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2024
03-182024
03-15細(xì)胞學(xué)堂 | 實(shí)驗(yàn)室污染應(yīng)對(duì)攻略
在養(yǎng)細(xì)胞的過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)室污染仍是普遍存在的問(wèn)題。在這個(gè)過(guò)程中，使用的試劑、耗材、環(huán)境、操作等都有可能造成污染，如支原體污染、細(xì)菌污染等[1]。污染會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和形態(tài)，甚至導(dǎo)致細(xì)胞功能、性質(zhì)發(fā)生改變，進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)研究的準(zhǔn)確性。因此，對(duì)實(shí)驗(yàn)室污染進(jìn)行預(yù)防、排查與清除，是至關(guān)重要的。本期細(xì)胞學(xué)堂為您整理了一份實(shí)驗(yàn)室污染最-全應(yīng)對(duì)攻略，幫助您快速上手清除污染。01污染的預(yù)防嚴(yán)格執(zhí)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度不斷完善無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度，加強(qiáng)無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室的管理。外來(lái)進(jìn)修人員、實(shí)習(xí)學(xué)生進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前要進(jìn)行培訓(xùn)和教育，2024
02-19細(xì)胞學(xué)堂 | 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離提取
骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs）來(lái)源于中胚層，是具有多分化潛能的細(xì)胞。細(xì)胞生物學(xué)表明，BMSCs具有較強(qiáng)的增殖能力和多向分化潛能。在不同誘導(dǎo)條件下，可向中胚層細(xì)胞如脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、肌細(xì)胞等分化。BMSCs是理想的種子細(xì)胞來(lái)源之一，在細(xì)胞替代治療、基因治療及組織器官再造中具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。本期細(xì)胞學(xué)堂為大家整理了大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離提取的方法、注意事項(xiàng)及鑒定指標(biāo)，幫助您快速上手開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。分離提取步驟骨髓取材將大鼠斷頸處死后,2024
01-29細(xì)胞學(xué)堂 | 細(xì)胞培養(yǎng)中的小黑點(diǎn)，原來(lái)是它
提起細(xì)胞培養(yǎng)，相信很多老師都遇到過(guò)培養(yǎng)液中的“小黑點(diǎn)”，因無(wú)法確定它的身份而頭痛不已。本期細(xì)胞學(xué)堂將為大家揭秘這些黑點(diǎn)究竟是什么，幫助您快速上手開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。01血清沉淀血清在融解過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的析出物，呈現(xiàn)出小顆粒樣的東西，甚至呈纖維樣，這是由于血清融解后導(dǎo)致的蛋白、鹽類(lèi)物質(zhì)的析出。血清融解時(shí)混勻血清靜置融解不混勻，出現(xiàn)黑點(diǎn)顯微鏡下的血清沉淀物影響因素通常血清析出物的多少與融解方法有關(guān)。通過(guò)4℃冰箱解凍和溶解過(guò)程持續(xù)搖晃混勻，可以有效避免沉淀產(chǎn)生，而37℃靜置混勻則會(huì)有較多沉淀物析出。處理方法血2024
01-25細(xì)胞學(xué)堂 | BV2細(xì)胞形態(tài)問(wèn)題大揭秘
BV2細(xì)胞系由E·Blasi于1990年建立，應(yīng)用小鼠小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染v-raf/v-myc獲得永生化，在模擬神經(jīng)系統(tǒng)疾病和研究相關(guān)疾病機(jī)制方面應(yīng)用廣泛。BV2細(xì)胞保留有小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞多種形態(tài)、表征和功能特征，免疫組化結(jié)果顯示，BV2細(xì)胞為MAC1、MAC2陽(yáng)性，MAC3、膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白、半乳糖腦苷脂陰性。培養(yǎng)BV2細(xì)胞時(shí)，最常遇到的問(wèn)題就是細(xì)胞形態(tài)異常，通常伴隨著細(xì)胞形狀改變、拉絲較多等，對(duì)大家的實(shí)驗(yàn)造成影響。本期細(xì)胞學(xué)堂為大家整理了BV2細(xì)胞的培養(yǎng)方法、常見(jiàn)問(wèn)題及處2024
01-242024
01-162023
12-28直播答疑 | 細(xì)胞培養(yǎng)答疑專(zhuān)場(chǎng)
