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原代細胞分選的步驟2018/02/24

原代細胞當(dāng)經(jīng)熒光染色或標(biāo)記的單細胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動室內(nèi)。流動室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的包裹和推動下，細胞被排成單列，以一定速度從流動室噴口噴出。在流動室的噴口上配有一個超高頻的壓電晶體，充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)過帶有幾千伏的偏轉(zhuǎn)板時，在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn)，落入各自的收集容器中，沒有充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現(xiàn)細胞的分離。流式細胞分選的特點1.少量細胞分選時，流式細胞分選度高（99%以

細胞株的染色體進行復(fù)制的方法2018/02/10

細胞株的有絲分裂（mitosis）過程中，母細胞的染色體進行復(fù)制，隨后兩個包含微管的紡錘體與這些染色體相連，將每個染色體的兩份拷貝相互分離并拉向相反的方向。計時器（Timer），可能是實驗室里zui不起眼但又無法缺少的設(shè)備。有沒有開了反應(yīng)半天才突然驚覺沒有按下Timer的經(jīng)歷？做實驗少不了計時器，細胞分裂也一樣少不了計時器。分裂是zui基本的細胞活動之一，人從一個受精卵變成多細胞團，再到胚胎、幼兒直到成年，中間經(jīng)歷了無數(shù)次細胞的分裂，可謂生命不息，細胞分裂不止。細胞分裂形成新器官、新組織，分裂產(chǎn)

實現(xiàn)原代細胞的分離的技術(shù)方法2018/02/08

原代細胞是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段，可以每秒鐘分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞中測得多個參數(shù)。細胞分選的原理當(dāng)經(jīng)熒光染色或標(biāo)記的單細胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動室內(nèi)。流動室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的包裹和推動下，細胞被排成單列，以一定速度從流動室噴口噴出。在流動室的噴口上配有一個超高頻的壓電晶體，充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)過帶有幾千伏的偏轉(zhuǎn)板時，在高壓電場的作用下偏

腫瘤細胞自噬出現(xiàn)的時間與強度2018/02/06

腫瘤細胞自噬作為一項真核生物*的生理現(xiàn)象,開始應(yīng)用于不同的領(lǐng)域。澳大利亞學(xué)者通過對果蠅自噬信號通路中上下游基因的敲除,確定了自噬在果蠅程序性清除中腸中的重要作用。自噬與癌癥之間的一直是眾多學(xué)者關(guān)注的焦點,美國學(xué)者通過在小鼠中突變自噬上游調(diào)節(jié)基因beclin1,證實當(dāng)beclin1為雜合子時,小鼠體內(nèi)的腫瘤增長更迅速,過表達beclin1則會抑制腫瘤的生長。這些研究闡明了自噬的新功能,開辟了新的研究方向,也給了我們將自噬運用于低溫脅迫研究的靈感。本文對自噬的特異基因LC3進行標(biāo)記,通過檢測自噬小體

原代細胞保持Z佳狀態(tài)的方法2018/02/01

隨著原代細胞機體衰老，血液干細胞也并不太會*地發(fā)揮自身的功能了，這就會導(dǎo)致65歲以上的人群機體抵御感染疾病的能力下降，同時還會增加這些人群患血液癌癥的風(fēng)險。老年人通常并不適合進行骨髓移植用來治療多種血液疾病，這是因為骨髓移植會給老年人帶來較高程度的并發(fā)癥風(fēng)險，在一個成年人體內(nèi)一般有充足的干細胞來重建造血系統(tǒng)，但對于老年人而言這種功能或許非常受限，因此支持血液干細胞恢復(fù)的策略或許就能幫助擴大骨髓移植受體患者的范圍。因此，并不像是單純的管道系統(tǒng)，我們可以將血管細胞視為沿著自行車賽道排隊的活躍支持者，

