酶標(biāo)記熒光信號(hào)放大技術(shù)的基本原理
 
    酶標(biāo)記熒光(enzyme-labeledfluorescent)信號(hào)放大系統(tǒng)是另一種*的免疫熒光信號(hào)放大技術(shù)。其原理是酶促反應(yīng)(酶+底物)過程中在酶活性部位產(chǎn)生熒光沉積物，這樣一個(gè)過程稱為酶標(biāo)熒光。目前可獲得許多產(chǎn)生熒光和發(fā)光的酶底物，例如ELF-97磷酸鹽、X—Gal、BCIP／NBT、堅(jiān)固紅、堅(jiān)固藍(lán)等。圖3—11顯示水溶性的ELF-97磷酸鹽底物通過磷酸酶的作用，轉(zhuǎn)為它的水解產(chǎn)物ELF-97乙醇。
 
    這種高度不溶性的二維分子在磷酸酶活性部位形成一種強(qiáng)黃綠色熒光沉積物。與其他含有分子內(nèi)氫鍵的結(jié)晶分子相同，ELF-97乙醇沉積物產(chǎn)生的熒光信號(hào)，不僅光穩(wěn)定性相當(dāng)好，而且還具有特別大的Stokes移位。其光穩(wěn)定性比使用熒光黃交聯(lián)物直接或間接檢測得到的穩(wěn)定性都好。這種高度光穩(wěn)定性使得ELF-97乙醇標(biāo)記的組織細(xì)胞在高倍鏡下非常容易聚焦和拍照。
 
 
    ELF-97磷酸酶底物是IHC、mRNA ISH以及在DNA芯片檢測DNA的強(qiáng)有力工具。與常規(guī)方法產(chǎn)生的放射性信號(hào)不同，ELF—97mRNA檢測信號(hào)可在幾分鐘內(nèi)甚至幾秒內(nèi)生成，而且可很清楚地與樣品的色素沉著分開。而且，在ISH應(yīng)用時(shí)，ELF-97乙醇的黃綠色熒光沉積物產(chǎn)生的信號(hào)強(qiáng)度，比直接標(biāo)記的熒光探針原位雜交或用IHC方法的二級(jí)抗體熒光放大方法產(chǎn)生的熒光信號(hào)強(qiáng)許多倍。