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一起來了解一下單細(xì)胞全基因組的測序技術(shù)吧2019/11/23
單細(xì)胞全基因組測序技術(shù)是在單細(xì)胞水平對全基因組進(jìn)行擴(kuò)增與測序的一項(xiàng)新技術(shù)。其原理是將分離的單個(gè)細(xì)胞的微量全基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增,獲得高覆蓋率的完整的基因組后進(jìn)行高通量測序用于揭示細(xì)胞群體差異和細(xì)胞進(jìn)化關(guān)系。從方法學(xué)角度來看,獲得高覆蓋率高保真性的全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物是準(zhǔn)確全面的測序結(jié)果的保障。多重置換擴(kuò)增(multipledisplacementamplification,MDA)利用隨機(jī)引物和等溫?cái)U(kuò)增可以獲得高保真的DNA大片段,但該方法的主要缺陷在于非平衡的基因組覆蓋率、擴(kuò)增偏倚、嵌合序列及非特
分享一下關(guān)于單克隆分離的方法有哪些2019/11/12
今天跟大家分享一下關(guān)于單克隆分離的方法有哪些吧,下面讓我們一起來看看吧。一、有限稀釋法材料:a、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板等;b、HT培養(yǎng)基;c、活力強(qiáng)的雜交瘤細(xì)胞;d、小鼠腹腔細(xì)胞。方法:a、制備小鼠腹腔細(xì)胞。同“細(xì)胞融合”一節(jié)中的方法。b、制備待克隆的雜交瘤細(xì)胞懸液,用含20%血清的HT培養(yǎng)基稀釋至每毫升含2.5、15和50個(gè)細(xì)胞三種不同的稀釋度。c、按每毫升加入5×104-1×105細(xì)胞的比例,在上述雜交瘤細(xì)胞懸液中分別加入腹腔巨噬細(xì)胞。d、每種雜交瘤細(xì)胞分裝96孔板一塊,每個(gè)稀釋度32孔,每孔量為
在使用單細(xì)胞鋪板可能會(huì)出現(xiàn)的問題2019/10/23
單細(xì)胞鋪板是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中常見又必須掌握的一門技術(shù),看似簡單,我們卻經(jīng)常遇到:如細(xì)胞居中或者中間稀疏等不均勻分布的現(xiàn)象,導(dǎo)致我們只能扔掉,重新鋪板。既耽擱時(shí)間又浪費(fèi)了細(xì)胞及培養(yǎng)板等資源。歷經(jīng)多次失敗后,才發(fā)現(xiàn)原來單細(xì)胞鋪板是有規(guī)律可循的,今天我們就聊一聊:細(xì)胞鋪板的技巧。首先,了解一下單細(xì)胞鋪板的必要性!從經(jīng)濟(jì)和的角度來說,需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇不同規(guī)格的培養(yǎng)板。如在進(jìn)行藥物對待測細(xì)胞半抑制率(IC50)測試時(shí),通常使用96孔板,一方面可以設(shè)置濃度梯度;另外還可一次性測多個(gè)藥物,減少實(shí)驗(yàn)誤差。下面我們
單細(xì)胞鋪板的選擇分享2019/10/17
傳統(tǒng)的單細(xì)胞鋪板一般采用手動(dòng)的有限稀釋法來進(jìn)行,這種方法在需要的操作簡單,只需要普通的排槍就能實(shí)現(xiàn),但是效果卻很不理想。主要體現(xiàn)在:一致性差,有效孔比例低下,耗費(fèi)時(shí)間等。近年來,單抗藥物的開發(fā)領(lǐng)域又被推上了一個(gè)新的高度,越來越多的公司都紛紛投入到這個(gè)熱潮當(dāng)中,隨之而來的相關(guān)法規(guī)的要求也是越來越嚴(yán)格。在眾多的要求當(dāng)中,fda對藥物來源的單克隆源性的要求非常嚴(yán)格,這就要求生產(chǎn)和研發(fā)的企業(yè)在細(xì)胞株開發(fā)階段做到嚴(yán)格的單克隆驗(yàn)證。目前市面上已經(jīng)有幾款孔板掃描設(shè)備能夠得到fda的認(rèn)可,他們的數(shù)據(jù)可以用來作為
