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2023
10-09

如何選擇合適的DNA提取試劑盒？
實(shí)驗(yàn)室工作中，經(jīng)常會(huì)需要用到純化的DNA，這時(shí)我們通常需要使用一個(gè)商業(yè)的DNA提取試劑盒對(duì)目的DNA進(jìn)行分離純化。那么我們?cè)撊绾芜x擇合適的DNA提取試劑盒呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、試劑盒組分目前大多數(shù)DNA提取試劑盒遵循相同的基本步驟:裂解，柱純化，洗滌雜質(zhì)，柱洗脫。然而，不同的盒子在完成每個(gè)步驟的方式上有很大的不同。二、使用的樣本類型不同的DNA來(lái)源有不同的試劑盒，從實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)胞，到臨床樣本，土壤樣本，甚至指紋，也有許多專門用于某些應(yīng)用的試劑盒。例如，土壤中的腐殖酸或血液中的血紅蛋白會(huì)污
2023
10-09

DNA提取試劑盒的原理是什么？
如今，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都使用商業(yè)DNA提取試劑盒，這些試劑盒使用硅膠自旋過(guò)濾法來(lái)獲得高質(zhì)量的DNA。這些可以快速有效地純化DNA（或RNA）。那么DNA提取試劑盒的原理是什么呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、RNA和DNA提取裂解：裂解公式可能因您要提取DNA還是RNA而異，但共同點(diǎn)是含有高濃度離液鹽的裂解緩沖液。Chaotropes（離液劑）的作用：Chaotrope會(huì)破壞氫鍵及疏水間的相互作用。離液鹽包括鹽酸胍、硫氰酸胍、尿素和高氯酸鋰。洗滌劑：除了離液劑外，裂解緩沖液中通常還有一些去污劑，以幫助蛋白
2023
10-09

ELISA試劑盒的原理是什么？
你知道ELISA試劑盒的原理是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)用于IgG定量測(cè)定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法。Elisa試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法，例如:Elisa檢測(cè)試劑盒、ElisaKit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高，特異
2023
10-09

ELISA檢測(cè)方法有哪些？
根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀及檢測(cè)的具備條件的不同，所使用的檢測(cè)方法也不同，那么ELISA檢測(cè)方法有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、雙抗體夾心法測(cè)抗原雙抗體夾心法是將特異性抗體結(jié)合到固相載體上形成固相抗體，然后和待測(cè)血清中的響應(yīng)抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物，洗滌后加酶標(biāo)記抗體，與免疫復(fù)合物中的抗原結(jié)合形成酶標(biāo)抗體-抗原-固相抗體復(fù)合物，加底物顯色，判斷抗原的含量。二、競(jìng)爭(zhēng)法首先將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液，另一組只加酶標(biāo)記抗原，經(jīng)孵育洗滌后加底物顯
2023
10-09

什么是文庫(kù)構(gòu)建？
基于NGS測(cè)序的諸多優(yōu)點(diǎn)，故此技術(shù)在全球測(cè)序市場(chǎng)上占有著絕對(duì)的優(yōu)勢(shì)位置，而新一代測(cè)序（NGS）文庫(kù)制備是一體化測(cè)序流程中的一個(gè)關(guān)鍵因素，那么什么是文庫(kù)構(gòu)建呢？讓我們一起來(lái)看看吧！基因文庫(kù)是儲(chǔ)存了某種生物的DNA片段的受體菌的集合體。文庫(kù)分為儲(chǔ)存全部DNA片段和部分DNA片段，前者叫基因組文庫(kù)，后者包括cDNA文庫(kù)。文庫(kù)構(gòu)建的基礎(chǔ)是將目標(biāo)RNA或DNA制備成可以和測(cè)序儀器兼容的形式。從組織或者細(xì)胞中將DNA或RNA提取出來(lái)，并通過(guò)機(jī)械破碎或者是酶切法對(duì)其進(jìn)行片段化。如果前面提取的是RNA樣本，則需
2023
10-08

