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在PCR反應體系中添加劑DMSO的作用2024/05/16

DMSO主要用于高GC含量的模板擴增，可能的機理是改善GC含量高的DNA的變形情況，降低其二級結(jié)構(gòu)，使得聚合酶在二級結(jié)構(gòu)處延伸。DMSO可以提高PCR的特異性,幫助擴增一些難擴的模板。當體系中加入DMSO時，可適當降低退火溫度。在實踐中，聚合酶鏈式反應可能因各種原因而失敗，通常表現(xiàn)為兩個問題，一是目的模板的擴增量太少，二是非目的基因擴增太多。這種情況研究人員通常會在反應體系中加入合適的添加劑進行解決。通常添加劑的作用主要是降低基因的二級結(jié)構(gòu)或者降低非特異性的啟動。下面是幾種常用的添加劑以及它們的

凍存管的使用注意事項2024/03/14

凍存管保存環(huán)境1、未經(jīng)使用的凍存管可在室溫或2-8℃保存12個月。2、已經(jīng)接種的凍存管在-20℃保存，12個月內(nèi)可有良好的菌株保存效果。3、已經(jīng)接種的凍存管在-80℃保存，24個月內(nèi)可有良好的菌株保存效果。凍存管保存時間1、未經(jīng)使用的凍存管可在室溫或2-8℃保存。2、已經(jīng)接種的凍存管在-20℃或-80℃保存。凍存管的使用步驟1、從細菌純培養(yǎng)物中挑取新鮮培養(yǎng)物配成大約為3-4麥氏比濁度的菌懸液接種與菌種保存管中。2、擰緊保存管，來回顛倒4-5次使細菌乳化，不能旋搖。3、把保存管放入冰箱保存-20℃

酶標板分類與性能判斷2024/02/27

酶標板作為ELISA檢測實驗中的輔材，起著舉足輕重的作用并直接影響最終實驗結(jié)果，酶標板的好壞主要取決于其對蛋白吸附的靈敏度、板孔間蛋白吸附能力差異以及所采購酶標板批次間的差異。因此，選擇一款蛋白吸附靈敏度高、對蛋白吸附能力孔間差異小、批次間差異小的酶標板產(chǎn)品，是實驗者獲得可靠、穩(wěn)定實驗結(jié)果的保障。酶標板分類：根據(jù)不同的分類標準，酶標板有著不同的分類。一、根據(jù)孔數(shù)，可分為96孔、48孔等，由于酶標板主要是配合酶標儀用，目前市面上的酶標儀最多為96孔，因此酶標板最為常用的也是96孔。二、根據(jù)其底部的

冰凍切片包埋劑的制備方法2024/02/19

冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便，而多應用于手術(shù)中的快速病理診斷。制備步驟:將組織在恒溫冷凍機里面切片。冷凍腔內(nèi)的溫度一般設置為-18℃至-25℃，根據(jù)不同組織調(diào)節(jié)不同腔溫，平時應將冷凍頭放置在冷凍臺上。冷凍切片機應長期處在冷凍恒溫狀態(tài)。1、當冰凍組織提取好之后，在冷凍頭上放少量的OCT或羧田基纖維素(可用普通膠水代替)，放上組織，速凍。2、待組織凍結(jié)后，將冷凍頭裝刀切片機上。3、粗切，修出切面細切幾張，用毛筆刷去刀上組織片

夾心Elisa和競爭性Elisa的區(qū)別2024/01/30

什么是夾心ELISA？夾心ELISA是一種常用于檢測和定量免疫測定中抗原的ELISA。它是一種酶聯(lián)免疫吸附測定，使用兩種抗體：捕獲抗體和檢測抗體。在這種技術(shù)中，樣品中的抗原在抗體之間結(jié)合。ELISA的目的是檢測樣品中靶抗原的存在。因此，在夾心ELISA的情況下，靶抗原在捕獲抗體和檢測抗體之間結(jié)合。在程序開始時，捕獲抗體已經(jīng)固定在表面上。然而，檢測抗體是定量前的最后一步。夾心ELISA中的兩種抗體結(jié)合到靶抗原上的不同位置。此外，捕獲抗體和靶標抗體不干擾彼此的結(jié)合能力非常重要。夾心ELISA中的步驟

