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PCR反應(yīng)擴(kuò)增條帶問(wèn)題全方面解析2025/03/03: PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，可以選擇性擴(kuò)增一段DNA序列。其基本步驟是，首先將待擴(kuò)增的模板DNA變性使之成為單鏈，DNA樣品中，特異性的引物能夠與其互補(bǔ)的序列雜交，在dNTPs和Taq酶存在時(shí)，就可以合成模板DNA的互補(bǔ)鏈，反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物加熱使DNA雙鏈變性，溫度下降后，過(guò)量的引物又可以開(kāi)始第二輪的合成反應(yīng)。這種延伸-變性-退火-延伸的循環(huán)可以重復(fù)多次，使所需要的DNA片段得到特異性的擴(kuò)增。PCR反應(yīng)擴(kuò)增條帶分析?主要包括對(duì)不同條帶的識(shí)別、

細(xì)胞系與細(xì)胞株的建立解讀2025/02/25: 一、概念1、細(xì)胞系（CellLine）：原代培養(yǎng)舞經(jīng)首ci傳代成功即成細(xì)胞系，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系（LineageofCells）所組成。2、細(xì)胞株（CellStrain）：通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物稱為細(xì)胞株。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限，稱為有限細(xì)胞株（finitecellstrain）；如果可以連續(xù)傳代，稱為連續(xù)細(xì)胞株（continuouscellstrain）。對(duì)于人類腫瘤細(xì)胞，在體

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA) 操作步驟詳解2025/02/18: 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測(cè)大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡(jiǎn)便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理，對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析是免疫分析的一種，分三個(gè)部分組成：免疫識(shí)別，信號(hào)輸出和數(shù)據(jù)處理。保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件有優(yōu)質(zhì)的試劑，良好的儀器和正確的操作。嚴(yán)格遵照使用說(shuō)明規(guī)定操作，

細(xì)胞爬片免疫熒光實(shí)驗(yàn)技術(shù)具體步驟2025/02/14: 細(xì)胞免疫熒光主要用于蛋白定位研究和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，細(xì)胞免疫熒光技術(shù)是利用免疫技術(shù)和熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合，原理就是利用抗原-抗體反應(yīng)之后，采用熒光標(biāo)記，標(biāo)記完成后，顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)某種抗原成分的多少，從而做出一個(gè)定位研究，也可以為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)提供一個(gè)明確的指導(dǎo)，細(xì)胞免疫熒光具有敏感性強(qiáng)、特異性高、速度快的特點(diǎn)，是目前比較常用的組織學(xué)技術(shù)，也是比較精確的。在進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光過(guò)程中，需要用到細(xì)胞爬片，通過(guò)將爬片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，細(xì)胞在爬片上生長(zhǎng)，進(jìn)而進(jìn)行細(xì)胞的免疫熒光。細(xì)胞爬片免疫熒光實(shí)驗(yàn)技術(shù)具體步

PCR引物設(shè)計(jì)全方面解讀2025/02/06: PCR引物設(shè)計(jì)的目的是為了找到一對(duì)合適的核苷酸片段，使其能有效地?cái)U(kuò)增模板DNA序列。因此，引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否。要設(shè)計(jì)引物首先要找到DNA序列的保守區(qū)。同時(shí)應(yīng)預(yù)測(cè)將要擴(kuò)增的片段單鏈?zhǔn)欠裥纬啥?jí)結(jié)構(gòu)。如這個(gè)區(qū)域單鏈能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，就要避開(kāi)它。如這一段不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，那就可以在這一區(qū)域設(shè)計(jì)引物?，F(xiàn)在可以在這一保守區(qū)域里設(shè)計(jì)一對(duì)引物。一般引物長(zhǎng)度為15~30堿基，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為100~600堿基對(duì)。讓我們先看看P1引物。一般引物序列中G+C含量一般為40%~60%。而且四種堿

逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程問(wèn)題解析2025/01/21: 逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription），也被稱為反轉(zhuǎn)錄，是一種在某些生命過(guò)程中自然發(fā)生的過(guò)程，其中DNA被用作模板來(lái)合成RNA。這與我們通?？吹降腄NA到RNA的轉(zhuǎn)錄過(guò)程相反，因此得名“逆轉(zhuǎn)錄”。這個(gè)過(guò)程需要逆轉(zhuǎn)錄酶，這是一種特殊的酶，能夠讀取DNA的信息，并將其轉(zhuǎn)化為RNA。逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)步驟：1、獲得DNA模板：首先，需要獲得含有要轉(zhuǎn)錄的DNA序列的模板。這可以通過(guò)提取樣品中的DNA或從細(xì)胞中獲取mRNA來(lái)實(shí)現(xiàn)。2、合成互補(bǔ)DNA（cDNA）：然后，逆轉(zhuǎn)錄酶使用DNA模板合成cDNA

