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ELISA技術(shù)綜述（五）2023/06/05: 其他內(nèi)容：酶聯(lián)免疫測(cè)定技術(shù)的多酶級(jí)聯(lián)放大系統(tǒng)：一、AP底物放大系統(tǒng)substrateampiificationsystemAP可催化底物NADP+脫磷酸而生成NAD+(輔酶1)，以乙醇作還原劑，在醇脫氧酶催比下，乙醇脫氫，NAD+還原為NADH，NADH在黃遞酶的催化下脫氫，同時(shí)四唑鹽(tetrazoliim)被還原成有色的甲蠟(formazan)。AP不斷催化NAD+生成，NAD+與NADH循環(huán)轉(zhuǎn)化，不斷生成甲蠟。整個(gè)反應(yīng)周期由AP及醇脫氫酶、黃遞酶組成酶級(jí)聯(lián)，每個(gè)AP分子每分鐘可催化生成6X

ELISA技術(shù)綜述（四）2023/05/29: 2.4結(jié)合物的保存酶標(biāo)抗體中的酶和抗體均為生物活性物質(zhì)，保存不當(dāng)，極易失活。高濃度的結(jié)合物較為穩(wěn)定，冰凍干燥后可在普通冰箱中保存一年左右，但凍干過(guò)程中引起活力的減低，而且使用時(shí)需經(jīng)復(fù)溶，頗為不便。結(jié)合物溶液中加入等體積的甘油可在低溫冰箱或普通冰箱的冰格中較長(zhǎng)時(shí)間保存。早期的ELISA試劑盒中的結(jié)合物一般均按以上兩種形式供應(yīng)，配以稀釋液（見3.2.5）臨用時(shí)按標(biāo)明的稀釋度稀釋成工作液?，F(xiàn)在較先進(jìn)的ELISA試劑盒均已用合適的緩沖液配成工作液，使用時(shí)不需再行稀釋，在4-8℃保存期可達(dá)6個(gè)月。由于蛋白

ELISA技術(shù)綜述（三）2023/05/22: 以下簡(jiǎn)述固相載體和包被過(guò)程。1.2包被的方式將抗原或抗體固定在過(guò)程稱為包被(coating)。換言之，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過(guò)程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用力。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。載體對(duì)不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。IgG對(duì)聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段

ELISA技術(shù)綜述（二）2023/05/15: ELISA的商品化試劑盒成分和分類：在臨床檢驗(yàn)或者科研檢測(cè)中，ELISA實(shí)驗(yàn)通常有商品試劑盒提供。ELISA試劑盒中有三個(gè)必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；（3）酶的底物；（4）陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品（定性測(cè)定中），參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測(cè)定中）；（5）酶聯(lián)物（結(jié)合物）及標(biāo)本的稀釋液；（6）洗滌液；（7）酶反應(yīng)終止液。1、免疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低

ELISA技術(shù)綜述（一）2023/05/08: ELISA原理ELISA利用抗原抗體之間專一性結(jié)合之特性，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)；由于結(jié)合與固體承載物（一般為塑膠孔盤）上之抗原或抗體仍可具有免疫活性，因此設(shè)計(jì)其結(jié)合機(jī)制後，配合酵素顯色反應(yīng)，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，并可利用顯色之深淺進(jìn)行定量分析。根據(jù)待測(cè)樣品與結(jié)合機(jī)制的不同，ELISA可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方式，主要以"三明治法"(sandwich)、"間接法"(indirect)、以及"競(jìng)爭(zhēng)法"(Competitive)三種為主，以下為各種方法之介紹。ELISA分類見ELISA的雙抗夾心

ELISA試劑盒中的抗體2023/05/04: 在ELISA試劑盒中運(yùn)用的抗體可分為多克隆抗體（多抗）和單克隆抗體（單抗）。多抗取白免疫動(dòng)物的抗血清，制備較簡(jiǎn)略，但抗血清成分凌亂，除含針對(duì)抗原（多個(gè)表位）的抗體外，還含有多種其他抗體，親和力和特異性相對(duì)要低于單抗，且制備周期長(zhǎng)，批間差異較大。而單抗僅針對(duì)抗體的單一表位，ELISA試劑盒親和力和特異性均較多抗高，且制備技能老練，產(chǎn)量大，批間差異小，但結(jié)合位點(diǎn)的單一也正是其缺陷之地址，在雙抗體夾心法中，如包被和指示抗體運(yùn)用同一單抗，則由于結(jié)合位點(diǎn)的短少，簡(jiǎn)略構(gòu)成假陰．性成果。在運(yùn)用雙單抗一步法時(shí)，

