2025 版《中國(guó)藥典》解讀丨“分子學(xué)解碼”第四期：微生物標(biāo)準(zhǔn)的變化與發(fā)展趨勢(shì)

分子學(xué)解碼

微生物標(biāo)準(zhǔn)的變化與發(fā)展趨勢(shì)

2025 年版《中國(guó)藥典》微生物標(biāo)準(zhǔn)迎來(lái)重大修訂，新增指導(dǎo)原則、收緊檢測(cè)要求、推動(dòng)分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用。面對(duì)這場(chǎng)席卷行業(yè)的監(jiān)管升級(jí)，您是否已做好技術(shù)儲(chǔ)備？本文深度解析藥典更新背后的國(guó)際協(xié)調(diào)趨勢(shì)，為您劃出必須開(kāi)展微生物檢測(cè)的關(guān)鍵場(chǎng)景，并附上前沿檢測(cè)技術(shù)推薦清單，助您在變革中搶占合規(guī)先機(jī)！

PART 1無(wú)菌藥品及相關(guān)產(chǎn)品

1. 藥典原文與變化

通則 1101

《無(wú)菌檢查法》

● 保留“所有標(biāo)明‘無(wú)菌’的藥品（如注射劑、眼用制劑）需進(jìn)行無(wú)菌檢查”核心要求；  

● 新增“實(shí)驗(yàn)室應(yīng)基于質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理的要求，根據(jù)產(chǎn)品特性、方法適用性試驗(yàn)結(jié)果、人員技能與經(jīng)驗(yàn)、數(shù)據(jù)可靠性、污染控制措施和實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制水平等因素，綜合評(píng)估確定日常檢驗(yàn)過(guò)程中陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)的必要性和頻次、要求?！?/span>

0251

《藥用輔料要求》

● 明確“藥用輔料的微生物限度應(yīng)符合要求；用于無(wú)除菌工藝的無(wú)菌制劑的藥用輔料應(yīng)符合無(wú)菌要求（通則 1101 ）”；  

● 新增“輔料微生物污染風(fēng)險(xiǎn)需結(jié)合生產(chǎn)工藝評(píng)估” 

 2. 合規(guī)意義

無(wú)菌藥品污染風(fēng)險(xiǎn)高，傳統(tǒng)培養(yǎng)法耗時(shí)較長(zhǎng)（14天），可以結(jié)合快速檢測(cè)技術(shù)支持生產(chǎn)過(guò)程控制。  

 3. 推薦技術(shù)

 qPCR

無(wú)菌生產(chǎn)環(huán)境微生物負(fù)荷快速篩查（如 B 級(jí)區(qū)空氣懸浮粒子微生物鑒定）。

dPCR

符合“微量微生物殘留檢測(cè)需求”，如檢測(cè)高風(fēng)險(xiǎn)輔料（如濾膜）中支原體 DNA 絕對(duì)定量，避免假陰性風(fēng)險(xiǎn)。 

PART 2非無(wú)菌產(chǎn)品 

1. 藥典原文與變化

9201

《藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則》

● 新增“相較于傳統(tǒng)方法，新技術(shù)通常具有快速、可實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)或近實(shí)時(shí)監(jiān)控等優(yōu)勢(shì)，替代方法可用于藥品生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量控制和終產(chǎn)品放行的微生物檢驗(yàn)?！?/span>

● 明確“這些新技術(shù)大體可分為三類(lèi)：

① 檢測(cè)微生物生長(zhǎng)信息的技術(shù)，如生物發(fā)光技術(shù)、電化學(xué)技術(shù)、 比濁法等；

② 直接測(cè)定介質(zhì)中活微生物的技術(shù)，如固相細(xì)胞計(jì)數(shù)法、流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法等；

③ 分析微生物細(xì)胞中特定成分的技術(shù)，如脂肪酸測(cè)定技術(shù)、核酸擴(kuò)增技術(shù)、基因指紋分析技術(shù)等。”