12月14日的直播中，普諾賽直播間為大家介紹了細(xì)胞黑點(diǎn)、細(xì)胞狀態(tài)變形、細(xì)胞空泡、聚團(tuán)、脫落等常見(jiàn)問(wèn)題，直播回放請(qǐng)至B站-“普諾賽生物”進(jìn)行觀看。本期直播答疑，從直播間提問(wèn)中，篩選出部分有代表性的問(wèn)題，做了詳細(xì)解答。如有其他問(wèn)題，也歡迎大家在公眾號(hào)留言，我們將在線(xiàn)解答。消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)損傷細(xì)胞嗎？消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜蛋白的改變，最直觀的表現(xiàn)就是消化后第二天漂浮細(xì)胞很多或者貼壁慢。胰酶消化不掉的，二次消化對(duì)細(xì)胞損傷小還是機(jī)械吹打?qū)?xì)胞損傷??？建議二次消化。細(xì)胞與細(xì)胞間的連接沒(méi)有通過(guò)酶切開(kāi)的話(huà)，用移2023
12-26細(xì)胞學(xué)堂 | A-498細(xì)胞知識(shí)盤(pán)點(diǎn)
A-498（人腎癌細(xì)胞）細(xì)胞由Aaronson·S建立，是從一名52歲女性腎癌患者的腎組織中分離出的具有上皮形態(tài)的細(xì)胞系。該細(xì)胞系是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主，在腫瘤研究中具有一定的應(yīng)用價(jià)值，常作為腎細(xì)胞癌研究的模型。本期細(xì)胞學(xué)堂為大家整理了A-498細(xì)胞的培養(yǎng)條件與傳代、凍存步驟及常見(jiàn)應(yīng)用，幫助您快速上手開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞形態(tài)A498細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，呈上皮樣形態(tài)，細(xì)胞鋪開(kāi)面積大，單位面積細(xì)胞總數(shù)量少，少量細(xì)胞有觸角；低密度時(shí)可觀察到單個(gè)細(xì)胞清晰的邊緣，密度大于100%時(shí)邊緣不清晰，細(xì)胞與細(xì)胞之間沒(méi)有間隙；A2023
12-19細(xì)胞學(xué)堂 | 實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞計(jì)數(shù)指南
細(xì)胞計(jì)數(shù)是實(shí)驗(yàn)室中常見(jiàn)的一項(xiàng)操作，用于確定樣品中細(xì)胞的數(shù)量，判斷細(xì)胞數(shù)量是否滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)需求。本期細(xì)胞學(xué)堂為大家整理了幾種常見(jiàn)的計(jì)數(shù)方法：人工手動(dòng)計(jì)數(shù)法、自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀法，以及懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞在不同密度下的鏡下視野的參考范圍，幫助您快速上手開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。1人工手動(dòng)計(jì)數(shù)法即通過(guò)肉眼觀察顯微鏡視野中的細(xì)胞數(shù)量，從而進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。操作步驟1將計(jì)數(shù)板及蓋玻片擦拭干凈，并將蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)板上；2輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞均勻分布；吸出10μL-20μL左右的細(xì)胞懸液滴在蓋片邊緣，使細(xì)胞懸液充滿(mǎn)蓋玻片和計(jì)數(shù)板之間；3靜2023
11-28直播答疑 | 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)要點(diǎn)解析
11月16日，普諾賽直播間為大家介紹了懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)、培養(yǎng)注意事項(xiàng)，并通過(guò)THP-1、NK-92、NCI-H209三個(gè)細(xì)胞案例，深入講解了懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)要點(diǎn)。直播回放可移步至B站-“普諾賽生物”進(jìn)行觀看。本期直播答疑，從直播間提問(wèn)中，篩選出部分有代表性的問(wèn)題，做了詳細(xì)解答。如有其他問(wèn)題，也歡迎大家在推文底部留言，我們將在線(xiàn)解答。Q1傳代時(shí)，細(xì)胞密度比較低，但是培養(yǎng)基又變黃了，怎么辦？細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞量較少，但培養(yǎng)基變黃較快，可以從以下3個(gè)方面進(jìn)行排查：?檢查培養(yǎng)基成分是否正常，如N2023
11-28細(xì)胞學(xué)堂 | 培養(yǎng)B16系列細(xì)胞必看知識(shí)點(diǎn)
B16系列細(xì)胞屬于小鼠黑色素瘤細(xì)胞系，是源自C57小鼠的一種皮膚癌細(xì)胞，常用于腫瘤生物學(xué)研究。本期細(xì)胞學(xué)堂為大家整理了B16系列細(xì)胞的培養(yǎng)方法與注意事項(xiàng)，B16細(xì)胞黑色素的形成原因及解決方法，幫助您快速上手開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。01B16系列細(xì)胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)條件RPMI-1640(PM150110)＋10%FBS(164210-50)＋1%P/S(PB180120)；生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)，生長(zhǎng)迅速，能產(chǎn)生黑色素；傳代方式0.25%含EDTA的胰蛋白酶消化2-3min，推薦傳代比例1:3-1:4；凍存推薦凍存密度2023
11-202023
11-14細(xì)胞學(xué)堂 | 手把手教你培養(yǎng)SV-HUC-1
