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國內(nèi)首個臨床質(zhì)譜前處理專家共識發(fā)布！
2024年01月22日 13:19:52 來源：化工儀器網(wǎng) 點擊量：8994

2023年12月，由中國醫(yī)療保健國際交流促進會基層檢驗技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化分會、中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗專業(yè)委員會組織起草的《液相色譜‐串聯(lián)質(zhì)譜法臨床樣品前處理專家共識》正式發(fā)布。

　　【化工儀器網(wǎng) 標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布】2023年12月，由中國醫(yī)療保健國際交流促進會基層檢驗技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化分會、中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗專業(yè)委員會組織起草的《液相色譜‐串聯(lián)質(zhì)譜法臨床樣品前處理專家共識》正式發(fā)布，旨在為實驗室方法建立提供指導(dǎo)，助力臨床質(zhì)譜檢測方法的研發(fā)規(guī)范發(fā)展，這也是國內(nèi)首個臨床質(zhì)譜前處理專家共識。
 
　　液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜法(LC - MS/MS)集色譜技術(shù)的高分離能力和質(zhì)譜技術(shù)的高選擇性、高特異性及高靈敏性的優(yōu)點于一體，成為臨床檢驗領(lǐng)域最具有生命力的新技術(shù)之一，但其分析效果往往受待測樣品特性制約。由于質(zhì)譜儀的抗干擾能力有限,生物樣本多需要進行合適的樣品前處理才能有效提高檢測性能，實現(xiàn)精準(zhǔn)檢測。前處理的主要作用是將目標(biāo)分析物從生物基質(zhì)中有選擇性地分離出來，減少其他基質(zhì)組分的干擾。同時，還可將目標(biāo)分析物濃縮和富集，提高檢測靈敏度。目前，臨床樣本前處理方法不僅種類多，個別方法耗時繁瑣，給實驗室人員在方法選擇和開發(fā)及標(biāo)準(zhǔn)化操作等方面帶來了困難。因此，本共識旨在為實驗室方法建立提供指導(dǎo)，助力臨床質(zhì)譜檢測方法的研發(fā)規(guī)范發(fā)展。
 
　　建議1：樣品前處理技術(shù)人員應(yīng)經(jīng)過色譜質(zhì)譜原理、分析化學(xué)和藥物分析專業(yè)知識、儀器使用及維護、檢測項目、標(biāo)準(zhǔn)操作程序(Standard　Operating　Procedure，SOP)等專項培訓(xùn)，考核合格方可上崗。
 
　　建議2：樣品前處理方法選擇與儀器的靈敏度相關(guān)。濃度低或者質(zhì)譜離子化效率低的化合物，建議采用衍生化的方法提高化合物的離子化效率，或采用靈敏度更高的質(zhì)譜儀器。
 
　　建議3：實驗室應(yīng)根據(jù)待測物的理化性質(zhì)、生理水平、檢測精密度、靈敏度等要求，選擇合適的前處理方式和檢測儀器，實現(xiàn)可接受的性能要求和臨床預(yù)期用途。
 
　　建議4：鑒于液質(zhì)系統(tǒng)對于所使用的常見試劑、流動相化學(xué)級別和樣本的凈化程度要求較高，建議實驗室使用HPLC或LC‐MS純度的試劑，并采用凈化程度較高的前處理方法，減少對液質(zhì)系統(tǒng)的損耗或污染。根據(jù)實驗室對檢測通量的要求，選擇經(jīng)濟高效的前處理設(shè)備(管式或板式)。
 
　　建議5：待測物濃度高且基質(zhì)成分簡單的體液樣本(尿液、淚液、腦脊液等)推薦采用稀釋法。
 
　　建議6：對于含有豐富可溶性蛋白的血清、血漿和全血樣本，測定小分子化合物時推薦采用蛋白沉淀法。推薦采用酸、金屬鹽、有機溶劑等作為沉淀劑與樣本按一定比例混合，渦旋混勻，離心取上清后上機檢測。
 
　　建議7：根據(jù)待測物的不同理化性質(zhì)和極性特征，實驗室可以采用適當(dāng)?shù)妮腿》绞綄Υ郎y物和基質(zhì)其它成分進行分離，并綜合干擾物分離難度選擇合適的萃取載體，如從常規(guī)萃取(干血斑)、液液萃取、固液萃取到固相萃取，樣本的凈化能力遞增。
 
　　建議8：對于有磁珠法試劑盒的檢測項目而言，建議在經(jīng)過實驗室性能驗證合格后采用。搭配全自動樣本前處理系統(tǒng)，將極大地提高樣本前處理的自動化水平。
 
　　建議9：在使用超濾法時，應(yīng)注意超濾的速率。超濾膜的孔徑應(yīng)該低于結(jié)合目標(biāo)化合物的蛋白質(zhì)的分子量，孔徑過大則雜質(zhì)過高，不能充分分離，孔徑過小則有效成分通透率較低，損失較大。超濾過程中，另外，應(yīng)控制超濾的條件和時間，如生理條件(37℃、pH7.4)和低至中等的離心力。
 
　　建議10：PH值和溫度對于結(jié)合態(tài)激素和游離激素的平衡至關(guān)重要，應(yīng)在合適的pH值和溫度下進行透析操作。建議使用生化成分盡可能與血清/血漿離子環(huán)境接近的透析緩沖液。實驗室應(yīng)控制適當(dāng)?shù)木彌_液條件(如37℃、pH7.4)。
 
　　建議11：免疫親和提取中的親和柱需要平衡至室溫，再進行樣本提取;對于超過親和柱載量的樣本，需要減少上樣體積進行檢測。
 
　　建議12：衍生可以提高待測物穩(wěn)定性和分析靈敏度，但也有耗時耗力的劣勢，實驗室應(yīng)選擇合適的衍生試劑和條件，提高檢測效率。
 
　　建議13：實驗室應(yīng)注意前處理過程可能產(chǎn)生的揮發(fā)性氣體、發(fā)熱、噪音等污染，配備良好的通風(fēng)、散熱或者隔音設(shè)備。有條件的實驗室可以設(shè)置獨立的前處理區(qū)域，與儀器區(qū)分離開，降低對其它儀器和人員的干擾。實驗室應(yīng)對環(huán)境中影響檢測結(jié)果的微生物污染、灰塵、電磁干擾、濕度、供電、溫度、聲音和振動等進行評估并設(shè)定相應(yīng)要求。
 
　　隨著質(zhì)譜技術(shù)在臨床應(yīng)用的不斷深入和前處理技術(shù)的不斷發(fā)展,新型的前處理技術(shù)尤其是自動化技術(shù)將逐漸被開發(fā)并應(yīng)用于臨床。生物樣品的分析有望實現(xiàn)從樣品的采集、處理、分離到分析的完全自動化。本共識通過文獻調(diào)研、用戶調(diào)查、專家咨詢收集的臨床問題，重點對現(xiàn)有臨床質(zhì)譜前處理技術(shù)的主要原理、選擇依據(jù)和臨床應(yīng)用進行了闡述，將適時修訂，以滿足臨床規(guī)范化應(yīng)用的需求。希望本共識推動解決臨床檢測樣品前處理規(guī)范化發(fā)展的問題,在保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的前提下實現(xiàn)臨床檢測更高效、更經(jīng)濟、更快捷的前處理過程。
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