● 新增“鑒定試驗(yàn)就是借助現(xiàn)有的分類(lèi)系統(tǒng)，通過(guò)對(duì)未知微生物的特征測(cè)定，對(duì)其進(jìn)行細(xì)菌、酵母菌和霉菌大類(lèi)的區(qū)分，或?qū)佟⒎N及菌株水平確認(rèn)。鑒定試驗(yàn)驗(yàn)證參見(jiàn)微生物鑒定指導(dǎo)原則（通則 9204）”

● 新增"替代方法驗(yàn)證需包括準(zhǔn)確性、精密度、檢測(cè)限、定量限、專(zhuān)屬性、耐用性等參數(shù)"的具體要求。

9202

《非無(wú)菌微生物限度檢查指導(dǎo)原則》

● 明確“非無(wú)菌藥品需根據(jù)給藥途徑、用途設(shè)定微生物限度標(biāo)準(zhǔn)”；

● 明確“藥品微生物檢查過(guò)程中， 如果藥典規(guī)定的微生物計(jì)數(shù)方法不能對(duì)微生物 在規(guī)定限度標(biāo)準(zhǔn)的水平上進(jìn)行有效的計(jì)數(shù)，那么應(yīng)選擇經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的、且檢測(cè)限盡可能接近其微生物限度標(biāo)準(zhǔn)的方法對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)?！? 

● 新增“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)中，還需控制具有潛在危害的不可接受的微生物”。

● 明確“若供試品檢出疑似目標(biāo)菌，確證的方法應(yīng)選擇已被認(rèn)可的菌種鑒定方法”  

9213

《藥品微生物分析方法驗(yàn)證、確認(rèn)及轉(zhuǎn)移指導(dǎo)原則》

● 新增“藥品微生物分析方法主要分三種類(lèi)型：定性方法、定量方法和鑒定方法。定性方法是指測(cè)定樣品中是否存在目標(biāo)微生物的方法；定量方法是指測(cè)定樣品中目標(biāo)微生物數(shù)量或濃度的方法；鑒定方法是借助現(xiàn)有的分類(lèi)系統(tǒng)，通過(guò)對(duì)微生物的特征測(cè)定，對(duì)其進(jìn)行細(xì)菌、酵母菌和霉菌大類(lèi)的區(qū)分，或?qū)?、種及菌株水平確認(rèn)的方法?！?/span>

● 新增“對(duì)于替代以培養(yǎng)為基礎(chǔ)的經(jīng)典微生物檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證，可參照藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則（指導(dǎo)原則 9201）實(shí)施。微生物鑒定方法的驗(yàn)證按微生物鑒定指導(dǎo)原則（指導(dǎo)原則  9204）實(shí)施?！?/span>

 2. 合規(guī)意義

● 替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則為分子生物學(xué)技術(shù)（如 qPCR、dPCR、16S 測(cè)序）在藥品微生物檢測(cè)中的合規(guī)應(yīng)用提供了明確標(biāo)準(zhǔn)；

● 解決了傳統(tǒng)培養(yǎng)法在抑菌制劑、不可培養(yǎng)微生物檢測(cè)中的局限性問(wèn)題；

● 為新技術(shù)應(yīng)用提供了驗(yàn)證框架，避免企業(yè)因方法變更面臨合規(guī)風(fēng)險(xiǎn)。

 3. 推薦技術(shù)

16S rRNA 測(cè)序（CE）

微生物的檢出及鑒定

qPCR

含抑菌成分藥品中特定病原菌的快速定性檢測(cè)

dPCR

藥品中支原體 DNA 的絕對(duì)定量檢測(cè)，尤其適用于細(xì)胞治療產(chǎn)品等高風(fēng)險(xiǎn)品種

NGS

通過(guò)全基因組測(cè)序來(lái)進(jìn)行微生物檢出及鑒定

PART 3特殊藥品及高風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品 

1. 藥典原文與變化

9406

《細(xì)胞類(lèi)制品微生物檢查指導(dǎo)原則》公示稿

● 明確細(xì)胞類(lèi)制品由于效期短，產(chǎn)量小，可供檢驗(yàn)的數(shù)量有限，不適合傳統(tǒng)的無(wú)菌檢查法（通則1101），更推薦采用快速微生物檢查法（指導(dǎo)原則9201）

