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【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Antibody Test Kit （ELISA）, PRRSV Ab
【包裝規(guī)格】
96×2測試/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒用于定性測定豬血清中豬繁殖與呼吸綜合征（又稱豬藍(lán)耳?。┎《?/span>IgG抗體。用于評估豬場豬繁殖與呼吸綜合征疫苗免疫狀況，感染豬的血清學(xué)診斷以及該病的流行病學(xué)調(diào)查。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理，由包被有豬繁殖與呼吸綜合征病毒基因重組抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的PRRSV-IgG結(jié)合，再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+PRRSV-IgG+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物，加入顯色劑，通過酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與PRRSV-IgG的含量成正比，當(dāng)顯色超過設(shè)定的臨界值時結(jié)果判為陽性，表明免疫有效或有自然感染。
【主要組成成份】
| 1． | PRRSV抗原包被板 | 96T×2塊 | 包被有PRRSV重組抗原 |
| 2． | 酶標(biāo)記物（黃蓋） | 22ml×1瓶 | 含辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG抗體 |
| 3． | 樣本稀釋液（透明蓋） | 25ml×1瓶 | 主要成份為0.01M PBS緩沖液 |
| 4． | 濃縮洗滌液（20×）（白蓋） | 50ml×1瓶 | PBST緩沖液，用前用去離子水20倍稀釋 |
| 5． | PRRSV-IgG陰性對照血清（綠蓋） | 1.5ml×1瓶 | 主要成份為PRRSV-IgG陰性血清 |
| 6． | PRRSV-IgG陽性對照血清（紅蓋） | 1.5ml×1瓶 | 主要成份為PRRSV-IgG陽性血清 |
| 7． | 顯色劑A（紫蓋） | 12ml×1瓶 | 主要成份為過氧化脲 |
| 8． | 顯色劑B（黃蓋） | 12ml×1瓶 | 主要成份為TMB |
| 9． | 終止液（藍(lán)蓋） | 12ml×1瓶 | 主要成份為H2SO4 |
| 10． | 蓋板膜 | 6張 | |
| 11． | 說明書 | 1份 | |
不同批號的試劑組份不可混用。
【儲存條件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期6個月。
【適用儀器】
1．酶標(biāo)儀，單波長450nm測量或雙波長450/630nm測量。
2．ELISA用洗板機(jī)。
3．微量移液器。
4．水浴箱或恒溫箱。
5．微量振蕩器。
【樣本要求】
1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無菌采集，2℃～8℃貯存不超過一周，長期應(yīng)在-20℃以下保存。
2．避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌的樣本。
3．樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實(shí)驗(yàn)。
【檢驗(yàn)方法】
1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條。單波長檢測時，需設(shè)空白對照1孔（不加任何液體）；雙波長檢測時，不設(shè)空白對照孔。設(shè)陰、陽性對照各2孔，分別加入不稀釋的陰、陽性對照血清100μl于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔，每孔加100μl樣本稀釋液，再分別加入樣本10μl（加入樣本后顏色會有變化）。
2．溫育：加好樣后振蕩10秒，充分混勻，置37℃溫育30分鐘。
3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液（濃縮洗滌液用去離子水以20倍稀釋）注滿反應(yīng)板孔，洗滌5次，每次停留1分鐘，zui后一次洗后拍干。
4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100μl，注意：空白孔不加酶標(biāo)記物，也不加其他任何液體。
5．溫育：置37℃溫育30分鐘。
6．洗板：同上洗滌。
7．顯色：每孔加顯色劑A、B各1滴（即50μl），振蕩混勻，37℃避光反應(yīng)15分鐘。
8．終止：每孔加終止液1滴（50μl），振蕩10秒，充分混勻。終止后5～30分鐘內(nèi)讀數(shù)。
9．讀數(shù)：單波長檢測時，酶標(biāo)儀檢測波長為450nm，以空白孔調(diào)零，讀取各孔吸光度值（A值）；雙波長檢測時，以450nm為主波長、630nm為參比波長，讀取各孔吸光度值（A值）。注意：單波長檢測時，若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒有以空白孔調(diào)零，則所得的結(jié)果均應(yīng)減去空白孔A值再做計算和判定。
10．結(jié)果判定：
臨界值（CO.）= 0.15。
樣本A值（S）/臨界值（CO.）≥1，判定為PRRSV-IgG陽性； S/CO.＜1，判定為PRRSV-IgG陰性。
陰性對照血清A值應(yīng)小于0.10，陽性對照血清A值應(yīng)大于0.70，否則試驗(yàn)不成立，需重新試驗(yàn)。注意：單波長檢測時，若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒有以空白孔調(diào)零，則陰陽性對照血清A值均應(yīng)減去空白孔A值再做判定。
【參考值（參考范圍）】
未感染也未免疫豬繁殖與呼吸綜合征病毒疫苗的健康豬群為陰性，S/CO.＜1。仔豬因其體內(nèi)含有母源抗體，其測定A值常大于臨界值。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1．嚴(yán)重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球、有沉淀物、長菌的樣本可能導(dǎo)致假陽性。
2．因個體差異或免疫時間長短等因素可能會出現(xiàn)個別豬只免疫疫苗后檢測結(jié)果為陰性。
3．陽性結(jié)果用于感染豬的血清學(xué)診斷以及流行病學(xué)調(diào)查時需結(jié)合其他方法和臨床資料進(jìn)行。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
PRRSV-IgG可作為評價豬繁殖與呼吸綜合征疫苗免疫效果以及豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染的血清學(xué)診斷指標(biāo)，但不能區(qū)別二者，若想確認(rèn)是疫苗還是野毒感染產(chǎn)生的抗體需結(jié)合臨床表現(xiàn)、免疫程序及其他診斷方法。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1．特異性 以本品檢測30份陰性參比血清不出假陽性。
2．敏感性 以本品檢測30份陽性參比血清不出現(xiàn)陰性。
3．精密性 用精密性參比品測定，CV（%）不高于15%（n=10）。
4．穩(wěn)定性 試劑盒在2℃～8℃放置6個月或37℃放置3天，檢定結(jié)果達(dá)到以上1-3標(biāo)準(zhǔn)。
【注意事項(xiàng)】
1．本試劑盒僅用于體外診斷。
2．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對待，操作時需戴手套穿工作衣。
3．實(shí)驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
4．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封4℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。
5．若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正常現(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可。
6．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。
7．加洗滌液時應(yīng)做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
8．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。
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