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2018
06-21

免疫復(fù)合物的純化
實驗試劑裂解緩沖液抗體蛋白A或蛋白G微球(用含0.02％疊氮鈉裂解緩沖液配成10％(V／V)的混懸液，4℃保存)不含DTT的Laemmli樣品緩沖液(2％SDS、10％甘油、60mmol／LTris，pH6.8和0.02％溴酚藍)1mol／LDTT(保存于-20℃)實驗設(shè)備搖床、抽吸裝置(大多是通過導(dǎo)管與負壓瓶一室內(nèi)真空器連接)實驗步驟1．準備工作蛋白A或蛋白G微珠混懸液可在用前準備，4℃保存于含疊氮鈉的溶液中。2．操作步驟1)將小量裂解物樣本分別置于適當數(shù)量的1.5mlEP管中，加入裂解緩沖液
2018
06-21

如何選擇pH電極與ORP電極
一、pH電極選型：1、殼體材料的選擇：pH電極外殼一般采用PC塑料（聚碳酸脂）外殼和玻璃外殼二種，PC外殼耐碰撞和沖擊，但適用溫度2、液接界的選擇：液接界是溝通外參比溶液和被測溶液的連接部件，要求電勢穩(wěn)定及重現(xiàn)。一般液接界材料有纖維材質(zhì)，陶瓷芯，玻璃磨口等介質(zhì)，纖維材質(zhì)一般用于塑殼電極中，其溶液滲出速度較快，不易堵塞；陶瓷芯耐腐蝕性好，液接界電勢的穩(wěn)定性及重現(xiàn)性均較好，可用于高溫介質(zhì)中，是應(yīng)用廣泛的液接界材料；玻璃磨口接界與溶液接觸面積及滲出速度均較大，適用于離子強度較弱，高粘度，混濁液體或膠體
2018
06-20

操作近紅外光譜儀的注意事項
近紅外光譜儀主要廣泛應(yīng)用于對液體狀樣品的化學(xué)、物理性質(zhì)作定量分析，由于儀器在常規(guī)光纖中有良好的傳輸性，且儀器簡單、分析速度快、對樣品不會造成破壞、測試時對樣品需求小等優(yōu)點，在在線分析中得到廣泛使用。在操作近紅外光譜儀的過程中要注意以下事項：1、近紅外光譜區(qū)范圍為780~2526nm，是介于可見光和中紅外光之間的電磁波，在檢測樣品前首先要了解測試光譜的范圍。2、在使用前還要對儀器進行校正，近紅外光譜儀的校正相對比較麻煩，為了得出準確的數(shù)值，一般需要80個以上的代表性樣品用來進行校正，這一步驟通常稱
2018
06-20

液相色譜儀常見故障處理
LC-10AT液相色譜儀是日本島津公司1996年的產(chǎn)品，檢測器為可變波長紫外檢測器，色譜柱為島津公司的ODS-C18，大連依利特的ODS-C18。八年的日常工作中遇到了幾種故障，如故障1經(jīng)咨詢島津公司的工程師后，得以解決；故障2、故障5是頻繁碰到的問題等，特作總結(jié)如下：故障1流動相內(nèi)有氣泡，關(guān)閉泵，打開泄壓閥，打開purge鍵，清洗脫氣，氣泡不斷從過濾器冒出，進入流動相，無論打開purge鍵幾次，都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi)，過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖，形成菌
2018
06-20

針頭式過濾器的泡點測試
微孔濾膜過濾法做為一種重要的除菌和除顆粒的方法，已經(jīng)在制藥，顆粒檢測及分析儀器的樣品處理中廣泛應(yīng)用。做為實驗室為常見的針頭式過濾器除了需要做溶出檢測，化學(xué)兼容性的檢測之外，還應(yīng)做完整性測試。過濾器的完整性是過濾產(chǎn)品中很重要的一個指標，一個過濾系統(tǒng)在過濾前后是否能保證其完整性，也是衡量一個過濾產(chǎn)品質(zhì)量優(yōu)劣的重要參數(shù)。對于過濾工藝，尤其是除菌級的過濾而言，完整性測試是一種必要的手段，以確定過濾的安全可靠性，避免工作中不必要的浪費，包括時間，精力，過濾樣品等。通過完整性測試，可以確定：1.過濾器自身的
2018
06-19