植物微囊藻毒素LR(MC-LR)elisa試劑盒使用說(shuō)明書2023/04/24: 本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍：96T1.2pg/mL-40pg/mL使用目的：本試劑盒用于測(cè)定植物組織，細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中微囊藻毒素LR(MC-LR)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中植物微囊藻毒素LR(MC-LR)水平。用純化的植物微囊藻毒素LR(MC-LR)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物微囊藻毒素LR(MC-LR)，再與HRP標(biāo)記的微囊藻毒素LR(MC-LR)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在

ELISA中分析非特異性顯色2023/04/19: 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)自1971年自問(wèn)世以來(lái)，以其敏感性高，特異性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便、安全，而廣泛應(yīng)用于臨床診斷，開創(chuàng)了免疫學(xué)診斷的新紀(jì)元。但同其它免疫診斷方法一樣酶免試劑在它的研究、生產(chǎn)及使用中常常會(huì)碰到非特異性問(wèn)題。1、試劑盒特異性因素1、1固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種，以微量滴定板最為常見[1]。它具有良好的吸附性能，孔底透明度高，空白值低，各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別，各產(chǎn)品的質(zhì)量差異很

ELISA試劑盒變質(zhì)原因詳解2023/04/10: ELISA試劑盒為什么會(huì)變質(zhì)？是什么影響了ELISA試劑盒質(zhì)保？一旦變質(zhì)會(huì)有什么影響呢？一、辦法學(xué)的影響ELISA測(cè)定形式包含以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法，其間競(jìng)爭(zhēng)抑制法(HBeAb,HBcAb等選用)因受操作時(shí)差所引起的競(jìng)爭(zhēng)等要素的影響，成果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難操控。二、試劑要素不同批次的ELISA試劑在制作進(jìn)程中很難保證質(zhì)量wan全一致，即使是通過(guò)批批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)成果也存在差異，因而必須挑選和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑，并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一規(guī)范可

人組蛋白H3賴氨酸27(H3K27me3)ELSIA試劑盒使用說(shuō)明書2023/04/03: 本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍：96T6pg/ml-220pg/ml使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中組蛋白H3賴氨酸27(H3K27me3)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人組蛋白H3賴氨酸27(H3K27me3)水平。用純化的人組蛋白H3賴氨酸27(H3K27me3)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入組蛋白H3賴氨酸27(H3K27me3)，再與HRP標(biāo)記的組蛋白H3賴氨酸27(H3K27me3)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)靈敏度高的原因2023/03/27: ELISA試劑盒試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。ELISA試劑盒試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因及解決辦法分析：1選擇試劑選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。2加樣可能原因：1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成

ELISA實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)異常的原因分析2023/03/20: ELISA實(shí)驗(yàn)是我們大家最常見的實(shí)驗(yàn),也是比較容易出問(wèn)題的實(shí)驗(yàn),可能你一不小心,你的整個(gè)實(shí)驗(yàn)便是無(wú)功能重來(lái)那!所以小編給您講解在使用ELISA試劑盒做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，有些細(xì)節(jié)若是做不好會(huì)出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)異常，或者效果不佳，那么你有想過(guò)是什么原因嗎？一、白板異常：顯色步驟結(jié)束后，酶標(biāo)板所有孔均無(wú)顏色。陽(yáng)性對(duì)照不顯色。1.試劑已過(guò)效期，或不同試劑盒組分混用（解決方式：檢查試劑的組分及批號(hào)，確認(rèn)未過(guò)期以及所有組分均屬對(duì)應(yīng)的試劑盒。不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑不能混用）。2.錯(cuò)加、漏加試劑底物、顯色劑A或B（解決方式

綿羊I型膠原α1鏈(COL1A1)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書2023/03/13: 本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍：96T0.2μg/L-9μg/L使用目的：本試劑盒用于測(cè)定綿羊血清、血漿及相關(guān)液體樣本中I型膠原α1鏈(COL1A1)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中綿羊I型膠原α1鏈(COL1A1)水平。用純化的綿羊I型膠原α1鏈(COL1A1)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入I型膠原α1鏈(COL1A1)，再與HRP標(biāo)記的I型膠原α1鏈(COL1A1)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在

ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果為什么有時(shí)候會(huì)復(fù)測(cè)？2023/03/06: 在ELISA實(shí)驗(yàn)過(guò)程中時(shí)常會(huì)出現(xiàn)復(fù)測(cè)現(xiàn)象即我們時(shí)常說(shuō)的"花板"現(xiàn)象，這種現(xiàn)象影響檢驗(yàn)結(jié)果的正確判讀，對(duì)工作造成一定的不利影響，一旦出現(xiàn)“花板”，實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須放棄，重新進(jìn)行，不僅浪費(fèi)物料和時(shí)間，而且還會(huì)出現(xiàn)樣本量缺少、交叉污染、報(bào)告延遲等一系列問(wèn)題。影響因素分析如下：一、標(biāo)本因素正確處理標(biāo)本，防止大規(guī)模溶血、血漿層異物、使用一次性加樣槍頭，防止交叉污染。血清和血漿均可以用于檢測(cè)，但血清的分離應(yīng)在抽血后等血液wan全凝固后再離心。二、試劑因素正確保存及使用有效試劑。使用過(guò)期試劑及底物接觸金屬容器、底

競(jìng)爭(zhēng)法ELISA中，主要兩種計(jì)算方法2023/02/27: 在競(jìng)爭(zhēng)法ELISA中，陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競(jìng)爭(zhēng)抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對(duì)照的吸光度在1.0-1.5之間，此時(shí)反應(yīng)最為敏感。競(jìng)爭(zhēng)法ELISA不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽(yáng)性反應(yīng)與陰性對(duì)照的顯色差異，一般均用比色計(jì)測(cè)定，讀出S、P和N的吸光值。計(jì)算方法主要也有兩種，即陽(yáng)性判定值法和抑制率法。a.陽(yáng)性判定值法與間接法和夾心法中的陽(yáng)性判定值法基本相同，ELISA試劑盒但在計(jì)算公式中引入陽(yáng)性對(duì)照A值，現(xiàn)舉某種檢測(cè)抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)

ELISA測(cè)定的常用模式--競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原2023/02/13: 大分子抗原因其具有兩個(gè)以上的抗原決定簇，而可用雙抗體夾心法測(cè)定，小分子半抗原如di高辛、茶堿等藥物以及T3，T4及睪酮等激素因其只有一個(gè)抗原決定簇，從而無(wú)法使用雙抗夾心方法測(cè)定，只能采用競(jìng)爭(zhēng)抑制法測(cè)定。具體步驟如下：1．先用抗小分子的特異抗體如雙抗體夾心法一樣包被固相并封閉。2．同時(shí)加入待測(cè)樣本和酶標(biāo)的小分子，溫育一定時(shí)間后洗板；此步中，待測(cè)樣本的小分子將與酶標(biāo)小分子競(jìng)爭(zhēng)與固相上特異抗體結(jié)合。3．加入酶底物，溫育顯色測(cè)定，顯色的強(qiáng)弱與待測(cè)樣本中的小分子含量成反比。這種測(cè)定模式中，需要得到小分子與

雙抗夾心 ELISA試劑盒的反應(yīng)時(shí)間2023/02/06: 在保證ELISA有效檢測(cè)病原菌的前提下，快速、方便也是雙抗夾心ELISA的必要條件。雙抗夾心ELISA從加入待測(cè)抗原到得出結(jié)果，檢測(cè)大腸桿菌O157:H7共需要5h左右，而間接ELISA則需要7h(包被37℃，2h)或者17h(包被4℃guo夜)。本論文篩選出的雙抗夾心ELISA檢測(cè)大腸桿菌O157:H7省去封閉這一步驟。在間接ELISA測(cè)定抗原中，封閉一般是bi不可少的，因?yàn)榘徊煌瑵舛瓤乖灰欢梢詗an全覆蓋固相載體表面，如果不封閉，很可能使隨后加入的特異性抗體和酶標(biāo)二抗直接被吸附到固相載

人鐵調(diào)素Hepcidin ELISA試劑盒使用說(shuō)明書2023/01/30: 本試劑盒僅供研究使用。使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中鐵調(diào)素Hepcidin含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人鐵調(diào)素Hepcidin水平。用純化的人鐵調(diào)素Hepcidin抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入鐵調(diào)素Hepcidin，再與HRP標(biāo)記的鐵調(diào)素Hepcidin抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鐵調(diào)素H

人CXC趨化因子配體10（CXCL10）elisa試劑盒說(shuō)明書2023/01/09: 本試劑盒僅供研究使用。使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中CXC趨化因子配體10（CXCL10）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人CXC趨化因子配體10（CXCL10）水平。用純化的人CXC趨化因子配體10（CXCL10）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入CXC趨化因子配體10（CXCL10），再與HRP標(biāo)記的CXC趨化因子配體10（CXCL10）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶

小鼠超氧化物歧化酶（SOD）elisa試劑盒使用說(shuō)明書2023/01/03: 使用目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中超氧化物歧化酶（SOD）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠超氧化物歧化酶（SOD）水平。用純化的小鼠超氧化物歧化酶（SOD）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入超氧化物歧化酶（SOD），再與HRP標(biāo)記的超氧化物歧化酶（SOD）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的超氧化物歧化酶

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