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miRNA實(shí)驗(yàn)解決方案（操作手冊(cè)）---第三章：miRNA 逆轉(zhuǎn)錄及實(shí)時(shí)熒光定量 PCR2025/01/08: 一、miRNA逆轉(zhuǎn)錄及實(shí)時(shí)熒光定量PCR的概念miRNA逆轉(zhuǎn)錄的概念成熟miRNA的長(zhǎng)度只有21~23nt，對(duì)miRNA進(jìn)行qPCR定量時(shí)，無法直接對(duì)其進(jìn)行正、反向引物的設(shè)計(jì)（通常正向引物就足以覆蓋miRNA全長(zhǎng)），但是可以通過增加逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物長(zhǎng)度來解決這一問題，miRNA的逆轉(zhuǎn)錄方法有兩種，分別是莖環(huán)法和加尾法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的概念實(shí)時(shí)熒光定量PCR即Real-timePCR,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過Cr值和標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模版進(jìn)行定量分析的方法。二、miRNA逆轉(zhuǎn)錄及

miRNA實(shí)驗(yàn)解決方案（操作手冊(cè)）---第二章：miRNA提取2025/01/07: 一、miRNA提取的方法miRNA提取的難點(diǎn)在于其分子太小，不易被醇類沉淀，也不易被常規(guī)的硅膠吸附膜吸附。miRNA的提取方法主要有兩種形式，一種是提取樣品中的總RNA后，通過PAGE電泳或PEG，將總RNA中的小片段RNA分離出來，最后對(duì)小片段的RNA進(jìn)行沉淀回收，從而獲得miRNA。另一種是硅膠柱吸附法，采用特殊硅基質(zhì)吸附材料在添加適量乙醇的條件下，可特異吸附小片段RNA（小于200nt），最終得到miRNA。傳統(tǒng)方法提取miRNA通常采用第一種，而miRNA提取試劑盒一般采用硅膠柱吸附法。

miRNA實(shí)驗(yàn)解決方案（操作手冊(cè)）---第一章：miRNA簡(jiǎn)介2025/01/07: 一、miRNA的合成途徑在動(dòng)物細(xì)胞核中，miRNA基因的初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物Pri-miRNA（長(zhǎng)度大約為300～1000nt）被RNaseIIl-Drosha酶切割成為發(fā)夾結(jié)構(gòu)前體miRNA（Pre-miRNA，長(zhǎng)度大約為70～100nt）。經(jīng)過初步剪切后，Pre-miRNA在轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Exportin-5的作用下由細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)中，然后由另一種RNaseIll-Dicer酶進(jìn)一步切割產(chǎn)生成熟的miRNA（長(zhǎng)度大約為21～23nt）。成熟的miRNA與類似RISC的核糖體蛋白結(jié)合形成miRNA-R

探索蛋白質(zhì)的新奧秘2024/12/25: 親愛的各位科研小伙伴，是不是還為找不到特異的磷酸化抗體而發(fā)愁？今天將為你介紹一款令人振奮的科研利器--Phos-tag!這不僅是一種磷酸結(jié)合標(biāo)簽，更是一位幫你解鎖蛋白質(zhì)世界秘密的超級(jí)助手！GLPbio的Phos-tag（目錄號(hào)GK10005），一種創(chuàng)新的科研工具，可在中性pH條件下特異性捕獲蛋白質(zhì)磷酸化Ser、Thr、Tyr等物質(zhì)。它就像一個(gè)磷酸“獵手”，特異性地結(jié)合磷酸基團(tuán)，不放過任何一個(gè)氨基酸的磷酸化！深入探究蛋白質(zhì)世界Phos-tag提供了一種名為“錳(II)-Phos-tagSDS-PA

