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細胞增殖分析（CCK-8 法）2022/09/19

CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。CCK-8&MTT方法比較方法優(yōu)點缺點CCK-8法靈敏度高、不使用有機溶劑、檢測迅速、重復性好價格較MTT貴、CCK8試劑的顏色為淡紅色、與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近，容易漏加或多加MTT法價格便宜操作步驟較多，需要使用有機試劑，靈敏度不如CCK-8，多數(shù)需要配制，檢測時間長，細胞毒性較高一、原理：CCK-8是MTT的升級產(chǎn)品，其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-

從肝臟組織中制備細胞核2022/09/15

一、材料與儀器：大鼠、裂解緩沖液、濃蔗糖溶液、超速離心機、組織研磨器二、實驗步驟：1.配制裂解緩沖液和濃蔗糖溶液（PMSF在使用前添加），冰上放置。裂解緩沖液:①0.25mol/L蔗糖網(wǎng)織紅細胞標準緩沖液（RSB）②0.25mol/L蔗糖（超級純）③10mmol/Tris-HCl(pH7.4)④10mmol/LNaCl⑤3mmol/LMgCl2⑥1mmol/LDTT⑦0.5mmol/LPMSF(用前從溶于乙醇的100mmol/L貯存液中添加）濃蔗糖溶液:①2mol/L蔗糖RSB②2mol/L蔗糖

從哺乳動物細胞或組織分離DNA2022/09/09

材料與儀器：細胞、TBS抽提緩沖液、離心管實驗步驟：步驟1：根據(jù)樣品類型，從下列方法中選一個作為步驟1進行操作。(1)細胞樣品①單層培養(yǎng)的細胞以用冰預冷的TBS將單層細胞洗滌2次，用刮棒把細胞刮入約0.5ml的TBS中，將細胞懸液轉移到冰浴的離心管中，用1mlTBS沖洗培養(yǎng)皿，并入離心管中的細胞懸液。于4℃以1500g離心10分鐘以收獲細胞。用5~10倍體積經(jīng)冰預冷的TBS重懸細胞并再度離心。用TE(pH8.0）重懸細胞，使細胞密度為5x107細胞/ml，轉移至一個三角燒瓶中（1ml細胞懸液用5

細胞凍存和復蘇實驗2022/09/01

實驗方法原理：細胞凍存和復蘇的基本原理是慢凍快解凍，已被證明能最大限度地提高細胞活力。目前常用甘油或二甲基亞砜作為細胞低溫保存的保護劑。這兩種物質可以提高細胞膜對水的滲透性，再加上緩慢的冷凍可以使細胞內(nèi)的水從細胞中滲出，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶形成對細胞的損傷。復蘇細胞時應采用快速熔融的方法，以保證細胞外晶體在短時間內(nèi)熔融，以避免因水緩慢熔融進入細胞形成細胞內(nèi)重結晶而對細胞造成損傷。實驗材料：細胞試劑、試劑盒：D-Hanks液、小牛血清、培養(yǎng)液、青霉素、鏈霉素、胰蛋白酶、HCl、NaH

標記細胞株要如何保存？2022/08/09

細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細胞系，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代，或傳代次數(shù)有限，可稱為有限細胞系，如可以連續(xù)培養(yǎng)，則稱為連續(xù)細胞系，培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。所以細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養(yǎng)細胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講，可培養(yǎng)到40-50代。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。對于人類腫

細胞培養(yǎng)基介紹2022/07/14

細胞培養(yǎng)基的概念01細胞培養(yǎng)基是人工模擬細胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境，并提供細胞營養(yǎng)和促進細胞生長增殖的基礎物質。細胞培養(yǎng)基是細胞培養(yǎng)的基礎，它為動物細胞的健康快速成長提供營養(yǎng)物質。所以，只要用到細胞進行生物技術產(chǎn)品的生產(chǎn)制造，就勢必少不了細胞培養(yǎng)基。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基，英文都是medium。當它是粉劑時，傾向性地稱為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常需補加血清、抗生素等成分。細胞培養(yǎng)基的分類02培養(yǎng)基主要有：天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基和無血清細胞培養(yǎng)基等。天然細胞培養(yǎng)基是人們早期