抗體結(jié)構(gòu)及抗原抗體反應(yīng)概述2025/01/14: 抗體的結(jié)構(gòu):抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五類，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測(cè)定有關(guān)的Ig主要為IgG和IgM。Ig由兩個(gè)輕鏈（L）和兩個(gè)重鏈（H）的單體組成。Ig的輕鏈?zhǔn)窍嗤?，有κ（kappa）和λ（Lambda）兩種型別。五類Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同，這決定了它們的抗原性也不同。IgG和IgM的重鏈分別稱為γ（gamma）鏈和μ（mu）鏈。重鏈和輕鏈的N端的氨基酸排列順序因各種抗體而異，稱為可變區(qū)，分別用VH和VL表示。兩者

蛋白質(zhì)印跡（WB）實(shí)驗(yàn)操作步驟2025/01/07: WB，蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting)又稱免疫印跡(immunoblotting)，是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新的免疫生化技術(shù)，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。WB實(shí)驗(yàn)操作步驟：1、收集蛋白樣品蛋白提取的質(zhì)量直接決定著WB結(jié)果的好壞，因此，根據(jù)標(biāo)本類型和檢測(cè)類型選擇合適的蛋白制

抗體特異性及交叉反應(yīng)分析2024/12/24: 抗體（antibody，Ab）是機(jī)體在體內(nèi)存在的外來(lái)分子、微生物等抗原物質(zhì)刺激下，由B淋巴細(xì)胞或記憶細(xì)胞增殖分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白（immunoglobulins，Ig），主要分布在血清中，也分布于組織液及外分泌液中。抗體特異性鑒定是免疫化學(xué)技術(shù)中，確保抗原-抗體反應(yīng)專一性的基礎(chǔ)。從根本上驗(yàn)證特異性，投稿國(guó)際期刊，常常需要準(zhǔn)備這方面數(shù)據(jù)。鑒定抗體的特異性有四種基本方法：分子遺傳法、獨(dú)立抗體驗(yàn)證法、正交法和標(biāo)簽蛋白法。四種方法并非必須同時(shí)采用。通常，根據(jù)實(shí)驗(yàn)

土壤檢測(cè)項(xiàng)目及一般流程2024/12/17: 自然界的土壤由有機(jī)質(zhì)、礦物質(zhì)、土壤空氣和土壤水分三相物質(zhì)所組成，所以土壤檢測(cè)前需要的準(zhǔn)備工作有檢測(cè)儀器、土壤取樣器、樣品制備、土壤檢測(cè)等基本方法。如果要檢測(cè)一塊苗圃的土地，需要選擇一塊具有代表性的土壤進(jìn)行檢測(cè)，以便保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，土壤檢測(cè)一般按以下六個(gè)流程：（1）前期采樣：根據(jù)背景資料與現(xiàn)場(chǎng)考察結(jié)果，采集一定數(shù)量的樣品分析測(cè)定。（2）正式采樣：按照監(jiān)測(cè)方案，實(shí)施現(xiàn)場(chǎng)采樣。（3）補(bǔ)充采樣：正式采樣測(cè)試后，發(fā)現(xiàn)布設(shè)的樣點(diǎn)沒(méi)有滿足總體設(shè)計(jì)需要，則要進(jìn)行增設(shè)采樣點(diǎn)補(bǔ)充采樣。（4）在樣品交接單送樣者

PCR技術(shù)實(shí)驗(yàn)干貨分享2024/12/09: 聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechainreaction簡(jiǎn)稱PCR）基因擴(kuò)增技術(shù)又稱無(wú)細(xì)胞分子克隆系統(tǒng)或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴(kuò)增法，是基因擴(kuò)增技術(shù)的一次重大革新?？蓪O微量的靶DNA特異地?cái)U(kuò)增上百萬(wàn)倍，從而大大提高對(duì)DNA分子的分析和檢測(cè)能力，能檢測(cè)單分子DNA或?qū)γ?0萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中僅含1個(gè)靶DNA分子的樣品，因而此方法立即在分子生物學(xué)、微生物學(xué)、醫(yī)學(xué)及遺傳學(xué)等多領(lǐng)域廣泛應(yīng)用和迅速發(fā)展。由于PCR具有敏感性高、特異性強(qiáng)、快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，已在病原微生物學(xué)領(lǐng)域中顯示出巨大的應(yīng)用價(jià)值和

PCR反應(yīng)條件及循環(huán)闡述2024/12/09: PCR反應(yīng)在生物體外大量擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，其特點(diǎn)是可以以微量的DNA為模板，快速擴(kuò)增得到大量拷貝。一、PCR反應(yīng)條件的控制：1.PCR反應(yīng)的緩沖液提供合適的酸堿度與某些離子。2.鎂離子濃度總量應(yīng)比dNTPs的濃度高，常用1.5mmol/L。3.底物濃度dNTP以等摩爾濃度配制，20～200umol/L。4.TaqDNA聚合酶2.5U(100ul）。5.引物濃度一般為0.1～0.5umol/L。6.反應(yīng)溫度（1）變性溫度和時(shí)間95℃，30s。（2）退火溫度和時(shí)間低于引物Tm值5℃

BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒實(shí)驗(yàn)測(cè)定方法2024/12/03: BCA蛋白定量法是一種快速靈敏、穩(wěn)定可靠的蛋白定量測(cè)定方法，其測(cè)定范圍是10－2000ug/ml，是比Lowry法更優(yōu)的專用于檢測(cè)總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品。BCA法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。其在562nm處有最大的吸收值，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，即可計(jì)算待測(cè)蛋白的濃度。原理:BCA(bicinchoninincacid)與二價(jià)銅離子的硫酸銅等其他試劑組成的試劑，混合一起顯示為蘋果綠色，即BCA工作試劑。在堿性條件下，BCA與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)，蛋白質(zhì)將Cu2+還原為Cu+，一個(gè)Cu+螯合二

酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定(ELISA）的洗滌優(yōu)化2024/11/25: ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。ELISA免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理，對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法。優(yōu)化ELISA的重點(diǎn)之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號(hào)，從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留，在最后一步產(chǎn)生信號(hào)。不充分的洗滌會(huì)導(dǎo)致差異和高背景，從而帶來(lái)不理

微生物實(shí)驗(yàn)室滅菌方法匯總2024/11/18: 微生物實(shí)驗(yàn)室是進(jìn)行微生物研究的場(chǎng)所，對(duì)環(huán)境要求很高，應(yīng)該保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的環(huán)境潔凈安全，嚴(yán)格的消毒滅菌工作非常重要，影響著實(shí)驗(yàn)室順利研究實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，同時(shí)嚴(yán)格的消毒滅菌也為實(shí)驗(yàn)室工作人員提供一個(gè)清潔而良好的工作環(huán)境。目前，常用的消毒滅菌方法多采用物理方法(如，干熱滅菌法、濕熱滅菌法、過(guò)濾除菌法、射線殺菌法等)和化學(xué)方法兩大類。1.干熱滅菌法是利用恒溫干燥箱內(nèi)120℃-150℃的高熱，并保持90-120分鐘，殺死細(xì)菌和芽孢，達(dá)到滅菌目的的一種方法。主要適用于不易被高溫?fù)p壞的玻璃器皿、金屬器械以及不能

中性、堿性土壤速效磷含量檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)分析2024/11/13: 植物吸收的磷主要是H2PO4-的形態(tài)，因此土壤中速效磷含量是評(píng)價(jià)土壤對(duì)作物磷供應(yīng)能力的一種手段，對(duì)于施肥有著直接的指導(dǎo)意義。用弱堿法提取堿溶性磷和吸附態(tài)磷，鉬藍(lán)與磷酸根生成880nm有特征吸收峰的物質(zhì)，通過(guò)測(cè)定880nm光吸收，即可計(jì)算磷含量。一、正式實(shí)驗(yàn)：1、若預(yù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定吸光值超出標(biāo)準(zhǔn)吸光值線性范圍：高于最高值建議將樣本適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，低于低值建議適當(dāng)增加樣本質(zhì)量W后再進(jìn)行測(cè)定，并將改變后的W和D代入公式計(jì)算；2、確定好最適實(shí)驗(yàn)條件后，正式實(shí)驗(yàn)樣本制備同預(yù)實(shí)驗(yàn)樣本制備；3、正式實(shí)驗(yàn)按照預(yù)

ELISA檢測(cè)試劑盒操作過(guò)程技巧匯總2024/10/28: ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。在檢測(cè)時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體，通過(guò)反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)

抗體保存相關(guān)問(wèn)題解答2024/10/21: 抗體（antibody，Ab）是機(jī)體在體內(nèi)存在的外來(lái)分子、微生物等抗原物質(zhì)刺激下，由B淋巴細(xì)胞或記憶細(xì)胞增殖分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白（immunoglobulins，Ig），主要分布在血清中，也分布于組織液及外分泌液中?？贵w保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果！如果抗體保存得當(dāng)，大部分抗體活性都可以維持?jǐn)?shù)月甚至數(shù)年。請(qǐng)謹(jǐn)記無(wú)論何時(shí)請(qǐng)按照說(shuō)明書(shū)推薦的保存條件正確保存抗體.一、一般抗體的保存方法1.收到抗體后請(qǐng)務(wù)必在12000rpm離心1-5分鐘后再打開(kāi)

ELISA實(shí)驗(yàn)各種檢測(cè)方法及條件選擇指南2024/10/14: ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：1.固相的抗原或抗體；2.酶標(biāo)記的抗原或抗體；3.酶作用的底物。根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀及檢測(cè)的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。1.雙抗體夾心法測(cè)抗原針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體。適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。2.競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原首先將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）常見(jiàn)的種類簡(jiǎn)介2024/10/08: PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction）的簡(jiǎn)稱，是一種體外擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。PCR的常見(jiàn)種類分述如下：1、普通PCR普通PCR即一代PCR，使用普通PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增靶基因，并通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行定性分析。2、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（QuantitativeReal-timePCR,qPCR）實(shí)時(shí)熒光定量PCR，也叫Real-TimePCR，即二代PCR，是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光染料或者熒光基團(tuán)，在整個(gè)PCR過(guò)程中通過(guò)收集熒光信號(hào)實(shí)時(shí)

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