如何高效學(xué)習(xí)并掌握實(shí)驗(yàn)操作？2024/06/26: 學(xué)會(huì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)為什么很困難？旁觀揣摩、網(wǎng)絡(luò)搜索、屢做屢錯(cuò)。是大部分同學(xué)學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)的真實(shí)寫照。為什么會(huì)這樣？因?yàn)?，大部分?shí)驗(yàn)室沒有專門的課程或資料來幫助新生學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)知識(shí)。所以，大家只能靠看、靠搜、靠猜。這種學(xué)習(xí)方法，效率低，學(xué)來的方法是對(duì)是錯(cuò)也是一個(gè)疑問。而且，師兄師姐好不容易搞清楚的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)和注意事項(xiàng)，卻隨著他們的畢業(yè)，方法也隨之“失傳”。實(shí)驗(yàn)知識(shí)的沉淀，非常困難，同樣的問題可能每一屆都會(huì)出現(xiàn)?？磿詫W(xué)或參加系統(tǒng)課程？系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)知識(shí)學(xué)習(xí)體系，對(duì)于每一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，每一位研究生來說，很必要。書本上的知識(shí)大

每天感到疲倦、情緒低落？可能是這個(gè)功能在減退2024/06/24: 【好困，好累，好煩】，如果每天都感覺疲憊、精神不濟(jì)、心情不佳，那么這種情況可能是甲狀腺功能在減退！甲狀腺分泌的甲狀腺激素可通過血液運(yùn)輸?shù)饺恚瑥V泛調(diào)節(jié)新陳代謝，堪稱人體的「發(fā)動(dòng)機(jī)」。而甲狀腺功能減退癥（簡(jiǎn)稱甲減）是甲狀腺激素缺乏導(dǎo)致的一組臨床綜合病征，可表現(xiàn)出不同程度的情緒異常或者認(rèn)知功能下降。其實(shí)，榮登熱榜的「天天喊累的人，建議去查一下甲狀腺」話題并非空穴來風(fēng)。2024年3月22日，韓國(guó)科學(xué)家在JournalofPersonalizedMedicine發(fā)表研究，研究人員通過對(duì)一位嗜睡并時(shí)常感到

質(zhì)粒圖譜2024/06/24: 質(zhì)粒圖譜為質(zhì)粒DNA序列的物理圖譜，提供了包括質(zhì)粒的大小、篩選標(biāo)記、克隆位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄及翻譯元件等信息，為我們選擇質(zhì)粒、了解質(zhì)粒特點(diǎn)及應(yīng)用提供了重要依據(jù)。對(duì)于初學(xué)者來說該如何去閱讀質(zhì)粒圖譜呢？今天來給大家講解一下如何閱讀質(zhì)粒圖譜及構(gòu)建質(zhì)粒圖譜。質(zhì)粒的組成要素有哪些復(fù)制起始位點(diǎn)：Ori即控制復(fù)制起始的位點(diǎn)。原核生物DNA分子中只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)。而真核生物DNA分子有多個(gè)復(fù)制起始位點(diǎn)。抗生素抗性基因：可以便于加以檢測(cè)，如Amp+,Kan+。多克隆位點(diǎn)MCS：克隆攜帶外源基因片段。P/E啟動(dòng)子/增強(qiáng)子Te

Tamoxifen誘導(dǎo)Cre-ERT2小鼠使用指南2024/06/20: Cre-ERT2小鼠是一類含有雌激素受體的配體結(jié)合區(qū)突變體（ERT）與cre重組酶的融合蛋白表達(dá)的小鼠。Cre-ERT2在無Tamoxifen誘導(dǎo)的情況下，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)處于無活性狀態(tài)；當(dāng)Tamoxifen誘導(dǎo)后，Tamoxifen的代謝產(chǎn)物4-OHT（雌激素類似物）與ERT結(jié)合，可使Cre-ERT2進(jìn)核發(fā)揮Cre重組酶活性。Tamoxifen給藥建議如下：3.他莫昔芬的給藥方式他莫昔芬可以通過腹腔注射、灌胃、飲食或飲水等途徑給藥，應(yīng)用比較廣的是腹腔注射給藥，腹腔注射的給藥劑量精準(zhǔn)，便于控制。腹腔注