C57小鼠皮膚成纖維細胞原代培養(yǎng)的方法2022/07/14

實驗方法1.將實驗小鼠脫頸處死，75%乙醇浸泡5min，固定，備皮，取背部皮膚至于含雙抗的冷PBS緩沖液中。2.仔細剝離脂肪，血管等多余組織，PBS清洗，加胰酶消化1h。3.分離真表皮，去除表皮后，PBS清洗3次。4.將真皮部分于培養(yǎng)皿內(nèi)剪碎，加入適量胰酶，轉移至15ml離心管內(nèi)，37℃恒溫水浴消化1h。5.消化結束后，加入H-DMEM*培養(yǎng)基終止反應，1000rpm離心5min，棄上清。6.PBS清洗一遍，離心棄上清。7.將清洗后的組織塊均勻鋪于6cm培養(yǎng)皿內(nèi)，加入2ml*培養(yǎng)基，37℃，5%

說說關于細胞外泌體研究的幾個重要問題2022/07/06

外泌體是細胞分泌到胞外的一種囊泡，其大小為30-150nm，具有雙層膜結構和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質等），參與細胞間的分子傳遞。外泌體廣泛存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，細胞外泌體研究是近些年研究的熱點。細胞外泌體主要原理是根據(jù)外泌體的密度、粒徑、沉降系數(shù)和親和力等差異進行分離，提取方法包括傳統(tǒng)的差速離心、密度梯度離心，以及后來發(fā)展的超濾法、聚合物沉淀法、免疫分離、隔離篩選法、體積排阻色譜法等。這些方法各有利弊。細胞外泌體研究常見問題：1、培養(yǎng)細胞時，如何避免血清來源

SD大鼠乳鼠心臟微血管內(nèi)皮細胞原代分離培養(yǎng)方法2022/07/05

1.將新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min，開胸，取出心臟后于含有雙抗的預冷過的D-HANKS中漂洗兩遍，移入超凈臺。2.仔細剪除大血管，左右心房及右心室和室間隔，保留左心室，去除內(nèi)、外膜，PBS清洗。3.用眼科剪將心室肌剪碎至約1mm3，滴加1ml胎牛血清，均勻接種于6cm細胞培養(yǎng)皿內(nèi)，組織塊間隔1-2mm，放入5%CO2，37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。4.4小時后去除培養(yǎng)皿，加入3ml含有20%FBS和1%雙抗的H-DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。5.一般情況下48小時后可見有細胞爬出，換新鮮培

新生SD大鼠大腦皮層神經(jīng)元原代分離培養(yǎng)方法2022/06/30

一.實驗方法1.多聚賴氨酸（Poly-D-Lysine）包被培養(yǎng)板的制備：原代分離進行前一天，用PBS緩沖液配制終濃度為0.1mg/ml的多聚賴氨酸工作液，0.22μm濾膜過濾除菌，于超凈工作臺內(nèi)吸取1ml加入六孔板內(nèi)，確保覆蓋板底，靜置孵育30min后吸出（可回收反復使用2-3次），用無菌水清洗培養(yǎng)板，置于超凈臺內(nèi)晾干，照紫外過夜。2.次日，取出生24h以內(nèi)的SD大鼠，75%乙醇浸泡消毒5min。3.棉球吸干乳鼠體表的乙醇，迅速斷頭，浸泡于冰冷的含有2%雙抗的PBS緩沖液中。4.剪開顱骨，取出

原代細胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法？2022/06/14

研究中常用的細胞系/株系是現(xiàn)成的，我們只需要進行細胞傳代和種子保存。然而，這些細胞系往往因長期體外培養(yǎng)而失去原有的生物學特性，對藥物治療的反應差距越來越大。因此，越來越多的人選擇原代細胞。來源于胚胎、組織、器官和外周血，經(jīng)特殊分離方法制備的原代培養(yǎng)細胞稱為原代細胞。原代細胞培養(yǎng)，也稱為原代培養(yǎng)，是從供體獲得的組織細胞在體外的培養(yǎng)。原代細胞是接近和最能反映體內(nèi)生長特性的細胞，適用于藥敏試驗、細胞分化等實驗研究。原代細胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法？1、組織培養(yǎng)法組織培養(yǎng)是一種常見、簡單且成功的原代細胞分