質(zhì)譜MRM技術(shù)定量分析與應(yīng)用
質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(multiplereactionmonitoring,MRM)技術(shù)作為一種質(zhì)譜檢測的分析方法，具有特異性強、靈敏度高、準確度高、重現(xiàn)性好、線性動態(tài)范圍寬、自動化高通量的突出優(yōu)點，這些特質(zhì)能夠滿足今天很多研究領(lǐng)域的迫切需要。通過MRM技術(shù)進行實時的定量監(jiān)測可以進行藥代動力學(xué)研究、臨床診斷、違禁藥物檢查、食品化妝品等工業(yè)質(zhì)量控制、環(huán)境檢測、農(nóng)業(yè)植物學(xué)研究以及代謝組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)Biomarker的發(fā)現(xiàn)等相關(guān)研究。1.質(zhì)譜MRM技術(shù)的原理MRM技術(shù)是一種基于已知或假定的反應(yīng)離子信息，有
2018
06-19

質(zhì)譜鑒定常見問題解答
1.一級質(zhì)譜和二級質(zhì)譜有什么區(qū)別？什么時候做一級，什么時候做二級？答：一級質(zhì)譜鑒定的方式主要指胎指紋圖譜（PMF），即利用質(zhì)譜儀測量酶解片段的分子量并搜庫比較實現(xiàn)蛋白質(zhì)的鑒定，二級質(zhì)譜是在一級質(zhì)譜的基礎(chǔ)上再選擇部分肽段做進一步的破碎并對碎片進行深入分析和比較，鑒定出該肽段的序列并結(jié)合PMF的結(jié)果從而實現(xiàn)蛋白質(zhì)的鑒定。二級質(zhì)譜能夠得到部分肽短的序列，具有更高的可靠性。隨著現(xiàn)在雜志對數(shù)據(jù)的要求越來越嚴格，二級質(zhì)譜鑒定是蛋白鑒定的大趨勢，而且即使目前做一級質(zhì)譜鑒定的結(jié)果，也需要挑選部分PMF結(jié)果做二級
2018
06-15

氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用（GC/MS）技術(shù)在輕工行業(yè)的一些應(yīng)用
1.煙草香味成分分析煙草香味成分分析對煙草的品質(zhì)影響極大，是目前煙草行業(yè)關(guān)注的技術(shù)問題之一，我們采用同時蒸餾萃?。⊿DE），吹掃捕集、固相萃?。⊿PME）等樣品處理技術(shù)，與GC/MS技術(shù)相結(jié)合，對國內(nèi)外的香煙、煙葉原料作了大量的分析，鑒定出數(shù)個特殊的煙用香氣物質(zhì)，找出國內(nèi)外卷煙在配方、用料、加香各方面的一些不同的思路，對配方產(chǎn)生了較重要的指導(dǎo)作用。2.白酒香味成份分析各種白酒中香味成份的種類相差很小，但是各種香味成份含量較大，構(gòu)成了不同品牌、不同地區(qū)白酒的香味的風格各異。我們采用液/液萃?。↙/
2018
06-15

氣相色譜層析
（一）基本原理混合樣品的氣流通過固定相時，根據(jù)各組分對固定相的吸附強弱不同使不同成分得到分離。利用氣相色譜層析技術(shù)做為微生物診斷的工具已成功地用于微生物的分類和鑒定。該法敏感性強，能夠分離和檢測到毫微克的水平。它具有快速的特點，常在數(shù)十分鐘甚至數(shù)小時就可以對傳染病做出早期診斷。其結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，但不足之處是操作中各因素不易控制，方法不易標化等。（二）氣相色譜儀的基本部件1．載氣常用的載氣主要有氮、氬、氫和二氧化碳等。這些氣體一般都由高壓氣瓶供給。2．進樣器氣相色譜儀可以用于分離固相、氣相和液
2018
06-14