ELISA試劑盒標曲顯色過強無明顯梯度2024/01/23

1、主要懷疑點：洗板不充分：1.1、機器洗版：確保機器設置的針頭能吸干孔中液體，并且加液針頭能加液大于350ul，加液針頭沒有被異物或者結(jié)晶鹽堵住。1.2、手動洗板，嚴格按照步驟，使用干凈滅菌的槍頭和加樣槽，使用無氧化劑的吸水紙。加350ul洗液，靜置90秒，在吸水紙上拍干孔中液體后再加入下一步洗液或者試劑。1.3、特別注意，在加入TMB前的洗板步驟極其重要，殘留的HRP酶會直接導致TMB顯色。2、次要懷疑點：2.1、TMB已經(jīng)污染，檢測TMB是否透明無色，如果偏藍就是污染了。2.2、檢查配制洗

CCK-8 細胞增殖和細胞毒性實驗2024/01/16

實驗步驟：1.種板數(shù)：根據(jù)你摸索的，或者查閱文獻確定你需要的種板濃度，根據(jù)種板濃度對細胞懸液進行稀釋，通常細胞增殖實驗每孔加入約1000-2000個細胞100ul，細胞毒性實驗每孔加入約5000～10000個細胞100ul（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。2.種板：以96孔板為例，96孔板橫向是1-12的數(shù)字，縱向是A-H，可做多個實驗組，每組設置4-6個復孔，同時設置空白組，最邊緣孔加入PBS緩沖液減少蒸發(fā)帶來的影響，然后將細胞置于37℃5%CO2細胞培

透析的原理和過程2024/01/09

一、透析的原理透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀，將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi)，將此透析袋浸入水或緩沖液中，樣品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋內(nèi)，而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴散透析到袋外，直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”，袋（膜）外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。透析的動力是擴散壓，擴散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度，還正比于膜的面積和溫度，通常是4

ELISA實驗原理2024/01/03

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）是一種常用的生物化學分析技術(shù)，可用于判斷受檢標本中是否含有待檢測抗原或抗體，是免疫反應的定性和定量檢測方法，也是許多科研人員的日常實驗之一。原理酶標儀的主要操作是使用光電比色計或分光光度計，測量光通過測試樣品前后的能量差。測試物質(zhì)吸收引起的光能差通常與測試物質(zhì)的濃度線性相關(guān)。酶標儀的波長范圍通常為400nm至750nm，并受濾光片或衍射光柵（納米）限制。光學系統(tǒng)中通過光纖為含有樣品的微孔板孔提供光。穿過樣品的光束直徑范圍為1至3毫米，樣品發(fā)出的光由檢測裝置檢測，檢測

冰凍切片包埋劑的制備方法及注意事項2023/12/26

制備步驟:將組織在恒溫冷凍機里面切片。冷凍腔內(nèi)的溫度一般設置為-18℃至-25℃，根據(jù)不同組織調(diào)節(jié)不同腔溫，平時應將冷凍頭放置在冷凍臺上。冷凍切片機應長期處在冷凍恒溫狀態(tài)。1、當冰凍組織提取好之后，在冷凍頭上放少量的OCT或羧田基纖維素(可用普通膠水代替)，放上組織，速凍。2、待組織凍結(jié)后，將冷凍頭裝刀切片機上。3、粗切，修出切面細切幾張，用毛筆刷去刀上組織片。4、放下抗卷板，開始切片，切片速度一般為5-6微米，切出的片子用載玻片貼附后立即放入甲醇冰醋/酸液(97ml甲醇+3ml冰醋/酸)中固定