充質干細胞涉及的研究竟然這么多2022/05/11

充質干細胞是人體內(nèi)一類具有自我更新和多向分化潛能的原始細胞群。根據(jù)遺傳來源的分類，干細胞可分為胚胎干細胞和成體干細胞。其中，胚胎干細胞具有發(fā)育全能性，是干細胞研究和應用中具吸引力的一種。然而，關于胚胎干細胞的研究一直存在倫理爭議。與胚胎干細胞相比，成體干細胞具有獲取方便、致瘤風險低、無倫理爭議等優(yōu)點。因此，成體干細胞已成為干細胞臨床應用研究的主要對象。在成體干細胞的許多臨床研究中，充質干細胞是最多的。間充質干細胞是一種來源于中胚層的成體干細胞，具有自我更新和多向分化的潛能。間充質干細胞不僅存在于

原代細胞分離培養(yǎng)有哪些注意事項？2022/04/13

原代細胞分離培養(yǎng)有哪些注意事項？1、組織塊培養(yǎng)法（1）接種后的前3天，觀察和移動時注意不要引起液體振蕩。避免頻繁的翻倒和振動，否則組織塊不易附著在瓶壁上或附著后脫落飄浮。（2）加入的培養(yǎng)基不宜過多，以免浸泡的組織因輕微波動而脫落。（3）細胞向外遷移時，注意記錄并清除漂浮的組織塊和殘留細胞。它們產(chǎn)生的有毒物質會影響原代細胞的生長。（4）為促進組織塊盡快貼在培養(yǎng)瓶上，可在種植前在培養(yǎng)瓶底壁涂上一層薄薄的膠原蛋白。2、貼壁原代細胞（1）原代細胞分離培養(yǎng)的分離細胞一次接觸體外環(huán)境時，會相互影響。這些細胞

充質干細胞的醫(yī)療價值真的很高2022/03/15

充質干細胞是一種早期未分化細胞，具有自我更新、自我復制、無限增殖和多向分化潛能等特點。它們可以分泌細胞因子，減輕炎癥，減少組織細胞凋亡，促進內(nèi)源性組織器官干祖細胞的增殖，進行免疫調(diào)節(jié)，從而達到作為種子細胞修復組織器官的效果。經(jīng)過連續(xù)傳代和冷凍保存后，仍具有多向分化潛能，被醫(yī)學界稱為“萬能細胞”。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)充質干細胞實際上是一組具有高自我更新能力和不同分裂增殖能力的多能干細胞。它們可以在體外培養(yǎng)和擴增，也可以在特定條件下分化成神經(jīng)細胞、成骨細胞、軟骨細胞、肌肉細胞、脂肪細胞等。間充質干細

腸道腫瘤類器官的研究與應用2022/02/23

ONCOGENESIS|腸道腫瘤類器官的應用研究類器官（Organoids）類器官是一項創(chuàng)新性較高的研究技術，近幾年來受到科研人士的追捧和廣泛好評。目前，我們國家在政策層面也給予了大力地支持。2021年科技部發(fā)布的“十四五”國家重點研發(fā)計劃“干細胞研究與器官修復”重點專項中也特別提到疾病類器官模型。什么是類器官（Organoids）？類器官屬于三維（3D）細胞培養(yǎng)物，包含其代表器官的一些關鍵特性。類體外培養(yǎng)系統(tǒng)包括一個自我更新干細胞群，可分化為多個器官特異性的細胞類型，與對應的器官擁有類似的空間

