Annexin V-FITC / PI雙染凋亡檢測試劑盒

Annexin V-FITC / PI雙染凋亡檢測試劑盒

檢測原理

實(shí)驗(yàn)操作指南步驟 

一步法

1．細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)，300 g 離心 5 min，棄上清，收集細(xì)胞，PBS 洗滌一次，輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。注：本品僅在懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞中驗(yàn)證，良好的細(xì)胞狀態(tài)是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。貼壁生長的細(xì)胞用于凋亡檢測時(shí)，可能會因?yàn)橐让赶?、吹打等處理?dǎo)致細(xì)胞的壞死或凋亡，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能存在不可控的影響，請謹(jǐn)慎處理。

 2．取 1~5 × 105重懸的細(xì)胞，300 g 離心 5 min，棄上清。用 PBS 洗滌細(xì)胞一次，離心后棄上清，加入 500 μL 稀釋的 1 × Annexin V Binding Buffer 工作液重懸細(xì)胞。 

3．細(xì)胞懸液中加入 5 μL 的 Annexin V-FITC 和 5 μL 的 PI 染色液。 

4．輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育 15~20 min。

5．反應(yīng)完成后立即上機(jī)檢測。如不能及時(shí)檢測，請于冰上避光靜置并于 1 小時(shí)內(nèi)完成檢測。注：a)流式細(xì)胞儀檢測請取陰性樣本（如未經(jīng)藥物處理的活細(xì)胞）進(jìn)行 Annexin V-FITC 和 PI 雙染，作為陰性對照；另取陽性樣本（如毒性藥物處理的細(xì)胞）分別進(jìn)行 Annexin V-FITC 和 PI 單染，作為調(diào)節(jié)熒光補(bǔ)償?shù)膯侮枌φ?。b)流式細(xì)胞儀檢測時(shí) Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，PI 優(yōu)先選擇 PerCP/Cy5.5 通道，其次是 ECD 通道。

兩步法 

1．細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)，300 g 離心 5 min，棄上清，收集細(xì)胞，PBS 洗滌一次，輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。注：本品僅在懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞中驗(yàn)證，良好的細(xì)胞狀態(tài)是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。貼壁生長的細(xì)胞用于凋亡檢測時(shí)，可能會因?yàn)橐让赶⒋荡虻忍幚韺?dǎo)致細(xì)胞的壞死或凋亡，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能存在不可控的影響，請謹(jǐn)慎處理。 

2．取 1~5 × 105重懸的細(xì)胞，300 g 離心 5 min，棄上清。用 PBS 洗滌細(xì)胞一次，離心后棄上清，加入 100 μL 稀釋的 1 × Annexin V Binding Buffer 工作液重懸細(xì)胞。 

3．細(xì)胞懸液中加入 2.5 μL 的 Annexin V-FITC 和 2.5 μL 的 PI 染色液。（由于兩步法分辨率更高，染色液用量減半依然可得到媲美一步法的效果；用戶亦可根據(jù)自己的模型進(jìn)行滴定后加入適量的染色液，用更少的量獲得高質(zhì)量的結(jié)果。）4．輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育 15~20 min。 

5．加入 400 μL 稀釋的 1 × Annexin V Binding Buffer，混勻樣本。

 6．立即上機(jī)檢測。如不能及時(shí)檢測，請于冰上避光靜置并于 1 小時(shí)內(nèi)完成檢測。注：a)流式細(xì)胞儀檢測請取陰性樣本（如未經(jīng)藥物處理的活細(xì)胞）進(jìn)行 Annexin V-FITC 和 PI 雙染，作為陰性對照；另取陽性樣本（如毒性藥物處理的細(xì)胞）分別進(jìn)行 FITC 和 PI 單染，作為調(diào)節(jié)熒光補(bǔ)償?shù)膯侮枌φ铡)流式細(xì)胞儀檢測時(shí) Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，PI 優(yōu)先選擇 PerCP/Cy5.5 通道，其次是 ECD 通道。