不同動(dòng)物細(xì)胞或組織的蛋白質(zhì)抽提步驟是怎樣的？
你知道不同動(dòng)物細(xì)胞或組織的蛋白質(zhì)抽提步驟是怎樣的嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、培養(yǎng)的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的蛋白質(zhì)抽提步驟1.從貼壁細(xì)胞培養(yǎng)瓶中小心傾去培養(yǎng)液。2.預(yù)冷的PBS清洗貼壁的細(xì)胞2次，小心傾去PBS。3.配置含抑制劑的蛋白質(zhì)抽提試劑（1ml抽提試劑中加入5μl蛋白酶抑制劑混合液，5μlPMSF和5μl磷酸酶混合液）。4.細(xì)胞瓶中加入預(yù)冷的含抑制劑的蛋白質(zhì)抽提試劑（107個(gè)細(xì)胞中加入1ml抽提試劑；5×106個(gè)細(xì)胞中加入0.5ml抽提試劑），輕輕搖動(dòng)5分鐘。5.用一預(yù)冷的橡膠和塑料細(xì)胞刮將培養(yǎng)瓶壁
2023
10-08

質(zhì)粒構(gòu)建實(shí)驗(yàn)影響因素有哪些？
質(zhì)粒構(gòu)建是指選定的目的外源基因（DNA）先要經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增。隨后用限制性內(nèi)切酶分別切割載體和外源DNA片段，再使用DNA連接酶將切割后的載體與DNA片段連接，轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞。最后經(jīng)過(guò)篩選鑒定出正確的重組克隆質(zhì)粒，實(shí)現(xiàn)目的基因在宿主細(xì)胞內(nèi)的正確表達(dá)。那么質(zhì)粒構(gòu)建實(shí)驗(yàn)影響因素有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、載體的選擇在選擇克隆載體時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：①具有自主復(fù)制能力，拷貝數(shù)高；②攜帶易于篩選的選擇標(biāo)記；③含有多種限制酶的單一識(shí)別序列，以供外源基因插入；④載體應(yīng)盡可能?。ǎ?5kb），便于導(dǎo)入細(xì)胞和進(jìn)
2023
10-08

影響熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)的因素有哪些？
熒光原位雜交是一門新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀(jì)80年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非放射性原位雜交技術(shù)。那么影響熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)的因素有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、固定液的選擇及固定時(shí)間①石蠟組織建議用10%中性緩沖福爾馬林固定12～48h，其它固定液對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能產(chǎn)生一定的影響。②組織標(biāo)本離體后應(yīng)盡快固定，較大標(biāo)本切開固定。如樣本固定不及時(shí)，熒光信號(hào)會(huì)減弱。（尤其環(huán)境溫度較高時(shí)更應(yīng)及時(shí)固定）③固定液體積應(yīng)不少于標(biāo)本體積的10倍，否則固定不充分，容易出現(xiàn)無(wú)信號(hào)
2023
10-08

流式細(xì)胞周期檢測(cè)的常見問(wèn)題有哪些？
你知道流式細(xì)胞周期檢測(cè)的常見問(wèn)題有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、樣本制備注意事項(xiàng)1.根據(jù)不同的檢測(cè)細(xì)胞調(diào)整合適的溫度、濕度、酸堿度等培養(yǎng)環(huán)境，注意一定要無(wú)菌的環(huán)境培養(yǎng)。2.培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，以對(duì)數(shù)期處理為宜，避免細(xì)胞量過(guò)少導(dǎo)致收集細(xì)胞量不足或者細(xì)胞量過(guò)多導(dǎo)致細(xì)胞開始大量死亡造成的實(shí)驗(yàn)誤差。3.流式檢測(cè)細(xì)胞周期上機(jī)檢測(cè)所需收集細(xì)胞量較多，收集細(xì)胞時(shí)盡量多收集一些4.流式檢測(cè)對(duì)細(xì)胞離心，重懸次數(shù)較多，注意動(dòng)作輕緩，避免過(guò)多地?fù)p傷、弄破細(xì)胞。5.本實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞離心，重懸次數(shù)較多，注意動(dòng)作輕緩，避免過(guò)多地?fù)p傷
2023
10-08

【干貨】一文了解vero細(xì)胞培養(yǎng)全流程
Vero細(xì)胞系是連續(xù)非整倍體細(xì)胞，連續(xù)細(xì)胞系可以經(jīng)過(guò)多次分裂而不衰老，非整倍體是指細(xì)胞中的染色體數(shù)目與通常的不同。與其它普通哺乳動(dòng)物細(xì)胞不同，Vero細(xì)胞還有干擾素分泌缺陷的特點(diǎn)，當(dāng)被病毒感染時(shí)，它不能分泌干擾素，但它仍然具有α/β-干擾素的受體，所以對(duì)于其它來(lái)源的干擾素仍有正常的反應(yīng)。一、基本信息細(xì)胞名稱：Vero非洲綠猴腎細(xì)胞細(xì)胞別稱：VERO;Verdareno細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)組織來(lái)源：正常腎培養(yǎng)基：MEM+10%FBS+1%PS生長(zhǎng)條件：①氣相：95%空氣+5%二氧
2023
10-07

