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上海哈靈生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第13年
ELISA試劑盒檢驗(yàn)方法2018/10/11
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。4.混勻,置37℃反應(yīng)30分鐘。5.扣去孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,拍干。6.每孔加酶標(biāo)記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應(yīng)30分鐘。7.洗滌,同步驟5。8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混
ELISA試劑盒操作要點(diǎn)2018/10/11
在進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)實(shí)驗(yàn)中,有很多需要注意的地方,由于ELISA方法廣泛應(yīng)用在各種抗原和抗體的此定中。但是測(cè)定中的影響因素很多,并且對(duì)操作有較高的要求,所以,在實(shí)驗(yàn)中除了正常的相互反應(yīng),還會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤的反應(yīng),導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。而造成這種錯(cuò)誤的可能因素有:標(biāo)本因素;試劑因素;操作因素等。為此,這里我簡(jiǎn)單的總結(jié)一下:ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作要點(diǎn)無(wú)論在什么研究中,的試劑、良好的和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要
您知道ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)有哪些嗎?2018/10/08
由于elisa試劑盒操作方法簡(jiǎn)單,現(xiàn)在越來(lái)越多的科研工作都知道elisa試劑盒的操作方法,但是您們知道操作時(shí)還應(yīng)注意哪些嗎?今天上海滬鼎就來(lái)解說(shuō)elisa試劑盒的操作注意事項(xiàng):1、試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。2、實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。3、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4、使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。5、使用干凈的塑料容器配
科研新手,你們知道怎么選擇ELISA試劑盒嗎?2018/09/30
elisa試劑盒的選擇有許多考慮的因素,比如說(shuō)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、價(jià)格、操作方法等因素。比如檢測(cè)蛋白,基本有下列步驟:步,明白檢測(cè)何種蛋白第二步,明確編碼該蛋白的基因與其他哪些物種同源性第三步,尋找檢測(cè)這些物種蛋白的試劑盒第四步,咨詢(xún)商家ELISA試劑盒使用的抗體類(lèi)型:?jiǎn)慰惯€是多抗?單抗是針對(duì)什么抗原決定簇的第五步,做出自己的判斷,該買(mǎi)哪個(gè)試劑盒此外,選擇試劑盒的時(shí)候,還應(yīng)考慮樣本類(lèi)型、樣本體積、靈敏度、檢測(cè)范圍、樣本值等因素。
ELISA試劑盒檢測(cè)不成功的原因2018/09/27
ELISA試劑盒即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),是一種常用的固相酶免疫測(cè)定方法。由于ELISA方法靈敏,特異性強(qiáng)不需要特殊設(shè)備,所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在臨床檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外,有時(shí)??梢?jiàn)到一些錯(cuò)誤結(jié)果(即假陽(yáng)性或假陰性)如標(biāo)本的影響;上海恒遠(yuǎn)今日為大家解讀ELISA試劑盒檢測(cè)的影響因素。標(biāo)本的影響溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測(cè)易產(chǎn)生假陽(yáng)性。可能是溶血血清中含有過(guò)氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過(guò)程
ELISA試劑盒準(zhǔn)確度的兩大參考標(biāo)準(zhǔn)2018/09/25
ELISAKit的準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度、特異性、穩(wěn)定性等指標(biāo),決定了產(chǎn)品質(zhì)量的好壞。高品質(zhì)的試劑盒都需要對(duì)這些指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。目前定義高品質(zhì)試劑盒一般會(huì)檢測(cè)八項(xiàng)指標(biāo),具體信息會(huì)在本文仔細(xì)介紹。標(biāo)準(zhǔn)一:回收率評(píng)估試劑盒測(cè)量結(jié)果趨于真實(shí)值的程度。回收率偏高或偏低會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果,影響測(cè)定值的準(zhǔn)確性。標(biāo)準(zhǔn)二:天然樣本檢測(cè)確保試劑盒可以檢測(cè)天然樣本及合適的樣本類(lèi)型。若不對(duì)天然樣本檢測(cè)類(lèi)型進(jìn)行確定,可能會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。
怎樣更好的利用Elisa試劑盒2018/09/25
在Elisa試劑盒的使用過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題有很多如,:加樣器不確、保溫設(shè)備不良、洗滌用水不規(guī)范。那么如何解決這些問(wèn)題呢?1.在使用過(guò)程中檢查加樣器:使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。2.加樣不準(zhǔn)確:應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。3.洗滌用水不規(guī)范:從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正常現(xiàn)象,微加熱至40℃使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液。(加熱溫度不要超過(guò)50℃)使用時(shí)
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作技巧您知多少?2018/09/20
ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISAKit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見(jiàn)的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等;ELISA試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類(lèi)戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗體ELISA檢測(cè),自從60-70年代問(wèn)世以來(lái),得到*科研工作者的認(rèn)可及推崇,在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣,尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理小建議2018/09/19
1.ELISA實(shí)驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔,然后計(jì)算每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值,復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。2.平均OD值減去空白孔的OD值。3.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。以減去本底后的OD值為X軸,標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為Y軸,利用作圖軟件得出一個(gè)合適的計(jì)算方法。建議使用合適的軟件來(lái)作圖,比如CurveExpert1.4。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線(xiàn)、半對(duì)數(shù)、對(duì)數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中選擇一條合適的方程。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線(xiàn)是否與表中數(shù)據(jù)吻合,可以將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為未知數(shù),將對(duì)應(yīng)的OD值帶入該方程,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品
elisa競(jìng)爭(zhēng)法方法學(xué)質(zhì)量的初步驗(yàn)證2018/09/06
當(dāng)elisa競(jìng)爭(zhēng)法開(kāi)發(fā)以親和力大小比較為目的,往往會(huì)以IC50值評(píng)價(jià)待測(cè)樣品阻斷配體受體結(jié)合效果,IC50越小,待測(cè)樣品的阻斷效果越好。親和力競(jìng)爭(zhēng)法開(kāi)發(fā)的劑量曲線(xiàn)應(yīng)該有明顯的上下平臺(tái)期以得到較為穩(wěn)定的IC50值。生物學(xué)活性的方法學(xué)驗(yàn)證可參照USP1032,1033,1034來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)和數(shù)據(jù)分析。具體到elisa競(jìng)爭(zhēng)法的方法學(xué)評(píng)價(jià),即制備相對(duì)于對(duì)照品理論效價(jià)為156%,125%,100%,80%,64%的樣品進(jìn)行檢測(cè),通過(guò)比較對(duì)照品和樣品的IC50,得到樣品相對(duì)于實(shí)測(cè)效價(jià),通過(guò)實(shí)測(cè)效價(jià)和
ELISA試劑盒測(cè)定值與文獻(xiàn)中相差太大怎么辦?2018/06/15
(1)生化測(cè)定主要目的是比較處理內(nèi)和處理間該指標(biāo)的變化。同時(shí),要測(cè)定絕dui值,往往是很可能甚至不可能的。因此,追求的不是絕dui值而是相對(duì)值。(2)用不同測(cè)定方法和不同測(cè)定條件下得到的測(cè)定值可能存在很大差異。因此,如果測(cè)定方法不同,同一樣品的測(cè)定值通常是不可以直接比較的。這也是建議使用試劑盒測(cè)定的理由之一。因?yàn)椴煌髡哂猛辉噭┖袦y(cè)定的數(shù)據(jù)才是可以相互比較的。(3)同一種材料,不同處理、不同發(fā)育狀態(tài)和不同器官其生化指標(biāo)可能發(fā)生很大變化。因此,能夠直接用來(lái)比較的文獻(xiàn)資料本來(lái)就不多。(4)當(dāng)然,話(huà)
ELISA試劑盒實(shí)踐過(guò)程中的一些技巧,你學(xué)會(huì)了嗎?2018/05/30
ELISA實(shí)驗(yàn)看似簡(jiǎn)單,其實(shí)不然。記得以前一個(gè)同學(xué)*次做ELISA實(shí)驗(yàn),跟我說(shuō),ELISA實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)直太簡(jiǎn)單了,到第2次在次做ELISA實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,他驚訝了,說(shuō)結(jié)果差別怎么這么大(同一份標(biāo)本),第三次的時(shí)候,他決定認(rèn)真的做一次,爭(zhēng)取做到同一份標(biāo)本,這次讓他感受到ELISA并不是那么簡(jiǎn)單,發(fā)覺(jué)其實(shí)挺難的。今天的文章中為大家講述一些ELISA實(shí)驗(yàn)中的小技巧,希望對(duì)大家有所幫助!1.操作前應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解,如環(huán)境溫度(保持在18C~25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數(shù)等,要先查看水育
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的封閉液等常用試劑的配制2018/05/09
elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)中的封閉液小知識(shí)ELISA的試劑盒說(shuō)明上寫(xiě)封閉液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點(diǎn),蔗糖封閉的原理:1、ELISA實(shí)驗(yàn)中,蔗糖本身沒(méi)有封閉作用;2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。3、加蔗糖的主要目的是保護(hù)ELISA板子吸附(包被)的蛋白,起到“保護(hù)劑”的作用。4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經(jīng)過(guò)BSA封閉后加,當(dāng)然也有將蔗糖加到封閉液中同時(shí)進(jìn)行處理;那一種更好需要你實(shí)驗(yàn)后來(lái)驗(yàn)證。但多數(shù)選擇前者。封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可),0.