● 明確“當(dāng)制品檢出污染菌時(shí)，應(yīng)對(duì)污染菌進(jìn)行鑒定，進(jìn)一步評(píng)估其對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響，鑒定方 法可參考微生物鑒定指導(dǎo)原則（通則 9204）?！?/span>

● 明確“生產(chǎn)全過(guò)程需進(jìn)行微生物監(jiān)控，包括原材料、生產(chǎn)環(huán)境、終產(chǎn)品”（新增條款）。  

 2. 合規(guī)意義

細(xì)胞治療產(chǎn)品直接輸注患者體內(nèi)，微生物有污染風(fēng)險(xiǎn)，傳統(tǒng)方法需要至少 14 天的培養(yǎng)，且無(wú)法檢測(cè)不可培養(yǎng)病原體。  快速微生物檢查法在檢測(cè)速度、自動(dòng)化、實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)、 信息化方面具有一定的優(yōu)勢(shì)，不僅可用于生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量控制，也可基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的結(jié)果， 有條件地應(yīng)用于成品的放行檢查。

 3. 推薦技術(shù)

dPCR

用于細(xì)胞類(lèi)制品中宿主 DNA 或支原體 DNA 的絕對(duì)定量檢測(cè)

qPCR

快速篩查細(xì)胞制品中的支原體或特定病原體，適用于生產(chǎn)過(guò)程中的實(shí)時(shí)放行檢測(cè)

 16S rRNA 測(cè)序（CE）

通過(guò)微生物 16S rRNA 基因分析鑒定未知污染菌種，用于污染溯源和環(huán)境監(jiān)控

NGS 宏基因組測(cè)序

檢測(cè)所有微生物，適用于高風(fēng)險(xiǎn)制品的全面微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

PART 4不可接受微生物的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

1. 藥典原文與變化

9212

《非無(wú)菌產(chǎn)品不可接受微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估指導(dǎo)原則》 

● 定義“不可接受微生物”為“能夠在非無(wú)菌產(chǎn)品中生存或繁殖，對(duì)產(chǎn)品理化特性產(chǎn)生不利影響、破壞其功能及療效，或經(jīng)特定給藥途徑對(duì)患者健康造成損害的潛在危害微生物。”（如沙門(mén)菌、金黃色葡萄球菌）； 

● 要求“建立不可接受微生物數(shù)據(jù)庫(kù)并制定檢測(cè)鑒定策略，可參考（通則9204）”（新增條款）。  

 2. 合規(guī)意義

特定致病菌即使微量也可能導(dǎo)致產(chǎn)品召回或患者傷害，需針對(duì)性防控。 

 3. 推薦技術(shù)

NGS

檢測(cè)產(chǎn)品中的全部微生物（包括不可培養(yǎng)或混合污染菌群），識(shí)別潛在高風(fēng)險(xiǎn)微生物

CE

通過(guò) Sanger 測(cè)序?qū)Ψ蛛x純化的可疑菌落進(jìn)行單一微生物的精準(zhǔn)種屬鑒定，明確非無(wú)菌產(chǎn)品中特定不可接受微生物的身份

PART 5制藥用水與生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)測(cè)  

1. 藥典原文與變化

0261

《制藥用水》

● 新增“制藥用水需進(jìn)行微生物監(jiān)測(cè)，可采用微生物計(jì)數(shù)法（通則1105），或經(jīng)充分驗(yàn)證的等同或更優(yōu)方法，進(jìn)行微生物監(jiān)測(cè)?！保ㄐ略鰲l款）； 

● 新增“制藥用水系統(tǒng)應(yīng)經(jīng)過(guò)確認(rèn)/驗(yàn)證，并建立日常監(jiān)控、檢測(cè)和報(bào)告制度，有完善的原始記錄備查。”  