如何選擇過濾器
1、過濾器主要用于捕集0.3um以下的顆?；覊m及各種懸浮物。采用超細玻璃纖維紙作濾料，每臺均經(jīng)納焰法測試，具有過濾效率高、阻力低、容塵量大等特點。過濾器包括有隔板過濾器和無隔板過濾器，有隔板過濾器包括：有隔板過濾器，耐高溫過濾器，耐高濕過濾器，無隔板過濾器包括組合式組合式過濾器，無隔板過濾器，液槽無隔板過濾器，超低阻無隔板過濾器，刀架式無隔板過濾器，超過濾器0.1um過濾效率。2、過濾器是在末端送風處，設(shè)計選用過濾器時，應(yīng)由低到高來選用，能起到保護各級過濾器的使用壽命。如：G級過濾→F級過濾→H
2018
06-14

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀分類
氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀分類有多種。1、按分析規(guī)?？煞郑盒⌒蜌庀嗌V質(zhì)譜聯(lián)用儀和大型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。2、按分辨率可分：低分辨氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀、中分辨氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀和高分辨氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。3、按質(zhì)量分析器的時空屬性可分：時間型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀和空間型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。4、按質(zhì)量分析器的工作原理可分：氣相色譜四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀、氣相色譜離子阱質(zhì)譜聯(lián)用儀、氣相色譜飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用儀和氣相色譜傅里葉變換質(zhì)譜聯(lián)用儀等。5、按用途可分：生物氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀、制藥氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀、化工氣相色譜質(zhì)
2018
06-14

淺談四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀的操作維護及保養(yǎng)
年來,隨著食品中農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)的發(fā)展,氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀被廣泛使用,大多數(shù)使用者都能夠熟練操作儀器,但對于使用中應(yīng)特別注意的一些問題、儀器的日常維護及如何進行期間核查,國內(nèi)外尚缺乏文章進行詳細系統(tǒng)的介紹。而分析數(shù)據(jù)的準確可靠,儀器狀態(tài)是一個非常重要的影響因素,正確的使用及維護保養(yǎng)不僅可以確保儀器的良好狀態(tài),還可以延長儀器和易耗件的使用壽命。本文作者根據(jù)多年儀器操作經(jīng)驗,以FinnigantraceGCUltra、traceDSQ四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀為例,從載氣系統(tǒng)、質(zhì)譜真空系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、
2018
06-14

液相色譜之反相液相色譜
反相色譜（reversedphascchromatography,RPC）是基于溶質(zhì)、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應(yīng)建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結(jié)構(gòu)中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高，在液相色譜中這是應(yīng)用面廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色譜條件下，流動相多采用酸性的、低離子強度的水溶液，并加一定比例的能與水互溶的異丙醇、乙腈或甲醇等有機改性劑，大量使用的填料為孔徑在30納米以上的硅膠烷基鍵合相，除此之外，也有少量高聚物微球。實驗表明，烷基鏈長對蛋白質(zhì)
2018
06-13

藥物靶點開發(fā)與驗證淺談
相對于未知的藥物靶點來說，已知的藥物靶點只不過是冰山一角。如何能在眾多的未知里發(fā)現(xiàn)并找到有效的藥物靶點？靶點的選擇在整個藥物研發(fā)過程中起著至關(guān)重要的作用?，F(xiàn)代藥物研究中，新靶點的建立往往是新藥創(chuàng)新的前提和保障。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展和人類基因組計劃的完成，出現(xiàn)了大量可供治療干預(yù)的新型分子靶點，但并不是所有的靶點都能夠成為與疾病有關(guān)的有效靶點，因此對新型靶點進行開發(fā)和驗證便成為非常重要的工作。據(jù)統(tǒng)計，除抗感染、抗病毒和抗寄生蟲類藥物以外，制藥工業(yè)用來作為藥物靶向篩選的靶標已有417種，包括受
2018
06-13

中藥活性篩選與活性追蹤實驗
DPPH法實驗方法原理DPPH(2,2-二苯基-1-苦味基肼自由基，2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl)是一種比較穩(wěn)定的脂性自由基，其N上有一個游離電子，其乙醇溶液呈紫色，在517nm處有大的吸收峰。加入抗氧化劑以后，DPPH捕捉一個電子與游離電子配對，紫色褪去，變?yōu)闊o色物質(zhì)，在517nm處的吸收消失，其褪色程度與其接受的電子數(shù)成定量關(guān)系。依此原理用分光光度計檢測DPPH自由基與試樣液反應(yīng)后吸光值的變化，可檢定試樣提供氫原子、清除自由基抗氧
2018
06-12