熱激轉(zhuǎn)化大腸桿菌的原理2024/06/20: 鈣離子使得DNA沉淀于細(xì)胞表面，在熱激使得細(xì)胞膜出現(xiàn)間隙后，進(jìn)入胞內(nèi)，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化的目的。這個(gè)過程主要分2步：1.低溫、低滲的鈣離子溶液，能使得大腸桿菌細(xì)胞膨脹；鈣離子使得細(xì)胞膜通透性改變，容易粘附外源DNA，形成羥基-磷酸鈣復(fù)合物。2.42°C熱激細(xì)胞，細(xì)胞膜產(chǎn)生擾動(dòng)，出現(xiàn)間隙。粘附在細(xì)胞膜的dna通過膜通道，進(jìn)入到細(xì)胞中，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。安培生物致力成為推動(dòng)生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具

WB實(shí)驗(yàn)詳細(xì)步驟及用到的相關(guān)試劑匯總2024/06/17: 以下是WB實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)步驟及相關(guān)試劑耗材匯總：一、實(shí)驗(yàn)步驟1.蛋白提取：使用適當(dāng)?shù)牧呀庖禾崛〉鞍住?.蛋白定量：采用Bradford法或BCA法等測(cè)定蛋白濃度。3.SDS-PAGE電泳：配制分離膠和濃縮膠，上樣進(jìn)行電泳。4.轉(zhuǎn)膜：將蛋白從凝膠轉(zhuǎn)移到PVDF或NC膜上。5.封閉：用封閉液封閉膜。6.一抗孵育：加入一抗，室溫或4℃孵育。7.洗滌：用洗滌液多次洗滌膜。8.二抗孵育：加入相應(yīng)的二抗，孵育后洗滌。9.顯色：使用化學(xué)發(fā)光試劑顯色，曝光并成像。二、試劑耗材1.試劑：裂解液、PBS、蛋白上樣緩沖液

假陽性？條帶不對(duì)？菌液PCR問題一網(wǎng)打盡2024/06/13: 1.平板長(zhǎng)菌，但挑的單克隆菌落搖不起來？產(chǎn)生原因及解決辦法：（1）挑取的單克隆為雜菌，呈假陽性。出現(xiàn)這種情況的原因包括：①配制平板過程中，加入抗生素時(shí)溫度過高致使抗生素滅活；②配制平板過程中，抗生素濃度過低；③平板培養(yǎng)時(shí)間太長(zhǎng)導(dǎo)致抗生素失效。（2）液體培養(yǎng)基的抗生素使用錯(cuò)誤。（3）液體培養(yǎng)基抗生素濃度過高，導(dǎo)致大腸桿菌生長(zhǎng)緩慢。（4）菌液保存太久，導(dǎo)致菌的活力過低。辦法：重新劃線涂板，挑取單克隆。（5）自己制備的感受態(tài)細(xì)胞受到雜菌污染。（6）噬菌體污染?，F(xiàn)象描述：菌液清亮或渾濁后變?yōu)榍辶?，底部?

睡眠：一個(gè)被忽視的公共衛(wèi)生問題2024/06/12: 《柳葉刀-糖尿病與內(nèi)分泌學(xué)》（TheLancetDiabetes&Endocrinology）發(fā)表社論指出，對(duì)于18歲及以上的成年人，每天建議的睡眠時(shí)間為7-9小時(shí)，但實(shí)時(shí)經(jīng)濟(jì)、現(xiàn)代生活方式、工作壓力和生活環(huán)境對(duì)許多人的睡眠時(shí)間、睡眠時(shí)長(zhǎng)和質(zhì)量都有不利影響。如此多的人正在經(jīng)歷睡眠問題，且其對(duì)教育、就業(yè)、健康和經(jīng)濟(jì)產(chǎn)生了眾多連鎖反應(yīng)，睡眠作為一個(gè)公共衛(wèi)生問題應(yīng)引起重視。顯然，睡眠問題不僅僅是英國(guó)存在的問題，而是普遍存在的，影響著所有群體。然而，與提倡戒煙、健康飲食和身體活動(dòng)的健康宣傳活動(dòng)相比，人們