原代細胞核心成分2018/01/30

原代細胞核接頭蛋白LDB1是多蛋白轉(zhuǎn)錄復(fù)合體中的一個核心成分。Li等研究發(fā)現(xiàn),在小鼠胚胎和成體造血干細胞中LDB1起到關(guān)鍵作用。在造血干細胞和前體細胞中敲除該基因會造成一些維持多能性相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄下調(diào),ChIP-Seq結(jié)果顯示,LDB1形成的復(fù)合體結(jié)合在這些基因的啟動子區(qū)域,暗示LDB1維持造血干細胞中起核心作用。多能造血前體細胞是一種干細胞樣細胞,表達各種基因,且有分化成包括免疫系統(tǒng)細胞在內(nèi)的大量不同類型血細胞的能力。Zhang等利用ChIPSeq和RNA-seq技術(shù)在小鼠全基因組內(nèi)找出造血前

腫瘤細胞轉(zhuǎn)染要素2018/01/25

腫瘤細胞使用瞬時轉(zhuǎn)染來蛋白瞬時轉(zhuǎn)染表達蛋白以往為了獲得蛋白質(zhì)的高表達產(chǎn)量，必須先轉(zhuǎn)染細胞，然后挑選一個穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染細胞系進行蛋白的擴增和富集。而挑選這樣一個細胞系往往需要花費數(shù)周甚至數(shù)月的時間，這既可能是由于試劑的細胞毒性也可能是由于轉(zhuǎn)染的低效率。如果是因為轉(zhuǎn)染試劑具有細胞毒性，那么只有少數(shù)細胞能夠存活，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)的產(chǎn)量很低。而如果是因為轉(zhuǎn)染成功的細胞太少，那么那些未轉(zhuǎn)染的細胞生長速度大大超過轉(zhuǎn)染成功的細胞，其結(jié)果同樣也只能產(chǎn)生少量的目標(biāo)蛋白。使用一種溫和的可以轉(zhuǎn)染大多數(shù)細胞的轉(zhuǎn)染試劑，就可獲

原代細胞的四大特點2018/01/23

1、生命的起源原代細胞人體起源一個單細胞受精卵(*代干細胞)，經(jīng)歷卵裂(干細胞持續(xù)擴增，增加細胞數(shù)量)、胚層出現(xiàn)(干細胞開始分化出功能細胞)、組織器官形成(功能細胞的有序排列)及胚后發(fā)育這樣一個連續(xù)過程。2、維持人體動態(tài)平衡的種子細胞人體通過干細胞增殖和分化來實現(xiàn)細胞更新。成年并不意味著細胞增殖和細胞分化的結(jié)束，而仍然存在著受調(diào)控的組織更新過程。在一些組織中，如骨髓、表皮等，新細胞可不斷地產(chǎn)生，以補充因分化而衰老、死亡的細胞。干細胞的增殖保持著機體內(nèi)細胞的動態(tài)平衡。3、干細胞功能表達體現(xiàn)出生命發(fā)

勿怕原代細胞消化過度2018/01/18

對于初學(xué)者而言，養(yǎng)原代細胞就像養(yǎng)孩子一樣，有空就要去看看。細胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處，特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環(huán)境。你跑去看細胞，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經(jīng)?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇毎?，細胞老是長不好。老手細胞一扔好幾天不管，細胞瘋長。在傳代的時候，初學(xué)者往往生怕細胞消化過度，早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈，

細胞株是否會受到免疫排斥2018/01/11

研究人員發(fā)現(xiàn)相對于細胞株形成的畸胎瘤，由iPS形成的畸胎瘤中的某些基因呈高水平表達。其中的Zg16及Hormad1兩個基因的異常表達可直接導(dǎo)致遭受特異的免疫攻擊。研究人員表示這些基因在正常情況下處于關(guān)閉狀態(tài)直至胚胎開始對自身組織形成免疫耐受為止，如此就能確保它們不會被宿主所識別。而iPS的重編程程序有可能改變了這些基因的正常表達。長久以來，科學(xué)家們在開展iPS研究的過程中把iPS衍生獲得的終末分化細胞例如神經(jīng)細胞或心肌細胞移植到小鼠體內(nèi)，證實它們不會引起免疫排斥（但事實上其中的大部分實驗都是在缺