SV-HUC-1(人輸尿管上皮永生化細(xì)胞)，是由猿猴空泡病毒40轉(zhuǎn)染至1名11歲男孩的泌尿道上皮細(xì)胞，而建立起來(lái)的永生化細(xì)胞系。其分化特性與正常細(xì)胞相似，培養(yǎng)簡(jiǎn)單，可無(wú)限傳代，卻不屬于腫瘤細(xì)胞[1]。基礎(chǔ)信息?生長(zhǎng)培養(yǎng)基：Ham'sF-12K＋10%FBS＋1%P/S?生長(zhǎng)特性：貼壁，上皮細(xì)胞樣?推薦傳代比例：1:2-1:4?推薦換液頻率：2~3次/周?培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃?凍存條件：55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSOSV-HUC-1細(xì)胞正常生長(zhǎng)細(xì)胞傳2023
11-14直播答疑 | 原代細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
原代培養(yǎng)是指由體內(nèi)取出組織或細(xì)胞進(jìn)行的首-次培養(yǎng)，也叫初代培養(yǎng)，是細(xì)胞系建立的第一步。在9月22日開(kāi)播的“原代細(xì)胞常見(jiàn)問(wèn)題解決方案”課程中，有很多老師就原代細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題提出了疑問(wèn)。我們篩選出部分代表性問(wèn)題，并作了詳細(xì)解答。臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞需要包被嗎？選用什么包被比較好？臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞建議包被，建議選用0.1%明膠包被，包被的細(xì)胞形態(tài)會(huì)比不包被的好看。角質(zhì)細(xì)胞需要包被嗎？角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)類(lèi)似上皮細(xì)胞，營(yíng)養(yǎng)環(huán)境要求高，建議使用膠原蛋白包被。細(xì)胞原皿狀態(tài)很好，傳代后細(xì)胞邊界不清楚是什么原因？感覺(jué)虛化的很快。2023
11-032023
10-23細(xì)胞學(xué)堂 | 微血管內(nèi)皮細(xì)胞知識(shí)盤(pán)點(diǎn)
微血管內(nèi)皮細(xì)胞（microvascularendothelialcells,MVECs）構(gòu)成了血液與組織液之間的物理屏障，而且在機(jī)體的凝血與抗凝血、致炎與抗炎及免疫應(yīng)答等方面起著十分重要的作用，其體外培養(yǎng)模型廣泛應(yīng)用于相關(guān)研究。但由于不同組織器官的微血管內(nèi)皮細(xì)胞之間存在較大的異質(zhì)性，同時(shí)微血管內(nèi)皮細(xì)胞因解剖部位不同，在形態(tài)學(xué)、表型和功能上等方面也存在明顯異質(zhì)性，不同來(lái)源的血管內(nèi)皮細(xì)胞之間是不可相互替代的，主要包括腸、肺、心臟、腦、脈絡(luò)膜、視網(wǎng)膜、真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞等。本期細(xì)胞學(xué)堂為大家整理了微血2023
10-082023
09-28細(xì)胞學(xué)堂 | 如何判斷細(xì)胞狀態(tài)
培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，由于培養(yǎng)的環(huán)境各不相同，同時(shí)細(xì)胞各階段的形態(tài)也存在一定差異，沒(méi)有一個(gè)確定的參照物去比對(duì)，很多老師同學(xué)也無(wú)法確定自己所養(yǎng)細(xì)胞的狀態(tài)是否正常。那么如何判斷細(xì)胞狀態(tài)是正常還是異常呢？本期細(xì)胞學(xué)堂將詳介紹幾種常用的判斷方法，學(xué)會(huì)這幾招，輕松辨別細(xì)胞狀態(tài)！01如何判斷細(xì)胞活率臺(tái)盼藍(lán)染色法臺(tái)盼藍(lán)是細(xì)胞活性染料，常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性，可以檢測(cè)出細(xì)胞是否存活。正常的活細(xì)胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺(tái)盼藍(lán)，使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi)；而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞，胞膜的通透性增加，可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。通常2023
09-20大鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)需要注意哪些問(wèn)題
H9c2(2-1)大鼠心肌細(xì)胞是一株由Kimes·B和Brandt·B從BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細(xì)胞株亞克隆得到的細(xì)胞株；H9c2(2-1)細(xì)胞表現(xiàn)出許多骨骼肌的特性。H9c2(2-1)細(xì)胞中的成肌細(xì)胞能融合形成多核的肌管，并對(duì)乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應(yīng)。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%，H9c2(2-1)細(xì)胞融合發(fā)生得很快。培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞時(shí)，需要注意以下幾點(diǎn)：1、鼠齡選擇：新生1～3d齡大鼠的心肌細(xì)胞在出生后3d內(nèi)具有部分的增殖能力，而成年大鼠的心肌細(xì)胞則為終末分化細(xì)胞，不再具有分裂增殖能掃一掃訪問(wèn)手機(jī)商鋪
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