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟詳解2024/06/12: 以下是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)常見的步驟及用到的產(chǎn)品：步驟：1.準(zhǔn)備工作：超凈工作臺(tái)消毒；-用到的產(chǎn)品：75%酒精等；2.培養(yǎng)基配制：將基礎(chǔ)培養(yǎng)基與血清等添加物混合；-用到的產(chǎn)品：基礎(chǔ)培養(yǎng)基（如DMEM、RPMI1640等）、血清（如胎牛血清）、雙抗（青霉素、鏈霉素）等。3.細(xì)胞復(fù)蘇：從液氮中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中融化，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中。-用到的產(chǎn)品：凍存管。4.培養(yǎng)：將細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，保持適宜溫度、濕度和二氧化碳濃度。-用到的產(chǎn)品：培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿等。5.換液：定期更換新鮮培養(yǎng)基。6.細(xì)胞傳

提高效率與質(zhì)量的實(shí)用技巧2024/06/12: 1、提高實(shí)驗(yàn)的效率1）實(shí)驗(yàn)前有計(jì)劃安排、預(yù)備方案或者“車輪戰(zhàn)”（細(xì)胞實(shí)驗(yàn)）一般從基礎(chǔ)的培養(yǎng)細(xì)胞開始，開始實(shí)驗(yàn)時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法一般來自于實(shí)驗(yàn)室或者文獻(xiàn)中條件優(yōu)化以及自我推測(cè)及驗(yàn)證，因此做實(shí)驗(yàn)之前預(yù)想實(shí)驗(yàn)方案有助于我們不至于“手忙腳亂”。以實(shí)驗(yàn)前的細(xì)胞鋪板實(shí)驗(yàn)為例：表1常用細(xì)胞培養(yǎng)體系：細(xì)胞鋪板的孔數(shù)一般取決于我們后期實(shí)驗(yàn)的目的，實(shí)驗(yàn)前了解各類細(xì)胞的鋪板數(shù)量以及培養(yǎng)基添加量都十分重要。以病毒或者細(xì)菌感染細(xì)胞模型來說，我們需要一個(gè)比較準(zhǔn)確數(shù)量級(jí)的細(xì)胞數(shù)目和病毒或菌液濃度得后期實(shí)驗(yàn)的MOI值，細(xì)胞計(jì)數(shù)和病毒

細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的操作步驟及經(jīng)驗(yàn)分享2024/06/12: 細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是一種常用的基因傳遞技術(shù)，其中慢病毒轉(zhuǎn)染作為一種有效的手段被廣泛采用。通過慢病毒載體，可將目的基因序列穩(wěn)定地整合到宿主細(xì)胞基因中，實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期穩(wěn)定的表達(dá)。這種轉(zhuǎn)染方法不僅能夠在多種細(xì)胞系中高效地實(shí)現(xiàn)基因傳遞，還能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)特定基因的穩(wěn)定表達(dá)，為基因功能研究和細(xì)胞工程提供了重要工具。早在1981年，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)并研究了人類免疫缺陷病毒I型（HIV-1），從而掀開了慢病毒作為載體的研究序幕。慢病毒（Lentivirus）載體是通過HIV-1進(jìn)行改造而得到的，其具備感染細(xì)胞的能力，包括分裂期和非

不止助眠！我國(guó)學(xué)者發(fā)現(xiàn)褪黑素還能延緩腎臟衰老2024/06/11: 研究人員發(fā)現(xiàn)，褪黑激素在維持線粒體穩(wěn)態(tài)中起著至關(guān)重要的作用。p53、p21、p16和SASP的表達(dá)上調(diào)是細(xì)胞衰老的標(biāo)志，與對(duì)照(Ctrl)組相比，阿特拉津組p53、磷酸化p53(p-p53)、p21和p16蛋白水平升高，SASPmRNA的表達(dá)上調(diào)，parkin水平下降。通過褪黑激素的補(bǔ)充，可以降低衰老相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)，并減輕阿特拉津引起的腎小管上皮細(xì)胞衰老。此外，褪黑激素通過激活Sirtuin3-超氧化物歧化酶2軸，消除了腎臟中活性氧的積累，抑制腎臟氧化應(yīng)激和線粒體損傷。褪黑激素，又名5甲氧基-

