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2021
06-072021
06-072021
06-07大牛是這樣做成骨細(xì)胞誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)的!
一、實(shí)材料及試劑培養(yǎng)板、酒精燈、移液槍、CO2培養(yǎng)箱、顯微鏡等MC3T3-E1(前成骨細(xì)二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容試驗(yàn)方法:將MC3T3-E1(前成骨細(xì)胞)細(xì)胞接種于含MEM-α培養(yǎng)基(10%胎牛血清,1%青鏈霉素)的培養(yǎng)瓶內(nèi),放置于二氧化碳培養(yǎng)箱(37℃,5%CO2,潮濕)培養(yǎng),每三天更換一次培養(yǎng)液,待細(xì)胞鋪滿瓶底的80%以上時,用胰蛋白酶消化,加入MEM-α培養(yǎng)基(10%胎牛血清,1%青鏈霉素),將細(xì)胞吹打下來并吸取到10mL離心管中,離心,棄上清,注意不要碰到管口,加入MEM-α培養(yǎng)基(10%胎牛血清,2021
06-072021
06-04二氧化碳培養(yǎng)箱如何對CO2濃度進(jìn)行控制
二氧化碳培養(yǎng)箱濃度可以通過紅外傳感器(IR)或熱導(dǎo)傳感器(TC)進(jìn)行測量。兩種傳感器各有優(yōu)缺點(diǎn)。熱導(dǎo)傳感器:熱導(dǎo)傳感器監(jiān)控CO2濃度的工作原理是基于對內(nèi)腔空氣熱導(dǎo)率的連續(xù)測量,輸入CO2氣體的低熱導(dǎo)率會使腔內(nèi)空氣的熱導(dǎo)率發(fā)生變化,這樣就會產(chǎn)生一個與CO2濃度直接成正比的電信號。TC控制系統(tǒng)的一個缺點(diǎn)就是箱內(nèi)溫度和相對濕度的改變會影響傳感器的精確度。當(dāng)箱門被頻繁打開時,不僅CO2濃度,溫度和相對濕度也會發(fā)生很大的波動,因而影響了TC傳感器的精度。當(dāng)需要精確的培養(yǎng)條件和頻繁開啟二氧化碳培養(yǎng)箱門時,此2021
06-04無菌操作在細(xì)胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵作用
無菌操作是決定細(xì)胞培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵因素,即便使用設(shè)備完善的實(shí)驗(yàn)室,若實(shí)驗(yàn)者粗心大意,操作不規(guī)范,也會導(dǎo)致污染。因此,所有操作都要最大可能的保證無菌,每一項(xiàng)工作都必須做到有條不紊和*可靠。1、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前:在開始實(shí)驗(yàn)前要制定好實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和操作程序。有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算要事先做好。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,準(zhǔn)備各種所需器材和物品,如二氧化碳培養(yǎng)箱、凈化工作臺、離心機(jī)等,清點(diǎn)無誤后將其放置操作場所(培養(yǎng)室、超凈臺)內(nèi),然后開始消毒。這可以避免開始實(shí)驗(yàn)后,因物品不全往返拿取而增加污染機(jī)會。2、無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,2021
06-04細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染原理及實(shí)驗(yàn)步驟
細(xì)胞復(fù)蘇細(xì)胞復(fù)蘇是將保存在液氮或-80℃冰箱中的細(xì)胞株解凍并重新培養(yǎng)的過程。細(xì)胞復(fù)蘇的關(guān)鍵是快速。防止在解凍過程中,產(chǎn)生的水珠形成冰晶損傷細(xì)胞。細(xì)胞復(fù)蘇一般步驟如下:1.預(yù)先加熱水浴鍋,溫度至37-40℃,并在離心管中準(zhǔn)備好10mL培養(yǎng)基2.從液氮罐或冰箱中取出細(xì)胞,迅速放進(jìn)預(yù)熱的水浴鍋中,鑷子夾住凍存管晃動,使其受熱均勻3.當(dāng)凍存管內(nèi)*融化時,注意用酒精擦拭凍存管消毒,將液體倒入含有10mL培養(yǎng)基的離心管中4.離心5min,去除上清,得到沉淀5.用培養(yǎng)基懸浮沉淀,并接種到培養(yǎng)瓶常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞2021
06-032021
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06-032021
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06-03二氧化碳培養(yǎng)箱在使用時應(yīng)該注意些什么
二氧化碳培養(yǎng)箱廣泛應(yīng)用于細(xì)胞、組織培養(yǎng)和某些特殊微生物的培養(yǎng),常見于細(xì)胞動力學(xué)研究、哺乳動物細(xì)胞分泌物的收集、各種物理、化學(xué)因素的致癌或毒理效應(yīng)、抗原的研究和生產(chǎn)、培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)抗體、體外授精(IVF)、干細(xì)胞、組織工程、藥物篩選等研究領(lǐng)域。二氧化碳培養(yǎng)箱在使用時有兩條最基本的要求。一是要求二氧化碳培養(yǎng)箱能夠?qū)囟?、二氧化碳濃度和濕度提供穩(wěn)定的控制,以便于其研究工作的進(jìn)展;二是要求二氧化碳培養(yǎng)箱能夠?qū)ε囵B(yǎng)箱內(nèi)的微生物污染進(jìn)行有效的防范,并且能夠定期消除污染,以保護(hù)研究成果,防止樣品損失。使用2021
06-022021
06-022021
06-02高溫馬弗爐測定灰分、揮發(fā)分有哪些技術(shù)點(diǎn)?