Namocell單細(xì)胞分離儀在單細(xì)胞測序領(lǐng)域的應(yīng)用2019/09/27
Namocell單細(xì)胞分離儀在單細(xì)胞測序領(lǐng)域的應(yīng)用---Namocell參加2019細(xì)胞產(chǎn)業(yè)大會(huì)9月26至27日2019年細(xì)胞產(chǎn)業(yè)大會(huì)暨2019第四屆(上海)細(xì)胞與腫瘤醫(yī)療高峰論壇在上海新南雅酒店舉行。本屆會(huì)議,邀請了全國30位專家學(xué)者、人物演講、40家企業(yè)參展,400余人報(bào)名參會(huì),逾500人參加了會(huì)議,就細(xì)胞儲(chǔ)存、細(xì)胞治療、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程、細(xì)胞銀行、細(xì)胞能量與代謝、細(xì)胞免疫學(xué)、細(xì)胞生理學(xué)、細(xì)胞衰老、細(xì)胞病理學(xué)、再生醫(yī)學(xué)、生物冷鏈、生物樣本庫、醫(yī)療等議題,開展內(nèi)容豐富、形式多樣的學(xué)術(shù)交流及主
單細(xì)胞分選的使用方法及用途2019/09/20
單細(xì)胞分選的使用方法及用途單細(xì)胞分選用流式細(xì)胞儀將特定的細(xì)胞分選出來的技術(shù),在分選前,細(xì)胞要被戴上特殊的符號,所用的符號細(xì)胞的探針是可以同待分選細(xì)胞外表特征性蛋白(抗原)結(jié)合的抗體,而這種抗體又可以同某種熒光染料結(jié)合。當(dāng)結(jié)合有熒光染料的探針與細(xì)胞群溫育時(shí),探針就會(huì)同具有特異外表抗原的細(xì)胞緊緊結(jié)合,因?yàn)榭贵w的結(jié)合,被結(jié)合的細(xì)胞帶上了熒光符號,細(xì)胞被符號之后,除掉游離的抗體,并將細(xì)胞進(jìn)行稀釋。當(dāng)稀釋的細(xì)胞進(jìn)入超聲波振蕩器時(shí),極稀的細(xì)胞懸浮液形成很小的液滴,一個(gè)液滴中只含有一個(gè)細(xì)胞。液滴一旦形成并經(jīng)過
單細(xì)胞分離確保了分析結(jié)果的高精度2019/09/11
單細(xì)胞分離確保了分析結(jié)果的高精度單細(xì)胞分離是一種從待分離的材料中直接分離單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)的方法。該法在顯微鏡下操作,對于體積較大的微生物,可以用毛細(xì)管提取微生物個(gè)體;對較小的細(xì)胞或孢子,可以用顯微針、鉤、環(huán)等挑取以獲得單細(xì)胞;也可將適當(dāng)稀釋后的樣品制成小液滴,在顯微鏡下選取只含有一個(gè)細(xì)胞的液滴培養(yǎng)。對于較大的微生物,可采用毛細(xì)管提取單個(gè)個(gè)體,并在大量的滅菌培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)移清洗幾次,除去較小微生物的污染,這項(xiàng)操作可在低倍顯微鏡,如解剖顯微鏡下進(jìn)行。對于個(gè)體相對較小的微生物,單細(xì)胞分離采用顯微
單細(xì)胞分析是研究細(xì)胞異質(zhì)性的有效手段2019/08/26
單細(xì)胞分析是研究細(xì)胞異質(zhì)性的有效手段單細(xì)胞分析研究細(xì)胞異質(zhì)性的關(guān)鍵就在于能否實(shí)現(xiàn)對單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行較多參數(shù)的分析,這就是“單細(xì)胞分析”的概念。事實(shí)上,自從“細(xì)胞”學(xué)說被提出后,人類一直在努力尋求分析單個(gè)細(xì)胞的技術(shù)方法。但是,單細(xì)胞分析有一個(gè)巨大的挑戰(zhàn),那就是樣品量及其有限,一個(gè)典型的人類細(xì)胞僅含有約6.6pgDNA、10pg總RNA,從如此有限的樣品中獲取大量的數(shù)據(jù)無疑是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)。所以,傳統(tǒng)的高通量分析手段例如基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組學(xué)等,往往只能基于大量細(xì)胞進(jìn)行分析,得到的也是大量細(xì)胞的平