原代細(xì)胞培養(yǎng)的分離注意事項(xiàng)有什么？
分離是原代細(xì)胞培養(yǎng)的重要步驟之一，那么你知道原代細(xì)胞培養(yǎng)的分離注意事項(xiàng)有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、組織塊培養(yǎng)法1.組織塊接種后的前3天，在觀察和移動(dòng)的過(guò)程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng)，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會(huì)脫落飄起。2.加入的培養(yǎng)液不宜過(guò)多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來(lái)。3.當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來(lái)后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。4.為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)
2023
10-07

原代細(xì)胞取材的注意事項(xiàng)有哪些？
取材作為原代細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中至關(guān)重要的一步，那么原代細(xì)胞取材的注意事項(xiàng)有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、皮膚和粘膜主要取皮片，面積一般2~4平方厘米。二、內(nèi)臟和實(shí)體瘤1.無(wú)菌環(huán)境；2.熟悉所需組織的類型和部位；3.要避開破潰、壞死液化部分，以防污染，盡量去除混雜的結(jié)締組織。三、血液細(xì)胞一般多抽取靜脈外周血，或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結(jié)等)分離細(xì)胞，取材時(shí)應(yīng)注意抗凝。四、骨髓、羊水、胸/腹水細(xì)胞嚴(yán)格無(wú)菌，注意抗凝，還要盡快分離培養(yǎng)，離心后，用無(wú)鈣、鎂PBS洗兩次，再用培養(yǎng)液洗一次后即可
2023
10-07

WB實(shí)驗(yàn)常見問(wèn)題有哪些？如何解決？
WesternBlot雖是實(shí)驗(yàn)室zui常用的蛋白分析技術(shù)，但是由于它步驟繁瑣、操作流程長(zhǎng)、影響因素多，所以導(dǎo)致在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中會(huì)遇到各式各樣的問(wèn)題，那么你知道WB實(shí)驗(yàn)常見問(wèn)題有哪些呢？該如何解決呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、目標(biāo)條帶沒有信號(hào)原因分析：1.樣品中可能含有蛋白酶，使蛋白樣品分解成小分子。2.目標(biāo)蛋白濃度過(guò)低（低于檢測(cè)下線）。3.轉(zhuǎn)膜時(shí)間太短導(dǎo)致目標(biāo)蛋白沒有充分轉(zhuǎn)移到膜上，或者轉(zhuǎn)膜時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致樣品轉(zhuǎn)穿。4.一抗的特異性不佳，導(dǎo)致一抗無(wú)法識(shí)別目標(biāo)蛋白。解決方法：1.添加蛋白酶抑制劑。2.加大上
2023
10-07

你知道RNA提取的實(shí)驗(yàn)步驟是什么嗎？
RNA是目前發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)生物功能zui豐富多樣的生物大分子，同時(shí)是DNA與蛋白質(zhì)信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時(shí)代的重要手段，那么你知道RNA提取的實(shí)驗(yàn)步驟是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！以Trizol法提取組織細(xì)胞為例：1.提取細(xì)胞RNA時(shí)，先離心沉淀細(xì)胞，每5~106個(gè)細(xì)胞加1mlTrizol后，反復(fù)用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細(xì)胞；2.將上述組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中，在室溫15~30℃下放置5分鐘；3.在上述EP管中，按照每1mlTrizol后加0.2ml
2023
10-07

RNA提取成功的要點(diǎn)有哪些？
RNA是目前發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)生物功能zui豐富多樣的生物大分子，同時(shí)是DNA與蛋白質(zhì)信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時(shí)代的重要手段。那么你知道RNA提取成功的要點(diǎn)有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！1.組織樣本要盡可能的新鮮，避免反復(fù)凍融。2.提取時(shí)組織要充分研磨，組織量不宜過(guò)少，更不宜過(guò)多。3.加入裂解液后應(yīng)給予充分的孵育時(shí)間，使樣本充分裂解。4.在用Trizol法提取時(shí)，分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸，不能多吸”，千萬(wàn)不能提取到中間層，否則會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的基因組DNA污染。5.洗滌時(shí)
2023
09-28