PCR常見問題2023/12/21

1.無擴增條帶（1）酶失活或在反應體系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或運輸不當而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結(jié)果。（2）模板含有雜質(zhì)。特別是對甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成DNA脫嘌呤而影響PCR的結(jié)果。（3）變性溫度是否準確：PCR儀指示溫度與實際溫度是否相符，過高酶在前幾個循環(huán)就迅速失活；過低則模板變性不好。（4）反應系統(tǒng)中污染了蛋白酶及核酸酶，應在未加Taq酶以前，將反應體系95℃加熱5-10分鐘。（5）引物變質(zhì)失效。人工合成的引物是否正確。是否純化，或

ELISA 是如何工作的？2023/12/14

ELISA基于特異性抗原抗體反應，通常用到的是固相酶聯(lián)免疫吸附方法，這里以*使用的夾心法為例，其基本步驟為：將包被抗體固定在微孔板表面從板上洗去未被結(jié)合抗體加入質(zhì)控抗原或含有目標物的樣本洗去其他雜蛋白，加入標記的檢抗添加酶特異性底物，產(chǎn)生有色產(chǎn)物，使用酶標儀進行比色測定即可辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶是ELISA中常用的酶，而底物包括四甲基聯(lián)苯胺(TMB)或2,2'-疊氮基-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)。通常選擇重復或三次采樣，并且使用不同濃度的樣品以確保生物學上可接受的

移液槍校準步驟詳解2023/12/13

需要用到的儀器：電子分析天平(檢測范圍200g，指示值為0mg)；一個量杯(50L)；一個量杯(100ml)；多個小塊定性濾紙；超純水系統(tǒng)80mL。步驟：1、打開電子天平，電子天平調(diào)零；2、天平稱指示穩(wěn)定后，按住歸零鍵歸零。將移液管噴嘴安裝在移液管上，對移液器進行清洗；3、將移液器的體積調(diào)整到檢查點。通常選擇具有最小、中等和較大容量值的檢查點?？梢允翘囟ǖ娜萘奎c；4、用移液管將檢測到容量的超純水系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到天平的小量杯中；5、天平指示穩(wěn)定后，立即加載并記錄電子分析天平指示的標準值。記錄的結(jié)束會使電

CCK8試劑盒操作指南2023/12/08

制作標準曲線1、計數(shù)，按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做5-7個細胞濃度梯度，每組4-6個復孔。2、接種后培養(yǎng)2-4小時使細胞貼壁，然后每100μL培養(yǎng)基加10uLCCK-8（注意不要在孔中生成氣泡，會影響OD值）試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD值，在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培育1-4小時。用酶標儀測定450nm處的吸光度。計算所需培養(yǎng)液可以先轉(zhuǎn)染再種板在10cm盤轉(zhuǎn)染，6h后消化，重懸細胞，技術(shù)，調(diào)細胞密度為20000個/ml，種在96孔板，每孔1000μL。種板時，槍頭吹吸細胞，重懸，

培養(yǎng)皿的使用方式和注意事項2023/11/27

1、注意事項:使用前經(jīng)過清潔消毒，,培養(yǎng)皿清潔與否對工作影響較大，可影響培養(yǎng)基的酸堿度，若有某些化學藥品的存在，會抑制細菌生長。新購的培養(yǎng)皿應先用熱水沖洗，再置于質(zhì)量分數(shù)為1%或2%的鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時，使游離堿性物質(zhì)除去，再用蒸餾水沖洗2次。若要培養(yǎng)細菌,再用高壓蒸氣(一般6.8*10的5次方Pa高壓蒸氣)，120°C的溫度下30min滅菌,置室溫干燥，或用干熱滅菌，就是將培養(yǎng)皿置于烘箱內(nèi),度控制在120°C左右的情況下維持2h,殺死細菌的胞牙。經(jīng)過消毒的培養(yǎng)皿才能接種培養(yǎng)使用。2、使用方法