單細(xì)胞基因表達(dá)分析在基因表達(dá)研究中占有越來越重要的地位2019/08/21
單細(xì)胞基因表達(dá)分析在基因表達(dá)研究中占有越來越重要的地位單細(xì)胞基因表達(dá)分析是一種快速分析基因表達(dá)信息的技術(shù),它通過快速和詳細(xì)分析成千上萬個(gè)表達(dá)序列標(biāo)簽來尋找出表達(dá)豐度不同的SAGE標(biāo)簽序列,從而接近完整地獲得基因組表達(dá)信息。單細(xì)胞基因表達(dá)分析技術(shù)與基因芯片一起為目前兩種常見的基因表達(dá)譜研究方法。隨著第三代測序技術(shù)的發(fā)展,通過構(gòu)建cDNA文庫,然后利用第二代測序技術(shù)的高通量優(yōu)勢對mRNA文庫進(jìn)行測序,進(jìn)而進(jìn)行基因表達(dá)譜分析的方法在基因表達(dá)譜研究中占有越來越重要的地位。單細(xì)胞基因表達(dá)分析又稱定量即時(shí)聚
單細(xì)胞分離用于細(xì)胞鋪板的原理2019/07/25
單細(xì)胞分離用于細(xì)胞鋪板的原理單細(xì)胞分離儀為細(xì)胞鋪板提供了全新解決方案。該設(shè)備采用新的微流體技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)快速,,準(zhǔn)確的細(xì)胞鋪板工作并且分離過程輕柔,不會(huì)影響細(xì)胞的后續(xù)生長,能廣泛應(yīng)用于單抗開發(fā)中的CLD環(huán)節(jié),以及單細(xì)胞測序等。單細(xì)胞分離用于細(xì)胞鋪板的原理如下:將細(xì)胞通過一次性的芯片上端加樣孔,注入到芯片腔體中。單細(xì)胞流在微流控通道中流過激光檢測區(qū)域,機(jī)器能對細(xì)胞進(jìn)行識別,去除掉細(xì)胞碎片,死細(xì)胞以及狀態(tài)較差的細(xì)胞,使得落到孔板中的細(xì)胞都具有很好的活性。高速電子閥門能夠捕獲每一個(gè)活性細(xì)胞,終形成1ul
單克隆篩選的加藥時(shí)間和維持濃度2019/07/18
單克隆篩選的加藥時(shí)間和維持濃度由于基因轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)之后要一段時(shí)間才能表達(dá)出蛋白質(zhì),所以單克隆篩選不能太早;但是也不能太晚,因?yàn)檗D(zhuǎn)染了外源基因的細(xì)胞代謝負(fù)荷較大,增值較慢,時(shí)間長了就會(huì)被沒有外源基因轉(zhuǎn)入的細(xì)胞所淹沒,終導(dǎo)致單克隆篩選不出陽性克隆,一般要在轉(zhuǎn)染24小時(shí)之后才開始篩選。隨著細(xì)胞的代謝的濃度和活性都回下降,所以每3~5天都要更換一次篩選液,這時(shí)藥物濃度可以降至200ug/ml。加抗生素的時(shí)機(jī),主要是考慮插入到細(xì)胞基因組的抗性基因是否已經(jīng)得到表達(dá),一般是轉(zhuǎn)染48小時(shí)后加入抗生素,挑出單克隆
上海單細(xì)胞分離巧妙的新方法在不斷涌現(xiàn)2019/06/25
上海單細(xì)胞分離巧妙的新方法在不斷涌現(xiàn)上海單細(xì)胞分離是單細(xì)胞研究中困難的步驟之一,目前的單細(xì)胞分離策略主要分為三類:手動(dòng)分離、熒光激活的細(xì)胞分選和微流體技術(shù)。在進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄分析之前,我們需要確定自己拿到了正確的細(xì)胞。如果你想要的細(xì)胞已經(jīng)處于懸浮狀態(tài)(比如循環(huán)腫瘤細(xì)胞),而且含量相對比較豐富,那么流式細(xì)胞分析將是你的理想選擇。如果樣本是實(shí)體組織,我們可以用酶分解掉膠原和其他細(xì)胞外蛋白。不過酶學(xué)消化對細(xì)胞影響較大,甚至可能改變基因轉(zhuǎn)錄情況。把組織細(xì)胞制成懸液之后,我們就可以通過特異性的熒光標(biāo)簽分離出
北京單細(xì)胞分選整體結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)合理2019/06/23