9209

《制藥用水微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則》  

● 新增“需要基于風(fēng)險(xiǎn)制定微生物監(jiān)測(cè)方案，對(duì)水系統(tǒng)中的微生物數(shù)量和類(lèi)群進(jìn)行持續(xù)監(jiān)測(cè)，根據(jù)趨勢(shì)變化情況評(píng)估水系統(tǒng)的運(yùn)行狀態(tài)。”

● 新增“為了更快速地獲得檢測(cè)結(jié)果，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理不良趨勢(shì)，藥品生產(chǎn)企業(yè)可選擇快速微生物檢測(cè)方法進(jìn)行制藥用水的微生物監(jiān)測(cè)，包括在線(xiàn)的微生物檢測(cè)方法?！?/span>

● 新增“可定期對(duì)制藥用水中分離微生物進(jìn)行適當(dāng)水平的鑒定，有助于掌握菌群結(jié)構(gòu)和開(kāi)展微生物污染溯源分析，評(píng)估水系統(tǒng)來(lái)源的微生物污染風(fēng)險(xiǎn)。注射用水檢出微生物一般應(yīng)進(jìn)行鑒定。微生物鑒定參照微生物鑒定指導(dǎo)原則（指導(dǎo)原則9204）進(jìn)行。”

 2. 合規(guī)意義

水系統(tǒng)污染可能導(dǎo)致整批藥品報(bào)廢，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)可提前預(yù)警風(fēng)險(xiǎn)。  

 3. 推薦技術(shù)

qPCR

快速篩查制藥用水中的特定微生物（如軍團(tuán)菌、銅綠假單胞菌等高風(fēng)險(xiǎn)病原體），適用于9209指導(dǎo)原則中要求的實(shí)時(shí)放行檢測(cè)和過(guò)程監(jiān)控，確保水質(zhì)微生物安全性。

dPCR

通過(guò)絕對(duì)定量檢測(cè)制藥用水中極低濃度的微生物 DNA（如支原體或特定致病菌），實(shí)現(xiàn)對(duì)制藥用水微生物污染的精準(zhǔn)定量監(jiān)控

NGS

全面檢測(cè)制藥用水中所有微生物（包括不可培養(yǎng)病原體、耐藥菌株及其基因），評(píng)估微生物風(fēng)險(xiǎn)

CE

對(duì)分離的微生物進(jìn)行種屬鑒定，識(shí)別污染微生物，可用于水源污染溯源和水質(zhì)異常調(diào)查

PART 6分子學(xué)方案

Applied Biosystems™ 7500 

實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 系統(tǒng)

Applied Biosystems™QuantStudio™5

實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 系統(tǒng)

Applied Biosystems™QuantStudio™ 6/7 Pro 

實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 系統(tǒng)

Applied Biosystems™ QuantStudio™ 6/7 Flex實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 系統(tǒng)

Applied Biosystems™ 

QuantStudio™Absolute Q™數(shù)字PCR系統(tǒng)

Applied Biosystems™ 3500 基因分析儀

Applied Biosystems™ SeqStudio 基因分析儀

Applied Biosystems™ SeqStudio Flex

系列基因分析儀

 Ion GeneStudio™ S5 系列高通量測(cè)序系統(tǒng)

Ion GeneStudio™ Genexus

一體化高通量測(cè)序系統(tǒng)

綜上所述，2025 年版《中國(guó)藥典》在微生物標(biāo)準(zhǔn)方面進(jìn)行了重大修訂，新增了多項(xiàng)指導(dǎo)原則，收緊了檢測(cè)要求，并積極推動(dòng)分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用。這些變化旨在提高藥品微生物檢測(cè)的準(zhǔn)確性和效率，特別是針對(duì)無(wú)菌藥品、非無(wú)菌產(chǎn)品、特殊藥品及高風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品，提供了更為科學(xué)和合規(guī)的檢測(cè)方法。企業(yè)應(yīng)積極采用推薦的先進(jìn)技術(shù)，確保產(chǎn)品質(zhì)量和患者安全。

尾聲

后續(xù)我們將對(duì)整個(gè)藥典第四部與分子學(xué)相關(guān)的內(nèi)容進(jìn)行解析，歡迎大家繼續(xù)關(guān)注！

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