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北京諾博萊德科技有限公司
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當(dāng)前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>核酸提取>> 31013高純度質(zhì)粒小提試劑盒(離心柱型)核酸提取

高純度質(zhì)粒小提試劑盒(離心柱型)核酸提取

參  考  價(jià)面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號31013

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地北京市

更新時(shí)間:2025-04-22 16:13:22瀏覽次數(shù):74次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50次/100次/200次
貨號 31013 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 本試劑盒用于高純度質(zhì)粒DNA的小量制備。
本試劑盒用于高純度質(zhì)粒DNA的小量制備。菌體經(jīng)堿裂解、高鹽、低pH處理,質(zhì)??蓮木w中釋放出來,并特異、高效地被離心吸附柱吸附。通過清洗液的洗滌可去除雜質(zhì),在低鹽、高pH條件下洗脫,最后得到純度較高的質(zhì)粒 DNA。所得質(zhì)??芍苯佑糜诿盖小⑥D(zhuǎn)化、PCR、RT-qPCR、測序及轉(zhuǎn)染等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
高純度質(zhì)粒小提試劑盒(離心柱型)核酸提取

諾博萊德 高純度質(zhì)粒小提試劑盒(離心柱型)核酸提取


HiPure Plasmid Mini Kit高純度質(zhì)粒小量快速提試劑盒

目錄號:31013

產(chǎn)品內(nèi)容:

產(chǎn)品組成

保存

31013-50

31013-100

31013-200

平衡液

室溫

ml

10 ml

20 ml

溶液 P1

室溫

15 ml

25 ml

50 ml

溶液 P2

室溫

15 ml

25 ml

50 ml

溶液 P3

室溫

20 ml

35 ml

70 ml

去蛋白液 PE

室溫

16 ml

31.5 ml

63 ml

漂洗液 WB

室溫

13 ml

25 ml

50 ml

洗脫緩沖液 EB

室溫

10 ml

15 ml

20 ml

RNase A (10 mg/ml)

-20℃

150 ul

250 ul

500 ul

吸附柱和收集管

室溫

50 

100 

200 

保存條件:

在室溫(15~ 25℃)干燥條件下,可保存12個(gè)月。加入RNaseA后的溶液P1應(yīng)置于 2 ~ 8℃保存,可穩(wěn)定保存6個(gè)月,如果P1RNase A失活,重新補(bǔ)加即可。


具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)


產(chǎn)品簡介:

本試劑盒用于高純度質(zhì)粒DNA的小量制備。菌體經(jīng)堿裂解、高鹽、低pH處理,質(zhì)粒可從菌體中釋放出來,并特異、高效地被離心吸附柱吸附。通過清洗液的洗滌可去除雜質(zhì),在低鹽、高pH條件下洗脫,最后得到純度較高的質(zhì)粒 DNA。所得質(zhì)粒可直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、PCR、RT-qPCR、測序及轉(zhuǎn)染等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn):

1.得率高:1.5-4.5ml可提出多達(dá)1020ug的純凈質(zhì)粒;

2.純度高:沉淀致密,去雜質(zhì)徹di干凈;

3. 高效:操作簡便,快捷,節(jié)約時(shí)間。

注意事項(xiàng):

1.使用前請先檢查平衡液、溶液P2和溶液P3是否出現(xiàn)渾濁,如有混濁現(xiàn)象,可在37℃水浴中加熱幾分鐘,即可恢復(fù)澄清。

2.細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間一般為12~16小時(shí),過度培養(yǎng)會降低質(zhì)粒質(zhì)量甚至導(dǎo)致質(zhì)粒DNA突變;

3.注意溶液P1,P2P3的用量比例,若細(xì)菌量增大,需按比例放大這些溶液的使用量;

4.隨菌體增多應(yīng)延長溶液 P2 的作用時(shí)間,直至溶液成粘稠透明狀,但時(shí)間過長會導(dǎo)致質(zhì)粒DNA變性。

5.質(zhì)粒的產(chǎn)量跟細(xì)菌量、質(zhì)粒拷貝數(shù)、質(zhì)粒大小和操作規(guī)范程度密切相關(guān),一般1.5ml過夜培養(yǎng)菌體可收獲約10ug高拷貝質(zhì)粒。