免疫組化實(shí)驗(yàn)詳細(xì)步驟匯總2024/06/11: 步驟：1.切片準(zhǔn)備：將組織進(jìn)行石蠟包埋，切成薄片并貼附于載玻片上。-用到的產(chǎn)品：載玻片等。2.烤片：將切片放入烤箱中適當(dāng)溫度烤片，使切片緊密貼附。3.脫蠟：依次使用二甲苯等進(jìn)行脫蠟處理。-用到的產(chǎn)品：二甲苯、乙醇等。4.水化：梯度乙醇水化至水。5.抗原修復(fù)：根據(jù)需要選擇合適的抗原修復(fù)方法，如熱修復(fù)或酶修復(fù)等。-用到的產(chǎn)品：抗原修復(fù)液等。6.滅活內(nèi)源性過氧化物酶：使用過氧化氫溶液處理。-用到的產(chǎn)品：3%過氧化氫溶液。7.封閉：用血清或BSA等封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。-用到的產(chǎn)品：封閉液。8.一抗孵育

提取基因組，細(xì)胞裂解是用物理方法、化學(xué)法還是酶解法？2024/06/06: 提取基因組，細(xì)胞裂解是用物理方法、化學(xué)法還是酶解法？物理方法化學(xué)方法大部分用化學(xué)法，但也有可能搭配使用。細(xì)胞裂解的物理放方法指的是機(jī)械破碎，如勻漿法、研磨法、超聲波處理法，還有反復(fù)凍融的方法。酶解法是將溶菌酶或蛋白酶K將入，使細(xì)胞壁破碎?；瘜W(xué)法是使用含SDS或CTAB的溶液來對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理，在一定的pH環(huán)境和變性條件下,細(xì)胞破裂,蛋白質(zhì)變性沉淀,核酸被釋放到水相現(xiàn)在常用的是基因組提取試劑盒，大部分是用化學(xué)法裂解的。但如果碰上一些特殊的實(shí)驗(yàn)樣本，還需要多種方法搭配使用。例如真菌，僅靠化學(xué)方法無法有

慢病毒制備和導(dǎo)入細(xì)胞的操作步驟及注意事項(xiàng)2024/06/06: 前置知識(shí)通過病毒介導(dǎo)將核酸導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞是一種常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，被廣泛用于基因傳遞、基因表達(dá)和功能研究等領(lǐng)域。這個(gè)實(shí)驗(yàn)通常分為以下6個(gè)部分：1.選擇適當(dāng)?shù)牟《据d體：常用的病毒載體包括腺病毒（Adenovirus）、腺相關(guān)病毒（Adeno-associatedvirus，AAV）和逆轉(zhuǎn)錄病毒（Retrovirus）。2.構(gòu)建表達(dá)載體：將目標(biāo)核酸（例如基因、RNA等）插入到病毒載體的適當(dāng)位點(diǎn)上，構(gòu)建表達(dá)載體。這通常涉及將目標(biāo)核酸序列克隆到適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體質(zhì)粒中，并進(jìn)行驗(yàn)證和測(cè)序。3.病毒包裝和擴(kuò)增：將

什么是基因編輯技術(shù)？（下）2024/06/05: 四、轉(zhuǎn)錄激活樣效應(yīng)因子核酸酶技術(shù)（TALEN）轉(zhuǎn)錄激活樣效應(yīng)（TranscriptionActivator-LikeEffector,TALE）核酸酶（Nucleases,TALENs）是一種基因編輯工具，其工作原理與鋅指核酸酶（ZFNs）類似，但是它們使用不同的DNA結(jié)合蛋白。TALEN是一種人工制造的蛋白質(zhì)，由兩部分組成：一個(gè)DNA結(jié)合域（TALE）和一個(gè)FokI核酸酶。1、TALEDNA結(jié)合域TALE蛋白是由植物病原體Xanthomonas細(xì)菌產(chǎn)生的，它們可以識(shí)別并結(jié)合到植物基因中的特定序

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