Alzet滲透泵2002使用注意事項(xiàng)
Alzet滲透泵2002是一種小型、可植入式的膠囊滲透泵，可應(yīng)用于小鼠、大鼠及其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究。該泵無(wú)需進(jìn)行外部連接或頻繁處理，就能以恒定的速率持續(xù)給藥1天到14天的時(shí)間。Alzet滲透泵2002泵送率為0.5μl/hr(±0.1μl/hr)，持續(xù)時(shí)間為14天，泵容量為200μl。Alzet滲透泵2002由3個(gè)組件組成，分別是：灌注管(fillingtube)、流量調(diào)節(jié)器(flowmoderator)、泵(pumpbodymaterials)。為了更好的使用Alzet滲透泵2002，在使用時(shí)，有
2023
09-28

Alzet滲透泵工作原理
Alzet滲透泵(ALZETOsmoticPump)，又名為Alzet植入式膠囊滲透壓泵，是一種高效動(dòng)物給藥系統(tǒng)。Alzet滲透泵體積小巧，常用于大鼠、小鼠及其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的藥劑泵送。Alzet滲透泵共有12個(gè)型號(hào)的產(chǎn)品，可根據(jù)給藥時(shí)間、給藥速度來(lái)選擇合適的型號(hào)，具體的產(chǎn)品型、泵容積、泵送速率見下表：Alzet滲透泵可植入動(dòng)物的皮下或者腹腔內(nèi)，亦可連接上導(dǎo)管，輸送到動(dòng)脈或者靜脈內(nèi)，從而到達(dá)局部組織或者器官，從歷年的文獻(xiàn)來(lái)看，科學(xué)家們已經(jīng)將Alzet滲透泵應(yīng)用到了如腦、脊髓、肝臟、脾臟等器官或組織，
2023
09-28

流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用有什么？
流式細(xì)胞術(shù)（FCM）是一種對(duì)處在快速流動(dòng)中的細(xì)胞或其它生物微粒逐個(gè)進(jìn)行多參數(shù)的快速定量分析和分選的技術(shù)。它集計(jì)算機(jī)技術(shù)、激光技術(shù)、流體力學(xué)、熒光標(biāo)記技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)、細(xì)胞免疫學(xué)于一體，按照細(xì)胞或生物顆粒的物理或化學(xué)性質(zhì)，同時(shí)具有分析和分選細(xì)胞或生物顆粒的功能。那么你知道流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、流式細(xì)胞術(shù)科研應(yīng)用1.細(xì)胞凋亡檢測(cè)在正常細(xì)胞中，細(xì)胞膜上的磷脂酰絲氨酸（PS）位于胞漿側(cè)。細(xì)胞凋亡中期，PS外翻。AnnexinV是一種Ca2+依賴的對(duì)PS具有高度親和力的磷脂
2023
09-28

Alzet Osmotic Pumps說(shuō)明書
AlzetOsmoticPumps有多種尺寸、持續(xù)時(shí)間和流量可供選擇，以滿足廣泛的研究需求。當(dāng)每種型號(hào)的滲透泵送速率在制造時(shí)是固定的時(shí)，可通過(guò)改變每臺(tái)滲透泵中填充的藥劑濃度來(lái)調(diào)整輸送藥劑的劑量。如果動(dòng)物足夠大，可同時(shí)植入多個(gè)滲透泵，以獲得比單滲透泵更高的輸送速率。對(duì)于更長(zhǎng)時(shí)間的輸送，滲透泵可以連續(xù)植入，而不會(huì)產(chǎn)生不良影響。更多請(qǐng)參照AlzetOsmoticPumps的使用說(shuō)明書。一、動(dòng)物注意事項(xiàng)AlzetOsmoticPumps可根據(jù)以下動(dòng)物尺寸指南植入皮下或腹腔。AlzetOsmoticPum
2023
09-28

流式細(xì)胞儀的常見問(wèn)題有哪些？
流式細(xì)胞儀(flowcytometry，F(xiàn)CM)作為一種強(qiáng)大的單細(xì)胞分析工具，可以對(duì)于處在快速直線流動(dòng)狀態(tài)中的細(xì)胞或生物顆粒同時(shí)進(jìn)行多參數(shù)、快速定量分析和分選的高新技術(shù)。那么流式細(xì)胞儀的常見問(wèn)題有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果嗎？通常情況下，標(biāo)記細(xì)胞表面抗原的熒光抗體需要在室溫孵育20-30分鐘。對(duì)于一些狀態(tài)較脆弱的細(xì)胞（例如從組織中分離、培養(yǎng)的免疫細(xì)胞），切勿過(guò)長(zhǎng)時(shí)間孵育，同時(shí)建議使用染色緩沖液（StainingBuffer），其中主要成分為PBS，疊氮鈉和胎牛

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