何促進原代細胞生長并抑制分化？2018/01/09

原代細胞為了保持hESC存活且具有多能性，研究人員通常在滋養(yǎng)層細胞（也就是一層小鼠胚胎成纖維細胞）上培養(yǎng)，或者在微載體上成簇培養(yǎng)。但是在這些基質(zhì)上培養(yǎng)干細胞是相當(dāng)昂貴的，而且培養(yǎng)物不能在很長時間內(nèi)保持未分化狀態(tài)，盡管所有必需的生長因子都存在。這種培養(yǎng)基能夠在無滋養(yǎng)層的條件下長時間維持神經(jīng)細胞的生長和正常表型。在研究過程中，研究人員注意到并非所有細胞都分化了。他們懷疑是培養(yǎng)基的選擇導(dǎo)致了這種現(xiàn)象，于是他們開始集中精力研究培養(yǎng)基如何促進干細胞生長并抑制分化。使用這種新的培養(yǎng)基，研究小組檢驗了三種不同

細胞系的物理性質(zhì)2018/01/05

（１）細胞系的密度單位體積中粉塵的質(zhì)量稱為粉塵的密度，單位為ｋｇ／ｍ３或ｇ／ｃｍ３。由于粉塵產(chǎn)生的情況不同，測試條件不同，獲得的密度值亦不同。所以一般將粉塵的密度分為真密度和堆積密度等不同的概念。以真實體積所得的密度稱為粉塵的真密度，常用符號ρｐ表示。粉塵在自然堆積狀態(tài)下，顆粒之間和顆粒內(nèi)部都存在空隙。以堆積體積求得的密度稱為粉塵的堆積密度，常用符號ρｂ表示。對于一定種類的粉塵，其真密度為一定值，而其堆積密度則隨空隙率（是指粉塵粒子間的空隙體積與堆積粉塵的總體積之比值，常用符號ε表示）而變化。粉

腫瘤細胞調(diào)控元件的分析2018/01/03

腫瘤細胞轉(zhuǎn)染方法不同，對轉(zhuǎn)染結(jié)果影響很大。常見的轉(zhuǎn)染方法有：1.磷酸鈣法：該方法利用磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞原理得到瞬時或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染結(jié)果，操作簡便但重復(fù)性差，不可用于原代細胞的轉(zhuǎn)染。2.DEAE-右旋糖苷法：帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細胞內(nèi)吞，可用于瞬時轉(zhuǎn)染，方法相對簡便、結(jié)果可重復(fù)但對細胞有一定的毒副作用。3.電穿孔法：利用高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時轉(zhuǎn)染均適用。適用性廣但細胞致死率高，DNA和細

細胞株分離培養(yǎng)關(guān)鍵因素2017/12/28

近期根據(jù)經(jīng)驗總結(jié)了細胞株分離培養(yǎng)的2個關(guān)鍵因素。1、組織的活性：如果我們?nèi)〉亩际菈乃赖慕M織或者結(jié)締組織，我相信任何方法都不可能分離出來活的細胞的。另外，取完的組織要冷藏存放，并且越早分離越好，在24h內(nèi)，zui久不要超過48h。2、組織的消化：在組織消化前，組織剪的越碎越好（1mm3左右為宜），細胞株組織的大小決定了組織的消化時間，不同組織消化時間差別較大：例如肺癌在2h-2.5h；食管癌在1個多小時。四lv對苯二甲suan標(biāo)準(zhǔn)品1000mg/L于甲醇,1ml丁草胺CDGG-031003-031

腫瘤細胞的比率及分選后的回收率2017/12/26

在進行腫瘤細胞分選前，保留一小部分起始樣本是非常重要的。這樣有助于評估分選前樣品中目標(biāo)細胞的比率及分選后該細胞的回收率。各種組織和細胞來源中的細胞比率可以根據(jù)已發(fā)表的數(shù)據(jù)來估算。然而，實際操作中，細胞比率可能因供體而異，并且取決于是否來自正常的、患病的還是轉(zhuǎn)基因的樣本。細胞回收率：計算分選后的細胞回收率是評估實驗是否成功的寶貴工具。需要準(zhǔn)確地得到以下四個數(shù)據(jù)：分選前起始樣本中的細胞總數(shù)*目標(biāo)細胞在起始樣本中的比率*分選后的細胞總數(shù)分選后目標(biāo)細胞的純度使用以下公式計算細胞回收率：回收率=[(3)x