北京單細(xì)胞分選整體結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)合理北京單細(xì)胞分選可實(shí)現(xiàn)同時(shí)在三個(gè)數(shù)量級上測量散射光信號的特性,適當(dāng)?shù)牟ㄩL選擇則可將檢測范圍擴(kuò)大至405–640nm,從而可對較小和較大的顆粒進(jìn)行檢測,借助該儀器,研究人員可對品類繁多的生物樣本進(jìn)行研究工作,從微粒體到巨噬細(xì)胞,從星型膠質(zhì)細(xì)胞到異種移植體,全都可以進(jìn)行分析和分選。該儀器還可用于一些非生物學(xué)應(yīng)用,比如瓊脂糖凝膠液滴、金納米粒子或環(huán)境顆粒;或者單細(xì)胞研究,比如循環(huán)腫瘤細(xì)胞、新藥研發(fā)、稀有分析、干細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞以及微生物生態(tài)和生理學(xué)等。北京單細(xì)胞分選是一款空氣
細(xì)胞基因表達(dá)分析增加了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性2019/05/29
細(xì)胞基因表達(dá)分析增加了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性細(xì)胞基因表達(dá)分析與芯片可以為眾多研究生成高質(zhì)量的數(shù)據(jù),其精心挑選的內(nèi)容提供超過180萬種預(yù)設(shè)計(jì)的引物/探針套裝,覆蓋超過30個(gè)物種,基于研究需求,通量和目標(biāo)數(shù)量,具有預(yù)配置,可配置或自定義選項(xiàng)等可用規(guī)格。細(xì)胞基因表達(dá)分析核酸標(biāo)準(zhǔn)品與新一代測序文庫的稀有目標(biāo)檢測和定量,可以在進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)之前對DNA進(jìn)行擴(kuò)增,它可以增加用于后續(xù)反應(yīng)的DNA而不改變樣本中DNA的相對量,該方法可以用來進(jìn)行單細(xì)胞研究。細(xì)胞基因表達(dá)分析通過將逆轉(zhuǎn)錄(RT)和實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增(qP
單細(xì)胞挑選的使用范圍越來越廣闊2019/05/06
單細(xì)胞挑選的使用范圍越來越廣闊單細(xì)胞挑選顯微操作法是通過鏡檢,對單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行人工挑選的方法,在制備好適宜濃度的細(xì)胞懸浮液后,可置于顯微鏡下觀察,利用口吸管(可由玻璃毛細(xì)管拉制而成)將目標(biāo)細(xì)胞吸取出來。條件允許的話,還可使用顯微操作儀,該儀器對口吸管、注射儀、毛細(xì)針有一定的固定、調(diào)節(jié)功能,可在一定程度上增加操作的通量以及穩(wěn)定性。如果對通量要求較高,同時(shí)目標(biāo)細(xì)胞有適宜的熒光標(biāo)記,可利用流式細(xì)胞儀完成單細(xì)胞挑選。經(jīng)熒光染色或標(biāo)記的單細(xì)胞懸液,被高壓壓入流動(dòng)室內(nèi),在鞘液的包裹和推動(dòng)下,細(xì)胞被排成單列,以
單細(xì)胞基因組具有安全便捷的優(yōu)點(diǎn)2019/05/06
單細(xì)胞基因組具有安全便捷的優(yōu)點(diǎn)單細(xì)胞基因組可以揭示出每個(gè)細(xì)胞*的微妙變化,甚至可以揭示全新的細(xì)胞類型。單細(xì)胞測序技術(shù)可謂是科技發(fā)展*的一大創(chuàng)舉,它極大地推進(jìn)了基因組學(xué)領(lǐng)域,使不同細(xì)胞類型得以精細(xì)區(qū)分,使得科學(xué)家們在單細(xì)胞水平進(jìn)行分子機(jī)制研究成為可能。單細(xì)胞基因組顯微操作技術(shù)提供了獲得少量細(xì)胞的替代方法,我們可以通過直接特定位置摘取單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行測序,但是這種方法依賴于人工操作,無法實(shí)現(xiàn)高通量進(jìn)行。在多細(xì)胞生物體中,由于細(xì)胞存在著有絲分裂,在傳代過程中DNA復(fù)制存在著各種各樣的突變,這些突變通過積累
