除溫度、濕度和光照外,影響 ECL 超敏發(fā)光液穩(wěn)定性的因素還涉及環(huán)境酸堿度、雜質(zhì)污染、儲存容器材質(zhì)以及操作規(guī)范等多個方面。我將結合文中發(fā)光液的成分和使用要求,詳細闡述這些影響因素。
環(huán)境酸堿度:文中提到 ECL 超敏發(fā)光液的發(fā)光基于魯米諾 - 辣根過氧化物酶(HRP) - 過氧化氫(H?O?)反應體系,而該反應在堿性條件下進行 。實驗環(huán)境中酸堿度的變化,會直接影響反應體系的 pH 值。若環(huán)境酸性較強,會破壞魯米諾 - HRP - H?O?反應的堿性環(huán)境,干擾氧自由基的產(chǎn)生,阻礙魯米諾的氧化反應,導致發(fā)光信號減弱甚至無法產(chǎn)生。例如,在酸性環(huán)境中,HRP 的活性可能受到抑制,無法有效催化過氧化氫分解,進而影響整個發(fā)光過程,降低發(fā)光液的穩(wěn)定性和檢測靈敏度。
雜質(zhì)污染:空氣中的灰塵、微生物以及實驗過程中使用的未清潔干凈的器具等引入的雜質(zhì),都可能污染 ECL 超敏發(fā)光液。這些雜質(zhì)可能與發(fā)光液中的成分發(fā)生化學反應,改變其化學性質(zhì)。如灰塵中的某些物質(zhì)可能與魯米諾或增強劑發(fā)生反應,消耗有效成分;微生物的生長繁殖可能代謝產(chǎn)生影響發(fā)光反應的物質(zhì)。此外,若實驗操作不規(guī)范,使樣品中的雜質(zhì)混入發(fā)光液,也會干擾發(fā)光反應,導致檢測結果不準確,影響發(fā)光液的穩(wěn)定性 。
儲存容器材質(zhì):儲存容器的材質(zhì)對 ECL 超敏發(fā)光液的穩(wěn)定性也有影響。若容器材質(zhì)與發(fā)光液發(fā)生化學反應,可能改變發(fā)光液的成分和性質(zhì)。例如,某些塑料容器可能會釋放出化學物質(zhì),與魯米諾或過氧化氫發(fā)生反應,降低發(fā)光液的性能。因此,通常建議使用化學性質(zhì)穩(wěn)定、不與發(fā)光液成分反應的容器進行儲存,以保證發(fā)光液在儲存過程中的穩(wěn)定性 。
操作規(guī)范:實驗操作過程中的規(guī)范程度直接關系到發(fā)光液的穩(wěn)定性和檢測效果?;旌?A 液和 B 液時,如果比例不準確、混合不充分或操作緩慢,都會影響發(fā)光液的反應效果。如混合比例不當,可能導致反應不充分,發(fā)光信號減弱;操作緩慢使發(fā)光液長時間暴露在空氣中,會加速其氧化,提前發(fā)生反應,降低穩(wěn)定性。在將發(fā)光液覆蓋膜表面時,若操作不當導致膜干燥,會使發(fā)光信號不均勻,影響檢測結果的準確性和重復性 。
與其他試劑的兼容性:在實際實驗中,ECL 超敏發(fā)光液可能會與其他試劑接觸,若這些試劑與發(fā)光液不兼容,會影響其穩(wěn)定性。比如,在 Western Blot 實驗中,若洗滌緩沖液去除干凈,殘留的緩沖液成分可能與發(fā)光液發(fā)生反應,干擾發(fā)光過程。此外,樣品中若含有與發(fā)光液成分反應的物質(zhì),如某些還原劑、重金屬離子等,也會對發(fā)光液的穩(wěn)定性和檢測結果產(chǎn)生負面影響 。