如何減少ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中背景因素的影響?2018/04/24
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡(jiǎn)單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無(wú)奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),我們是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。背景噪音會(huì)影響您對(duì)結(jié)果的判斷。如何降低ELISA的背景,下面有一些tips。洗滌很重要洗滌步驟看似很無(wú)聊,其實(shí)很重要,因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑)殘留在微孔板中,那么它會(huì)增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會(huì)阻止非特
ELISA試劑盒檢測(cè)方法的起源和原理2018/04/08
酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)(elisa試劑盒檢測(cè)方法)是20世紀(jì)60年代末期發(fā)展起來(lái)的一種免疫學(xué)檢測(cè)方法,是目前廣泛應(yīng)用的標(biāo)記免疫技術(shù)。1966年Nakene和Pierce共同發(fā)表了《酶標(biāo)抗體:制備和抗原定位中的應(yīng)用》,首先提出了酶聯(lián)免疫技術(shù)(ELISA試劑盒檢測(cè)方法)的基本原理。1971年Engvall和Perlmann發(fā)表《ELISAKIT方法吸附試驗(yàn)測(cè)定IgG含量》一文,使酶聯(lián)免疫(ELISA試劑盒檢測(cè))技術(shù)成為一種實(shí)用的檢測(cè)液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的方法。目前酶聯(lián)免疫(ELISA試劑盒)檢測(cè)技術(shù)已廣泛用
Science of The Total Environment2018/03/23
ScienceofTheTotalEnvironmentVolumes622–623,1May2018,Pages214-221Developmentalandmetabolicresponsesofzebrafish(Daniorerio)embryosandlarvaetoshort-chainchlorinatedparaffins(SCCPs)exposureAuthorlinksopenoverlaypanelXiaoqianRenabHaijunZhangaNingboGengaLi
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理、步驟以及問(wèn)題分析2018/03/09
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)原理1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)用于IgG定量測(cè)定的文章,使得1966年開(kāi)始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法。ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留
酶聯(lián)免疫檢測(cè)中:ELISA試劑盒操作要點(diǎn)2018/02/26
在進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)實(shí)驗(yàn)中,有很多需要注意的地方,由于ELISA方法廣泛應(yīng)用在各種抗原和抗體的此定中。但是測(cè)定中的影響因素很多,并且對(duì)操作有較高的要求,所以,在實(shí)驗(yàn)中除了正常的相互反應(yīng),還會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤的反應(yīng),導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。而造成這種錯(cuò)誤的可能因素有:標(biāo)本因素;試劑因素;操作因素等。為此,本司針對(duì)常見(jiàn)問(wèn)題做分析如下:ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作要點(diǎn)無(wú)論在什么研究中,的試劑、良好的和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠
高靈敏ELISA試劑盒操作步驟中的忌諱2018/01/26
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中每一個(gè)步驟都尤為重要,細(xì)節(jié)不容忽視,它是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵與否;在這里本司為方便各位了解,更好的完成實(shí)驗(yàn),特對(duì)高靈敏ELISA試劑盒操作步驟中的忌諱做出以下分析,供大家參考:1、吸取液體時(shí)速度不易太快,以免產(chǎn)生氣泡,吸取的量不夠準(zhǔn)確。2、手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15~30s,不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。3、底物為T(mén)MB,避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸皮膚
ELISA檢測(cè)試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題解決方法2018/01/16
以下是ELISA檢測(cè)試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題問(wèn)答整理分析出來(lái)以方便各位了解:(1)問(wèn):小鼠乙酰膽堿Elisa檢測(cè)試劑盒后期數(shù)據(jù)處理中空白的OD值有什么作用?答:可以將標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的OD值同時(shí)減去空白的值進(jìn)行計(jì)算,或者都不減,保持同一水平就行。(2)問(wèn):那我們算出來(lái)的ACH含量為什么出現(xiàn)負(fù)值?答:說(shuō)明個(gè)別樣本的濃度很低,當(dāng)濃度接近第6個(gè)點(diǎn)的時(shí)候,直線(xiàn)方程就有可能計(jì)算出負(fù)值。(3)問(wèn):我兩個(gè)空白孔一個(gè)啥都不加,一個(gè)加了后面的A液,B液還有終止液,請(qǐng)問(wèn)用哪一個(gè)?答:用加了A液,B液還有終止液的那個(gè)更加準(zhǔn)確,因?yàn)?
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