀支持96孔和384孔板，對于后期分析

新型單細胞分選有哪些優(yōu)勢？2020/07/06

單細胞分選摒棄一貫以來通過微珠實現(xiàn)液滴延遲的做法，這樣可減少因噴嘴堵塞而重新計算液滴延遲時間時需要取出無菌樣品的情況，從而確保分選過程中無菌狀態(tài)不會中斷。此外還能監(jiān)測及保持液滴斷點的穩(wěn)定以實現(xiàn)無間斷無菌分選，確保分選的完整性。雙前向角散射光檢測技術可實現(xiàn)同時在三個數(shù)量級上測量散射光信號的特性，適當?shù)牟ㄩL選擇則可將檢測范圍擴大至405–640nm，從而可對較小和較大的顆粒進行檢測。借助該儀器，研究人員可對品類繁多的生物樣本進行研究工作，從微粒體到巨噬細胞到異種移植體，全都可以進行分析和分選。該儀器

單細胞分選可應對各種復雜生物樣本2020/07/02

單細胞分選與傳統(tǒng)的流式細胞分選技術相比，該技術不對細胞進行任何“修飾”即可實現(xiàn)精準分選，可保持細胞本來的狀態(tài)，對不同類型和尺寸的細胞具有良好的普適性，可應對各種復雜生物樣本，特別適用于微生物單細胞分選。細胞分選可從血液、尿液等成分復雜的臨床樣本中，快速定位并分離病原微生物，從而指導用藥，為患者特別是重癥感染患者爭取治療時間。在腫瘤醫(yī)學方面，可以對癌細胞做到單細胞水平的診斷，為早期癌癥篩查和治療提供基礎。同時，它還能為加快深海、高原等特殊自然環(huán)境中微生物資源的開發(fā)與利用提供前沿性技術手段。與人體和

如何實現(xiàn)高通量的單細胞分選？2020/06/30

單細胞分選通過集成基于介電的單細胞捕獲釋放和電磁閥吸吮技術，實現(xiàn)了高速流動狀態(tài)下單細胞的捕獲、采集、釋放和分選，通量達~60個細胞/分鐘。為了進一步提高通量，研究人員提出，單細胞經(jīng)液滴包裹后，通過耦合介電可實現(xiàn)高通量分選。首先，液滴表面凸/凹的形狀會產(chǎn)生透鏡效應，影響激光聚焦，降低空間分辨率，導致無法獲取液滴中細胞的信號。其次，單細胞液滴包裹需要油相的引入，而油相具有強拉曼背景，會嚴重影響細胞信號的精確獲取。第三，如何實現(xiàn)采集、分析、單細胞液滴包裹及分選的自動化集成未見先例。研究人員巧妙利用先獲

單細胞分選方式利弊以及難易程度介紹2020/06/22

單細胞分選是對細胞（或微粒）的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學性狀及功能狀態(tài)等進行定性或定量檢測的一種現(xiàn)代細胞分析技術。如果對通量要求較高，同時目標細胞有適宜的熒光標記，可利用流式細胞儀完成分選。經(jīng)熒光染色或標記的單細胞懸液，被高壓壓入流動室內(nèi)，在鞘液的包裹和推動下，細胞被排成單列，以一定速度從流動室噴口噴出。通過相應熒光檢測及充電，獲得目的細胞，實現(xiàn)單細胞分離。優(yōu)點：通量較高，可分選單個細胞。缺點：需要具有分選功能的流式細胞儀，有穩(wěn)定可用的熒光標記或熒光染料，需制備一定量的細胞懸浮液，

單細胞鋪板的原理介紹2020/06/18

單細胞鋪板是將一個孔加入少量無血清培養(yǎng)基，晃動浸潤整個孔底，然后用移液槍吸至第二孔，同樣方法浸潤孔底，其它孔依此類推，這樣整個孔底都是濕潤的，細胞懸液會平鋪在整個孔底。加細胞懸液的時候可以避免加在中間中間細胞多，而加在周邊晃勻后周邊細胞多中間少的現(xiàn)象，細胞分散較均勻，注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下，細胞懸液加完后，將細胞培養(yǎng)板抬高，對著燈光，從底部往上看，看細胞有沒有抱團，然后從底部敲擊，使之分散。全新的高效率無損全鋪板系統(tǒng)，它是真正意義上的無損、高效率、全自動的鋪板系統(tǒng)，可以實現(xiàn)并保證分

單細胞分離使工藝過程更加簡單2020/06/03

單細胞分離法是一種從待分離的材料中直接分離單個細胞進行培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)的方法。該法在顯微鏡下操作，對于體積較大的微生物，可以用毛細管提取微生物個體；對較小的細胞或孢子，可以用顯微針、鉤、環(huán)等挑取以獲得單細胞；也可將適當稀釋后的樣品制成小液滴，在顯微鏡下選取只含有一個細胞的液滴培養(yǎng)。細胞分離的手段主要是通過將細胞懸浮后做高通量篩選，其中主要使用的是流式細胞熒光分選技術（FACS）或者免疫磁性細胞分選法（MACS），這兩種方法在臨床上目前均廣泛應于細胞篩選。然而這兩種方法均需要使用相當大量數(shù)量的細胞，

