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細胞轉染技術簡介

來源:深圳欣博盛生物科技有限公司   2016年12月13日 14:31  

    細胞轉染技術是將外源基因導入真核細胞內(nèi)的一種實驗技術。常規(guī)轉染技術分為穩(wěn)定轉染(*轉染)和瞬時轉染兩類。穩(wěn)定轉染是指外源DNA 既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體存在。瞬時轉染則指外源DNA/RNA 不整合到宿主染色體中,一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達,但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析。

    轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例;化學介導方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法,有較為原始的原生質體轉染,和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。

 

各種轉染方法的比較

 

轉染方法

原理

應用

特點

電穿孔法

高脈沖電壓破壞細胞膜電位,DNA通過膜上形成的小孔導入

穩(wěn)定轉染,瞬時轉染均適用。

適用性廣但細胞致死率高;DNA 和細胞用量大; 需根據(jù)不同細胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件。

顯微注射

用顯微操作將DNA 直接注入靶細胞核

適用于穩(wěn)定轉染和瞬時轉染

轉染細胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞

磷酸鈣法

磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞

適用于穩(wěn)定轉染和瞬時轉染

不適用于原代細胞,

操作簡便但重復性差

有些細胞不適用

陽離子脂質體法

帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內(nèi)吞

適用于穩(wěn)定轉染和瞬時轉染所有細胞

 

適用性廣,轉染效率高,重復性好,但轉染時需除血清;轉染效果隨細胞類型變化大

DEAE-右旋糖苷法

帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內(nèi)吞

瞬時性轉染

相對簡便、結果可重復,但對細胞有一定的毒副作用;轉染時需除血清

病毒介導法

通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中

穩(wěn)定轉染

可用于難轉染的細胞、原代細胞,體內(nèi)細胞等

 

     Mirus是首先研發(fā)出siRNA轉染試劑的公司,也是世界上zui早開發(fā)、低細胞毒性轉染試劑的公司之一。Mirus以“非病毒(如基于質粒DNA)法基因轉移技術比利用病毒來轉移基因具有明顯的優(yōu)勢”為理念,沿著該思路,Mirus利用蛋白、多聚物、脂質體(結合有增強核酸轉移能力的*化學物)開創(chuàng)了多種非病毒法基因轉移技術。主要提供的轉染試劑有:廣譜性低毒轉染試劑、細胞系特異性轉染試劑、RNA轉染試劑、昆蟲轉染試劑、3D培養(yǎng)細胞轉染試劑和電轉試劑等。

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