探究磁珠法蛋白純化失敗的真相
磁珠法蛋白純化越來越受到很多科研小伙伴的青睞，使用磁珠純化方法比填料柱方法操作更加便捷、磁珠的載量更高、獲取的蛋白純度更高。在磁珠法蛋白純化被逐漸接受的同時，有的用戶由于剛接觸磁珠法蛋白純化，對于磁珠法的原理、性能不熟悉，導(dǎo)致純化過程中遇到些問題，今天小編就用戶使用磁珠過程中經(jīng)常遇到的問題，科普一番，開啟我們探究磁珠法蛋白純化失敗的真相之旅！His-tag蛋白純化磁珠原理His-tag蛋白純化磁珠是在瓊脂糖微球的內(nèi)部填充磁性內(nèi)核，在表面固定金屬離子Ni2+或Co2+，Ni2+或Co2+可以和蛋白
2018
06-12

PCR標準反應(yīng)體系及反應(yīng)條件
標準的PCR反應(yīng)體系：10×擴增緩沖液10ul4種dNTP混合物各200umol/L引物各10～100pmol模板DNA0.1～2ugTaqDNA聚合酶2.5uMg2+1.5mmol/L加雙或三蒸水至100ulPCR反應(yīng)五要素：參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
2018
06-11

關(guān)于加熱型磁力攪拌器加熱問題的探討
加熱型磁力攪拌器主要應(yīng)用于化學(xué)合成、分析化學(xué)和生命科學(xué)領(lǐng)域。對于加熱功能，客戶往往比較關(guān)注的加熱速度、控制溫度過沖和維持溫度穩(wěn)定性的能力，但加熱速度和控制溫度過沖是一對不可調(diào)和的矛盾，尤其是在開放的環(huán)境中針對不同介質(zhì)、不同體積的應(yīng)用，這對矛盾顯得更加難以平衡。為了能夠適應(yīng)更多客戶不同應(yīng)用的需求，的該類產(chǎn)品生產(chǎn)商都采用了類似的折中的控制方法------允許*次達到目標溫度時有一定程度的溫度過沖，之后不再允許有任何大幅度溫度過沖，并且盡快形成只在目標溫度附近非常小的震蕩（如圖1所示），這也必然導(dǎo)致了
2018
06-11

移液器使用小常識
1．使用合適的吸頭為確保更好的準確性和精度，建議移液量在吸頭的35％-100％量程范圍內(nèi)。2．吸頭的安裝對于大多數(shù)移液器，特別是多道移液器，安裝吸頭并非易事：為追求良好的密封性，需要將移液套柄插入吸頭后，左右轉(zhuǎn)動或前后搖動用力上緊。也有人會用移液器反復(fù)撞擊吸頭來上緊，但這樣操作會導(dǎo)致吸頭變形而影響精度，嚴重的則會損壞移液器，所以應(yīng)當避免出現(xiàn)這樣的操作。3．吸頭浸入角度和深度吸頭浸入角度控制在傾斜20度之內(nèi)，保持豎直為佳；吸頭浸入深度建議如下所示：移液器規(guī)格吸頭浸入深度2µL和10µL1mm20µ
2018
06-07

PI3K/Akt/mTOR信號通路
目的：通過特異性阻斷PI3K和mTOR，觀察HepG2和Hep3B細胞株P(guān)I3K/Akt/mTOR信號通路活性及生物學(xué)行為的改變，探討相關(guān)的分子機制。方法：在培養(yǎng)的HepG2、Hep3B人肝癌細胞株和人正常肝細胞株QSG-7701上，以免疫印跡方法（Westernblot）檢測各細胞株中PI3K（p110α亞單位）、PTEN、pAkt（S473，T308）和p-mTOR（S2448）的表達情況；分別用PI3K抑制劑LY294002（50μmol/ml）和mTOR抑制劑Rapamycin（RAPA

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