單細胞分離技術大揭秘，值得收藏！2020/05/27

單細胞分離是研究中困難的步驟之一，目前的分離策略主要分為三類：手動分離、熒光激活的細胞分選和微流體技術。在進行單細胞轉(zhuǎn)錄分析之前，我們需要確定自己拿到了正確的細胞。如果你想要的細胞已經(jīng)處于懸浮狀態(tài)（比如循環(huán)腫瘤細胞），而且含量相對比較豐富，那么流式細胞分析將是你的理想選擇。如果樣本是實體組織，我們可以用酶分解掉膠原和其他細胞外蛋白。不過酶學消化對細胞影響較大，甚至可能改變基因轉(zhuǎn)錄情況。把組織細胞制成懸液之后，我們就可以通過特異性的熒光標簽分離出自己想要的細胞，進一步拿到單細胞是比較棘手的一步，可

單細胞分離對操作技術有比較高的要求2020/05/22

單細胞分離法是一種從待分離的材料中直接分離單個細胞進行培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)的方法。該法在顯微鏡下操作，對于體積較大的微生物，可以用毛細管提取微生物個體；對較小的細胞或孢子，可以用顯微針、鉤、環(huán)等挑取以獲得單細胞；也可將適當稀釋后的樣品制成小液滴，在顯微鏡下選取只含有一個細胞的液滴培養(yǎng)。毛細管分離法：對于較大的微生物，可采用毛細管提取單個個體，并在大量的滅菌培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)移清洗幾次，除去較小微生物的污染。這項操作可在低倍顯微鏡，如解剖顯微鏡下進行。顯微操作法：對于個體相對較小的微生物，需采用顯微操作儀，在顯

北京單細胞分選要考慮哪些問題？2020/05/21

北京單細胞分選技術，即利用優(yōu)化后的高通量測序技術分析每一個單個細胞的序列信息，從而更高分辨率地揭示細胞間的細胞差異以及其在微環(huán)境中的功能情況。那么問題就來了：1.如何獲得單個細胞？如果無法獲得單個細胞這一切都是不成立的。2.如何獲得大批量的單個細胞？單組織細胞群體在10E6以上，如果被檢測的測序細胞數(shù)量過小精確度不足。3.如何低成本地獲得大批量單個細胞？單細胞測序成本高，尤其是需要測2000~3000個以上的細胞的時候，如果單個細胞的分選成本也很高，技術根本無法普及。*傳統(tǒng)的生物學分析方法常見的

單細胞分離的關鍵技術有哪些？2020/05/13

相信許多實驗人員，都見過傳統(tǒng)的單細胞分離設備，傳統(tǒng)的分離方法主要有：口吸管技術、顯微操作法、激光顯微切割法及流式細胞法。操作者可以將組織內(nèi)單一細胞或細胞群切割下來進行研究，避免間質(zhì)細胞及一些炎癥細胞造成背景“污染”，可以了解到細胞的位置信息。但該方法相鄰細胞容易污染，另外在組織固定及激光切割的過程中可能會破壞細胞的完整性，對細胞核酸損傷較大，從而影響后續(xù)的遺傳物質(zhì)的擴增。分離微流控技術利用口吸管技術，操作者可以在顯微鏡下選擇形態(tài)較好的細胞，對細胞幾乎無損傷，因此下游實驗的成功率高，但對操作人員的

介紹單細胞培養(yǎng)的4種方法2020/04/26

單細胞培養(yǎng)是指酵母菌、細菌等單細胞生物的培養(yǎng)，或取多細胞生物體上的一個細胞的無菌培養(yǎng)。從多細胞生物中得到單細胞的辦法是，開始對切離的組織的初始培養(yǎng)物進行振蕩培養(yǎng)，然后在連續(xù)培養(yǎng)中用適當?shù)暮Y孔將游離的細胞分篩出來，再將收集起來的游離的單細胞懸浮在液體培養(yǎng)基中，用微量吸管吸取一個細胞。動物細胞的單細胞培養(yǎng)時，要適當稀釋接種，為使得到的單細胞進行增殖，可以采用微量培養(yǎng)法和保護培養(yǎng)法，對浮游的單細胞群進行平面培養(yǎng)。培養(yǎng)物的目的，在于可以得到來自單個細胞的細胞群的無性繁殖系。細胞培養(yǎng)有利于觀察細胞個體的分

