您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)! 登錄| 免費(fèi)注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
當(dāng)前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>核酸提取>> 31013高純度質(zhì)粒小提試劑盒(離心柱型)核酸提取
參 考 價(jià) | 面議 |
產(chǎn)品型號31013
品 牌NobleRyder/諾博萊德
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地北京市
更新時(shí)間:2025-04-22 16:13:22瀏覽次數(shù):74次
聯(lián)系我時(shí),請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50次/100次/200次 |
---|---|---|---|
貨號 | 31013 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
主要用途 | 本試劑盒用于高純度質(zhì)粒DNA的小量制備。 |
諾博萊德 高純度質(zhì)粒小提試劑盒(離心柱型)核酸提取
HiPure Plasmid Mini Kit高純度質(zhì)粒小量快速提試劑盒
目錄號:31013
產(chǎn)品組成 | 保存 | 31013-50 | 31013-100 | 31013-200 |
平衡液 | 室溫 | 5 ml | 10 ml | 20 ml |
溶液 P1 | 室溫 | 15 ml | 25 ml | 50 ml |
溶液 P2 | 室溫 | 15 ml | 25 ml | 50 ml |
溶液 P3 | 室溫 | 20 ml | 35 ml | 70 ml |
去蛋白液 PE | 室溫 | 16 ml | 31.5 ml | 63 ml |
漂洗液 WB | 室溫 | 13 ml | 25 ml | 50 ml |
洗脫緩沖液 EB | 室溫 | 10 ml | 15 ml | 20 ml |
RNase A (10 mg/ml) | -20℃ | 150 ul | 250 ul | 500 ul |
吸附柱和收集管 | 室溫 | 50 套 | 100 套 | 200 套 |
保存條件:
在室溫(15~ 25℃)干燥條件下,可保存12個(gè)月。加入RNaseA后的溶液P1應(yīng)置于 2 ~ 8℃保存,可穩(wěn)定保存6個(gè)月,如果P1中RNase A失活,重新補(bǔ)加即可。
本試劑盒用于高純度質(zhì)粒DNA的小量制備。菌體經(jīng)堿裂解、高鹽、低pH處理,質(zhì)粒可從菌體中釋放出來,并特異、高效地被離心吸附柱吸附。通過清洗液的洗滌可去除雜質(zhì),在低鹽、高pH條件下洗脫,最后得到純度較高的質(zhì)粒 DNA。所得質(zhì)粒可直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、PCR、RT-qPCR、測序及轉(zhuǎn)染等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
1.得率高:1.5-4.5ml可提出多達(dá)10–20ug的純凈質(zhì)粒;
2.純度高:沉淀致密,去雜質(zhì)徹di干凈;
3. 高效:操作簡便,快捷,節(jié)約時(shí)間。
1.使用前請先檢查平衡液、溶液P2和溶液P3是否出現(xiàn)渾濁,如有混濁現(xiàn)象,可在37℃水浴中加熱幾分鐘,即可恢復(fù)澄清。
2.細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間一般為12~16小時(shí),過度培養(yǎng)會降低質(zhì)粒質(zhì)量甚至導(dǎo)致質(zhì)粒DNA突變;
3.注意溶液P1,P2和P3的用量比例,若細(xì)菌量增大,需按比例放大這些溶液的使用量;
4.隨菌體增多應(yīng)延長溶液 P2 的作用時(shí)間,直至溶液成粘稠透明狀,但時(shí)間過長會導(dǎo)致質(zhì)粒DNA變性。
5.質(zhì)粒的產(chǎn)量跟細(xì)菌量、質(zhì)粒拷貝數(shù)、質(zhì)粒大小和操作規(guī)范程度密切相關(guān),一般1.5ml過夜培養(yǎng)菌體可收獲約10ug高拷貝質(zhì)粒。