揮發(fā)分的測定技術(shù)要求:1)高溫馬弗爐內(nèi)溫度應(yīng)嚴(yán)格控制在900℃±10℃的范圍內(nèi)。當(dāng)打開爐門放進(jìn)試樣關(guān)閉爐門后,爐溫必須在3分鐘內(nèi)恢復(fù)到900℃±10℃。2)加熱時間的計(jì)時工具應(yīng)用秒表,即當(dāng)試樣一送入高溫爐的高溫區(qū)開始計(jì)時,到試樣離開高溫爐為止,這一段操作過程應(yīng)準(zhǔn)確的為7min。否則試樣應(yīng)作廢重新稱量開始。3)測定揮發(fā)分應(yīng)用蓋上帶槽的專用測定揮發(fā)分的坩堝。稱量試樣時應(yīng)連同坩堝蓋一起稱重。當(dāng)坩堝在爐內(nèi)灼燒時應(yīng)避免坩堝與坩堝之間、坩堝與高溫馬弗爐爐壁的直接接觸。4)在測定時,如果在坩堝或坩堝蓋上聚有黑2021
06-022021
06-02使用二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)HCC827細(xì)胞
注意事項(xiàng)凍存細(xì)胞接收后的處理:1.干冰運(yùn)輸,收到細(xì)胞后立即轉(zhuǎn)入-80℃冰箱短暫中轉(zhuǎn)或直接復(fù)蘇;2.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)*揮發(fā)、凍存管瓶蓋破裂脫落,請立即拍照后與我們聯(lián)系。復(fù)蘇細(xì)胞接收后的處理:1.收到細(xì)胞后,請首先檢查培養(yǎng)瓶是否破損或漏液,培養(yǎng)液是否混濁,如有漏液及培養(yǎng)液混濁情況請立即拍照把圖片發(fā)給我們。2.75%酒精消毒瓶身后放二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置4-6h后,在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)并拍照100倍和200倍的照片,若有貼壁細(xì)胞脫落,可收集上清離心,將沉淀用新的培養(yǎng)基接種至新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿2021
06-012021
06-01CO2培養(yǎng)箱的防污染設(shè)計(jì)和消毒滅菌系統(tǒng)
二氧化碳培養(yǎng)箱是通過在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個類似細(xì)胞/組織在生物體內(nèi)的生長環(huán)境,培養(yǎng)箱要求穩(wěn)定的溫度(37°C)、穩(wěn)定的CO2水平(5%)、恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4)、較高的相對飽和濕度(95%),來對細(xì)胞/組織進(jìn)行體外培養(yǎng)的一種裝置,是細(xì)胞、組織、細(xì)菌培養(yǎng)的一種先進(jìn)儀器,是開展免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)及生物工程所必須的關(guān)鍵設(shè)備。二氧化碳培養(yǎng)箱的設(shè)計(jì)了多種不同的裝置去減少和防止污染的發(fā)生,其主要途徑都是盡量減少微生物可以生長的區(qū)域和表面,并結(jié)合自動排除污染裝置來有效防止污染的產(chǎn)生。污2021
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