單克隆分離深受廣大客戶的好評2019/05/05
單克隆分離深受廣大客戶的好評單克隆分離采用的是集流式細(xì)胞術(shù)和微流控技術(shù)于一體的新一代細(xì)胞分離技術(shù)。流式細(xì)胞儀的流體聚焦技術(shù)能夠極大地提高檢測靈敏度,另外微流控技術(shù)使得設(shè)備內(nèi)部的鞘液壓力可以降至2psi以下,也無需高頻振蕩,減少了分選過程對細(xì)胞的傷害,大大提高了分選出來的細(xì)胞的活性,適用脆弱細(xì)胞的分離。另外,一次性芯片真正實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞分選過程中,樣本之間的*隔離(從加樣到分離全都在芯片中完成)。“單克隆分離頭”利用聚丙稀導(dǎo)入頭細(xì)長柔韌無斷裂且導(dǎo)通的特性,將試劑、糊劑等材料直接送入細(xì)長多彎深孔處,有通
單克隆鋪板的開發(fā)領(lǐng)域又被推上了一個(gè)新的高度2019/05/05
單克隆鋪板的開發(fā)領(lǐng)域又被推上了一個(gè)新的高度單克隆鋪板為細(xì)胞鋪板提供了全新解決方案,該設(shè)備采用新的微流體技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)快速,,準(zhǔn)確的細(xì)胞鋪板工作。并且分離過程輕柔,不會(huì)影響細(xì)胞的后續(xù)生長,能廣泛應(yīng)用于單抗開發(fā)中的CLD環(huán)節(jié),以及單細(xì)胞測序等。單克隆鋪板是一款基于有限稀釋的基礎(chǔ)上研發(fā)的全自動(dòng)細(xì)胞鋪板工具,有別于其他類型的細(xì)胞鋪板工具,它的整合了細(xì)胞成像系統(tǒng),細(xì)胞識別系統(tǒng)及自動(dòng)加樣系統(tǒng),在進(jìn)行鋪板后能夠快速識別出是否有細(xì)胞被分配到孔里,對沒有分配到細(xì)胞的孔進(jìn)行重復(fù)操作,直到分配有細(xì)胞為止,能夠大大提高一
單細(xì)胞鋪板使用過程安全可靠2019/04/30
單細(xì)胞鋪板使用過程安全可靠單細(xì)胞鋪板可以根據(jù)熒光條件篩選,也可以不染色直接鋪板,一次性芯片,保證樣本之間*隔離;儀器體積小巧,可置于超凈臺中,96孔板分選不到1min,384孔板4min以內(nèi),單克隆率超過95%,儀器操作簡單,無需專人操作維護(hù)。傳統(tǒng)的細(xì)胞鋪板一般采用手動(dòng)的有限稀釋法來進(jìn)行,這種方法在需要的操作簡單,只需要普通的排槍就能實(shí)現(xiàn),但是效果卻很不理想。主要體現(xiàn)在:一致性差,有效孔比例低下,費(fèi)時(shí)間等。近年來,單抗藥物的開發(fā)領(lǐng)域又被推上了一個(gè)新的高度,越來越多的公司都紛紛投入到這個(gè)熱潮當(dāng)中,
上海單細(xì)胞分離提高了實(shí)驗(yàn)的靈敏度和效率2019/04/30
上海單細(xì)胞分離提高了實(shí)驗(yàn)的靈敏度和效率上海單細(xì)胞分離是在單細(xì)胞研究中使用廣泛的技術(shù),其高出其他方法幾個(gè)數(shù)量級的篩選能力和富集細(xì)胞的特性讓前面提到的技術(shù)*。上海單細(xì)胞分離在基礎(chǔ)研究和臨床中的使用已經(jīng)成熟。但是,由于對已知免疫特征的依賴,它無法被用來篩選特征未知的異質(zhì)細(xì)胞,而單細(xì)胞研究的主旨就是發(fā)現(xiàn)未知,這導(dǎo)致其在生物探索領(lǐng)域的功用存在缺憾。另一方面,上海單細(xì)胞分離的優(yōu)勢是富集具有同質(zhì)免疫特性的細(xì)胞,但產(chǎn)物仍然是許多細(xì)胞的懸浮液,將其應(yīng)用于單細(xì)胞分選需要比較繁瑣的改進(jìn),且仍然缺乏簡便有效的驗(yàn)證方法,
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