重要提示:

一、第一次使用前請先在去蛋白液PE、漂洗液WB中加入指ding量無水乙醇(見瓶身標(biāo)簽充分混勻,并做好標(biāo)記,以免多次加入。

二、首ci使用時(shí)請先將 RNaseA全部加到溶液P1中,混勻,每次使用后置于2~8℃保存。

操作步驟:

1.  柱平衡:向吸附柱中(吸附柱放入收集管中)加入100ul的平衡液,12,000rpm離心1min,棄收集管中濾液,將吸附柱重新放回收集管中。

2.1~5ml過夜培養(yǎng)的菌液,室溫12,000rpm離心30sec,盡量倒干上清,收集菌體。

注意:根據(jù)菌液的濃度決定取液量,濃度高時(shí)取1.5ml菌液離心即可,濃度低時(shí)可多收集一次

3. 加入250ul溶液P1,重懸菌體沉淀,渦旋震蕩至徹di懸浮。

(注意:如有未徹di懸浮的菌塊會影響裂解,導(dǎo)致提取的質(zhì)粒濃度及純度降低

4. 加入250ul溶液P2,溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次,使菌體充分裂解,室溫放置4min。

注意:不可劇烈震蕩,以免造成基因組 DNA 片段的污染,所用時(shí)間不要超過5min,以免質(zhì)粒受到破壞,如未完quan變得清亮,可能是菌體太多,可增加溶液P2的用量,在后續(xù)的操作中溶液P3用量也要相應(yīng)增加)

5.加入350ul溶液P3,立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8 次,充分混勻時(shí)會出現(xiàn)白色絮狀沉淀,然后室溫12,000rpm離心10min。

(注意:加入溶液P3后應(yīng)立即混合,避免產(chǎn)生SDS的局部沉淀)

6. 將上清液轉(zhuǎn)移到吸附柱中,室溫12,000rpm離心1min,質(zhì)粒被吸附在膜上,棄濾液。

7.可選步驟:向吸附柱中加入500ul去蛋白液PE,室溫12,000rpm離心1min,棄濾液。

(注意:去蛋白液PE為濃縮液,按要求加入無水乙醇,用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋,以防酒精揮發(fā)

注意:如果宿主菌是endA-,如DH5α,此步驟可省略。如果宿主菌是 endA+,如 TG1、BL21、 HB101JM101等,此步驟不可省略,因這些宿主菌含有大量的核酸酶,易降解質(zhì)粒。如果提取低拷貝質(zhì)粒也推薦采用此步驟)

8. 加入600ul漂洗液 WB,室溫12,000rpm離心30sec,棄濾液。

(注意:漂洗液WB為濃縮液,按要求加入無水乙醇,用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋,以防酒精揮發(fā)

9. 重復(fù)步驟8一次。

10.   室溫12,000rpm離心2min,甩干殘留液體。

(注意:此步不能省略,否則殘留乙醇會影響質(zhì)粒的后續(xù)使用

11.  將吸附柱置于一個(gè)新的1.5 ml離心管(自備)中,加入50~100 ul的洗脫緩沖液EB,室溫放置2 min,12,000 rpm離心1 min,離心管底溶液即質(zhì)粒DNA。

注意:事先在 65~70℃水浴中預(yù)熱洗脫緩沖液EB,可增加洗脫效率;如果需要較多量質(zhì)粒,可將得到的溶液重新加入吸附柱中,再次離心1min 收集;如需使用去離子水洗脫,可用NaOH調(diào)整其pH7.0 -8.5之間。

低拷貝或大質(zhì)粒(>10kb)提取

如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?;虼笥?0kb 的大質(zhì)粒,應(yīng)加大菌體使用量,使用 5~10ml過夜培養(yǎng)物,同時(shí)按照比例增加溶液P2、P2、P3的用量,脫緩沖液EB應(yīng)在65℃水浴預(yù)熱,在吸附和洗脫時(shí)可以適當(dāng)延長時(shí)間,以增加提取效率,其它步驟相同。


高純度質(zhì)粒小提試劑盒(離心柱型)核酸提取

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