一、第一次使用前請先在去蛋白液PE、漂洗液WB中加入指ding量無水乙醇(見瓶身標(biāo)簽),充分混勻,并做好標(biāo)記,以免多次加入。
二、首ci使用時(shí)請先將 RNaseA全部加到溶液P1中,混勻,每次使用后置于2~8℃保存。
1. 柱平衡:向吸附柱中(吸附柱放入收集管中)加入100ul的平衡液,12,000rpm離心1min,棄收集管中濾液,將吸附柱重新放回收集管中。
2.取1~5ml過夜培養(yǎng)的菌液,室溫12,000rpm離心30sec,盡量倒干上清,收集菌體。
(注意:根據(jù)菌液的濃度決定取液量,濃度高時(shí)取1.5ml菌液離心即可,濃度低時(shí)可多收集一次)
3. 加入250ul溶液P1,重懸菌體沉淀,渦旋震蕩至徹di懸浮。
(注意:如有未徹di懸浮的菌塊會影響裂解,導(dǎo)致提取的質(zhì)粒濃度及純度降低)
4. 加入250ul溶液P2,溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次,使菌體充分裂解,室溫放置4min。
(注意:不可劇烈震蕩,以免造成基因組 DNA 片段的污染,所用時(shí)間不要超過5min,以免質(zhì)粒受到破壞,如未完quan變得清亮,可能是菌體太多,可增加溶液P2的用量,在后續(xù)的操作中溶液P3的用量也要相應(yīng)增加)
5.加入350ul溶液P3,立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8 次,充分混勻時(shí)會出現(xiàn)白色絮狀沉淀,然后室溫12,000rpm離心10min。
(注意:加入溶液P3后應(yīng)立即混合,避免產(chǎn)生SDS的局部沉淀)
6. 將上清液轉(zhuǎn)移到吸附柱中,室溫12,000rpm離心1min,質(zhì)粒被吸附在膜上,棄濾液。
7.可選步驟:向吸附柱中加入500ul去蛋白液PE,室溫12,000rpm離心1min,棄濾液。
(注意:去蛋白液PE為濃縮液,按要求加入無水乙醇,用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋,以防酒精揮發(fā))
(注意:如果宿主菌是endA-,如DH5α,此步驟可省略。如果宿主菌是 endA+,如 TG1、BL21、 HB101、JM101等,此步驟不可省略,因這些宿主菌含有大量的核酸酶,易降解質(zhì)粒。如果提取低拷貝質(zhì)粒也推薦采用此步驟)
8. 加入600ul漂洗液 WB,室溫12,000rpm離心30sec,棄濾液。
(注意:漂洗液WB為濃縮液,按要求加入無水乙醇,用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋,以防酒精揮發(fā))
9. 重復(fù)步驟8一次。
10. 室溫12,000rpm離心2min,甩干殘留液體。
(注意:此步不能省略,否則殘留乙醇會影響質(zhì)粒的后續(xù)使用)
11. 將吸附柱置于一個(gè)新的1.5 ml離心管(自備)中,加入50~100 ul的洗脫緩沖液EB,室溫放置2 min,12,000 rpm離心1 min,離心管底溶液即質(zhì)粒DNA。
(注意:事先在 65~70℃水浴中預(yù)熱洗脫緩沖液EB,可增加洗脫效率;如果需要較多量質(zhì)粒,可將得到的溶液重新加入吸附柱中,再次離心1min 收集;如需使用去離子水洗脫,可用NaOH調(diào)整其pH值在7.0 -8.5之間。)
如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?;虼笥?0kb 的大質(zhì)粒,應(yīng)加大菌體使用量,使用 5~10ml過夜培養(yǎng)物,同時(shí)按照比例增加溶液P2、P2、P3的用量,脫緩沖液EB應(yīng)在65℃水浴預(yù)熱,在吸附和洗脫時(shí)可以適當(dāng)延長時(shí)間,以增加提取效率,其它步驟相同。
高純度質(zhì)粒小提試劑盒(離心柱型)核酸提取
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),化工儀器網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn),建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。