免疫熒光實驗步驟2023/11/23

基本實驗步驟：（1）細胞準備。對單層生長細胞，在傳代培養(yǎng)時，將細胞接種到預先放置有處理過的蓋玻片的培養(yǎng)皿中，待細胞接近長成單層后取出蓋玻片，PBS洗兩次；對懸浮生長細胞，取對數(shù)生長細胞，用PBS離心洗滌（1000rpm,5min）2次，用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂片。（2）固定。根據(jù)需要選擇適當?shù)墓潭▌┕潭毎?。固定完畢后的細胞可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個月。PBS洗滌3×5min.（3）通透。使用交聯(lián)劑（如多聚甲醛）固定后的細胞，一般需要在加入抗體孵育前，對細胞進行通透處

ELISA中必要的三個試劑2023/11/21

完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)酶標記的抗原或抗體(結(jié)合物);(3)酶的底物;(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中)，參考標準品和控制血清(定量測定中);(5)酶聯(lián)物(結(jié)合物)及標本的稀釋液;(6)洗滌液;(7)酶反應終止液。免疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個月以上。有些不完整的試盒，僅供應包被用抗原或抗體，檢測人員需自行包被。以下簡述固相載體和包被過程。固相載體固相載體在ELISA測定

如何提取、制備胎牛血清？2023/11/16

胎牛血清（FetalBovineSerum，F(xiàn)BS）是在生物醫(yī)學研究和細胞培養(yǎng)中廣泛使用的重要生物制品，它含有豐富的生長因子、蛋白質(zhì)和其他生物分子，對細胞生長和增殖起著至關(guān)重要的作用。制備胎牛血清是一個復雜的過程，通常由專業(yè)的生物制品公司進行，以確保其質(zhì)量和純度。在本文中，我們將介紹一般的胎牛血清制備過程的主要步驟。步驟1：采集胎牛血液制備胎牛血清的第一步是采集胎牛的血液。這需要在專業(yè)場所進行，確保采集的胎牛來自健康且受監(jiān)控的牧場。采集血液需要遵循倫理和動物福利的法規(guī)和標準。確保供體是5-8月齡

PCR管、EP管和八聯(lián)排管的區(qū)別2023/11/13

一、PCR管PCR管是生物實驗過程中常用的耗材，例如BBSP的PCR管，主要作用是為PCR（聚合酶鏈式反應）實驗提供容器，可以應用于突變、測序、甲基化、分子克隆、基因表達、基因分型、醫(yī)學、法醫(yī)學等領(lǐng)域。常見的PCR管由管體、蓋體組成，管體和蓋體連接在一起。最早的PCR儀沒有熱蓋，PCR過程中管底的液體會蒸發(fā)到頂部，設計成凸蓋（即圓形頂）便于蒸發(fā)的液體凝集后流下。但目前的PCR儀基本為熱蓋式，PCR蓋頂部溫度高，底部溫度低，底部的液體不容易蒸發(fā)到頂部，所以大多使用平蓋。二、EP管因為離心管是由Ep

普通干型透析袋，使用前如何預處理？2023/11/07

預處理：1、把透析袋剪成適當長度（10-20cm）的小段。2、在大體積（500mL）的2%（W/V）的碳酸氫鈉和1mmol/LEDTA(pH=8.0)中將透析袋煮沸10min。3、用蒸餾水清洗透析袋。4、放在500mL的1mmol/LEDTA(pH=8.0)中將之煮沸10min。5、冷卻后，用蒸餾水清洗透析袋。6、置于20％的酒精中，放于4℃冰箱，必須確保透析袋始終浸沒在溶液內(nèi)。從此時起取用透析袋必須戴手套。7、在使用前要用蒸餾水將透析袋里外加以清洗干凈。使用須知1、某些化學物質(zhì)會破壞透析袋微孔