單細胞測序的核心優(yōu)勢及產(chǎn)品特點2020/04/22

單細胞測序技術被廣泛應用于基礎科研和臨床研究。單細胞在許多領域都占有一席之地，對于癌癥早期的診斷、追蹤以及個體化治療具有重要意義。初次聽說細胞測序技術，又是什么噱頭？如果細胞測序就能測一個細胞或幾個細胞的話，這有什么意義？特別是對異質(zhì)性高的腫瘤組織來講，測一個細胞能代表什么？無論是蠕蟲，藍鯨，還是人類，自然界所有的多細胞生命都是從單個細胞發(fā)育而來開始。這樣一個單細胞，鬼斧神工地構建出有機生命體所需的各種組織、器官、系統(tǒng)。每個新細胞在正確的時間，在正確的地方分裂、分化，并與相鄰細胞協(xié)調(diào)精準發(fā)揮功能

研發(fā)針對晚期肝臟疾病的細胞治療方案2020/02/24

2020年2月20日，的單細胞分離系統(tǒng)提供商美國Namocell公司與TakaraBio及HepaTx聯(lián)合宣布三方合作研發(fā)針對晚期肝臟疾病的細胞治療方案，將HepaTx研發(fā)的可發(fā)育成肝臟細胞的脂肪組織內(nèi)干細胞，首先利用Namocell專有的單細胞分離儀進行分離，然后用TakaraBio的SMART-Seq®試劑盒進行單細胞RNA測序，開發(fā)針對晚期肝病以及肝衰竭的治療方案?！拔覀兒芨吲d與Takara及HepaTx合作。我們的單細胞分離平臺能夠迅速有效地分離和獲取HepaTx研發(fā)的可發(fā)育成肝臟細胞的

單細胞鋪板的三種手法2020/02/14

單細胞鋪板手法一：均勻單層。要鋪成那種很均勻的單層細胞，手法如下：1，細胞板子先加入一定量(一般是總量培養(yǎng)基的1/5)的培養(yǎng)基，放入孵箱中放置10-20min。2，在滴入細胞時，細胞板子與通風櫥有一定的角度，沿著板壁的孔邊緣滴入。3，滴入后，呈“8”字方法搖晃5-8次。4，置于水平臺上，放置10-20分鐘5，放入孵箱。在細胞鋪板時，每一種板子的孔面積有多大，培養(yǎng)的液體量以及加入細胞量。手法二：中間少，周圍多。其實細胞鋪板不一定都需要單個單個的那么均勻，比如，做免疫熒光時，學霸姐姐喜歡鋪中間少，周

上海單細胞分離日趨火爆的原因有哪些？2020/02/05

上海單細胞分離日趨火爆的原因有哪些？上海單細胞分離從異質(zhì)性的細胞群體中分離單細胞，目前主要有三種選擇：手動分離、熒光激活細胞分選和微流體技術。當然，除了成熟的方法，巧妙的新方法也在不斷涌現(xiàn)，能以更高的準確性和特異性來分離單細胞。如果你想要的細胞已經(jīng)處于懸浮狀態(tài)（比如循環(huán)腫瘤細胞），而且含量相對比較豐富，那么流式分選將是你的理想選擇。如果樣本是實體組織，我們可以用酶分解掉膠原和其他細胞外蛋白。不過，酶學消化對細胞影響較大，甚至可能改變基因轉(zhuǎn)錄情況。把組織細胞制備成懸液之后，我們就可以通過特異性的熒

你知道單細胞分析在研究細胞異質(zhì)性有哪些手段么2019/12/23

單細胞分析是研究細胞異質(zhì)性的有效手段研究細胞異質(zhì)性的關鍵就在于能否實現(xiàn)對單個細胞進行較多參數(shù)的分析，這就是“單細胞分析(singlecellanalysis)”的概念。事實上，自從“細胞”學說被提出后，人類一直在努力尋求分析單個細胞的技術方法。但是，單細胞分析有一個巨大的挑戰(zhàn)，那就是樣品量及其有限，一個典型的人類細胞僅含有約6.6pgDNA、10pg總RNA。從如此有限的樣品中獲取大量精確的數(shù)據(jù)無疑是一個巨大的挑戰(zhàn)。所以，傳統(tǒng)的高通量分析手段例如基因組學、轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組學等，往往只能基于大量細

了解一下什么是單細胞全轉(zhuǎn)錄組吧2019/12/11

單細胞全轉(zhuǎn)錄組測序技術是在單細胞水平對全轉(zhuǎn)錄組進行擴增與測序的一項新技術。MALBAC(MultipleAnnealingａndLoopingBasedAmplificationCycles，簡稱MALBAC)，即多次退火環(huán)狀循環(huán)擴增技術是該領域的先進技術，相關文章發(fā)表于《科學》(Science)。單細胞全轉(zhuǎn)錄組技術是在單細胞水平對全轉(zhuǎn)錄組進行擴增與測序的一項新技術。其原理是將分離的單個細胞的微量全轉(zhuǎn)錄組RNA進行擴增后進行高通量測序。對單個細胞轉(zhuǎn)錄組的分析由Brady等和Eberwine等分別