細胞系自然分化轉(zhuǎn)錄因子控制2017/12/21

細胞系自然分化生成特定細胞的過程由轉(zhuǎn)錄因子控制，這些轉(zhuǎn)錄因子直接控制了基因表達。因此該研究團隊系統(tǒng)地研究了不同的轉(zhuǎn)錄因子組合對干細胞分化為GABA分泌神經(jīng)元的影響。zui終他們發(fā)現(xiàn)了三種關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子，通過優(yōu)化的實驗方法，他們只需要35天就可以將超過90%的干細胞轉(zhuǎn)化為GABA分泌神經(jīng)元。就連Sun本人都對這一實驗結(jié)果感到震驚：“這些誘導(dǎo)出來的細胞就像真正成熟的神經(jīng)元一樣。”他和他的同事在這些細胞中發(fā)現(xiàn)了不同亞型的GABA分泌神經(jīng)元，它們的分子及電生理學(xué)特征與自然發(fā)育的神經(jīng)元幾乎*一致。事實上，

原代細胞轉(zhuǎn)染實驗步驟2017/12/14

原代細胞實驗需要注意以下幾點：1、DNA的量：Lipofectamine2000=1：2~32、細胞密度大約占培養(yǎng)板的80%左右，轉(zhuǎn)染。3、轉(zhuǎn)染期間不要加抗生素，否則會導(dǎo)致細胞死亡。步驟如下：以24孔培養(yǎng)板為例1、轉(zhuǎn)染前一天細胞換新的培養(yǎng)基2、制備DNA-Lipofectamine2000復(fù)合物，如下:a、用50ul無血清培養(yǎng)基稀釋DNA（0.8g），輕輕混勻；b、Lipofectamine2000使用前，輕輕混勻，用48ul無血清培養(yǎng)基稀釋2ulLipofectamine2000，輕輕混勻，室

腫瘤細胞的分子結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)2017/12/12

腫瘤細胞廣泛存在于自然界中，幾乎所有的油脂中都含有數(shù)量不等的軟脂酸組分。中國產(chǎn)的烏桕種子的烏桕油中，軟脂酸的含量可高達60%以上，棕櫚油中含量大約為40%，菜油中的含量則不足2%。分子結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)1、摩爾折射率：77.732、摩爾體積（m3/mol）：287.33、等張比容（90.2K）：690.54、表面張力（dyne/cm）：33.35、腫瘤細胞極化率（10-24cm3）：30.81200mg130372-200301乙酰吉它霉素效價測定100mg130375-200701制霉菌素效價測定50m

腫瘤細胞的應(yīng)用能力2017/12/05

腫瘤細胞衍生的神經(jīng)元移植后，小鼠表現(xiàn)出恢復(fù)，而細胞仍然成長為它們*成熟的形式，這項研究類似于2013年加州大學(xué)舊金山分校發(fā)表的一項研究，當(dāng)時科學(xué)家將胎兒小鼠的腦細胞移植到癲癇小鼠中。雖然這些研究結(jié)果鼓舞人心，但是Chung指出，還需要一個過程來純化神經(jīng)元，所以只有那些已知抑制癲癇發(fā)作的神經(jīng)元（稱為中間神經(jīng)元）才能被移植，在考慮用于人類治療之前，需要完成進一步的靈長類動物研究?！耙驗榕咛ジ杉毎軌蚍只啥喾N不同的細胞類型，甚至當(dāng)我們將它們轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元時，總是還會有其他類型的細胞。對于臨床用途，我們

腫瘤細胞擴增的瓶頸在哪里2017/11/30

培養(yǎng)人類胚胎腫瘤細胞的研究者們發(fā)現(xiàn)，核型正常的細胞在植板（plating）之后只有少數(shù)能夠分裂，而且它們的子細胞還會出現(xiàn)持續(xù)性的死亡，很少能形成可以長期增殖的克隆。Sheffield大學(xué)的PeterAndrews教授和DanielCoca教授領(lǐng)導(dǎo)研究團隊，對單個人類胚胎干細胞進行了延時成像，并由此鑒定了限制干細胞生長的主要瓶頸。研究顯示，在長期培養(yǎng)過程中發(fā)生了適應(yīng)性突變的干細胞，受到的生長限制有所緩解，能夠進行更有效的擴增。Sheffield大學(xué)的DrIvanaBarbaric說：“我們研究胚胎