細胞污染的辨別2022/02/23

細胞污染的辨別細胞污染有很多種不同的類型，不同情況的細胞污染其表現(xiàn)也不同，檢測方法也有所不同。不過大部分的細胞污染，用肉眼加鏡檢就可以解決啦！細胞污染一般分細菌污染，真菌污染，支原體污染，黑膠蟲等。1.細菌污染pH升高，培養(yǎng)基變黃，培養(yǎng)基嚴重渾濁，鏡下可見細菌游動。2.真菌污染培養(yǎng)液短期內(nèi)多不渾濁，有肉眼可見漂浮物，鏡下細胞間有菌絲體，生長變慢，時間長細胞死亡。3.支原體污染支原體污染后，細胞生長一般無可見變化，在光學顯微鏡下不可見，極易被忽視，往往直到污染非常嚴重時才能發(fā)現(xiàn)，檢測需要通過特定的

細胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)支原體污染，該怎么辦？2022/02/23

細胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)支原體污染，該怎么辦？加油新學期謹記：對抗污染，預防大于一切！在細胞培養(yǎng)過程中，很多小伙伴兒一直受到支原體污染的困擾，我自己養(yǎng)的細胞曾經(jīng)也遇到過支原體污染，深受其害呀！針對于支原體污染來說，大家一定注意預防！如果已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一絲絲污染跡象，就要做到早發(fā)現(xiàn)、早挽救！如果細胞能夠救回來，還是可以繼續(xù)實驗的，不耽誤實驗進度。不過，確實也很難*清除??！如果說實在救不回來，那就再買一株新的細胞吧！最后，要買細胞的同學和老師，可以電話或郵箱聯(lián)系我們哦！支原體污染對細胞培養(yǎng)造成多方面的不良影響

細胞培養(yǎng)基大盤點2022/01/25

細胞培養(yǎng)基的概念01細胞培養(yǎng)基是人工模擬細胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境，并提供細胞營養(yǎng)和促進細胞生長增殖的基礎物質。細胞培養(yǎng)基是細胞培養(yǎng)的基礎，它為動物細胞的健康快速成長提供營養(yǎng)物質。所以，只要用到細胞進行生物技術產(chǎn)品的生產(chǎn)制造，就勢必少不了細胞培養(yǎng)基。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基，英文都是medium。當它是粉劑時，傾向性地稱為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常需補加血清、抗生素等成分。細胞培養(yǎng)基的分類02培養(yǎng)基主要有：天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基和無血清細胞培養(yǎng)基等。天然細胞培養(yǎng)基是人們早期

原代心肌細胞間的培養(yǎng)是為了什么？2022/01/11

原代心肌細胞間作為主要研究模型廣泛應用于心血管研究，經(jīng)過長期的嘗試，我們實驗室找到了一些行之有效的方法，積累了一些經(jīng)驗?？偨Y如下：1、細胞分散和接種均勻度分離出來的心肌細胞在溶液中Ca2+的作用下容易結塊，因此，在差動貼壁前后，應將心肌細胞輕輕吹吹多次，形成單一分散狀態(tài)。接種后，心肌細胞應均勻分布在培養(yǎng)板上避免細胞聚集到培養(yǎng)孔中心另外，將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱后，用滴管輕輕吹每個孔中心部分2~3次，但要特別注意避免污染。2、成纖維細胞的抑制和血清類型的選擇成纖維細胞比原代心肌細胞間更容易貼壁，具有分裂

細胞培養(yǎng)基給了體外細胞“一個家”2021/12/13

細胞培養(yǎng)基是人工模擬動物體內(nèi)細胞生長環(huán)境，維持細胞體外存活和增殖的營養(yǎng)基礎。它的主要功能是為細胞提供合適的pH值和滲透壓，以及細胞自身不能合成的各種營養(yǎng)物質。細胞培養(yǎng)基系列產(chǎn)品包括旨在支持和維持細胞系生長的產(chǎn)品，適用于多種哺乳動物細胞和細胞系，經(jīng)過長時間的測試和驗證。我們開發(fā)的即用型培養(yǎng)基產(chǎn)品包括粉末和濃縮物，可以滿足您的實驗設施和預算的雙重需求。培養(yǎng)基中特別添加了能有效改善細胞生長狀態(tài)的營養(yǎng)成分和針對不同物種特選的優(yōu)質培養(yǎng)基，適用于各種干細胞的體外培養(yǎng)。1、預先加入穩(wěn)定形態(tài)的L-谷氨酰胺，防止