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Halo Pull Down(蛋白之間的互作研究)


Halo Pull Down技術(shù)是將Halo標(biāo)簽的融合蛋白固相化到磁珠上,與細(xì)胞總蛋白進(jìn)行孵育,鑒定與之相互作用的蛋白。該方法可以鑒定與已知蛋白相互作用的未知蛋白,也可以鑒定兩個已知蛋白間是否存在相互作用。

我們的Halo PullDown技術(shù)服務(wù)利用無細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)來表達(dá)Halo標(biāo)簽的融合蛋白(誘餌蛋白),節(jié)省時間,蛋白表達(dá)載體構(gòu)建成功后,不需要轉(zhuǎn)化和鑒定,可直接表達(dá)目的蛋白。 蛋白表達(dá)成功后進(jìn)行純化,將純化后的蛋白與細(xì)胞裂解液孵育一段時間后,洗去上清蛋白,將與目的蛋白結(jié)合的蛋白洗脫,并進(jìn)行質(zhì)譜檢測。


技術(shù)流程

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步驟內(nèi)容交付內(nèi)容周期
載體構(gòu)建
  • 客戶提供目的蛋白對應(yīng)的CDS的序列或質(zhì)粒,

  • 克隆至合適的表達(dá)載體,

  • 質(zhì)粒測序,

  • 質(zhì)粒制備。

測序結(jié)果1-2周
無細(xì)胞表達(dá)+純化
  • 用小麥芽胚蛋白表達(dá)體系進(jìn)行蛋白表達(dá),

  • 蛋白表達(dá)評估 (Western Blot) 。

表達(dá)評估報告1周
Pull Down
  • 細(xì)胞裂解,

  • 目的蛋白和總蛋白孵育,

  • 洗脫與目的蛋白結(jié)合的蛋白。

銀染結(jié)果1周
質(zhì)譜檢測
  • 將洗脫的蛋白進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。

質(zhì)譜結(jié)果2周



客戶提供材料交付結(jié)果

新鮮樣本(組織或者細(xì)胞):細(xì)胞數(shù)量>2.7ⅹ107;

組織樣本>3g

載體測序結(jié)果

實驗過程圖

質(zhì)譜結(jié)果
















我們可為您提供Halo Pull Down(蛋白之間的互作研究)技術(shù)服務(wù),歡迎咨詢!


更多技術(shù)服務(wù):

DNA親和純化測序(DAP-seq)

在全基因組水平上鑒定轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點,預(yù)測轉(zhuǎn)錄因子潛在的靶基因。

DAP-seq 技術(shù)的出現(xiàn),使轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的研究不再局限于生物物種,不再受抗體質(zhì)量的限制,進(jìn)一步拓展并加深了生命科學(xué)領(lǐng)域研究的廣度和深度。

DAP-seq與RNA-seq聯(lián)合分析

分析轉(zhuǎn)錄因子的靶基因在RNA-seq數(shù)據(jù)中的表達(dá)變化,深入挖掘DAP-seq和RNA-seq測序數(shù)據(jù),增加轉(zhuǎn)錄組測序的分析深度。

酵母單雜交技術(shù) (Yeast One-Hybrid)

確定已知 DNA 和蛋白質(zhì)之間是否存在相互作用。

篩選結(jié)合于目標(biāo)順式作用元件或其他短 DNA 序列的新蛋白。

鑒定蛋白結(jié)合 DNA 的結(jié)構(gòu)域,精準(zhǔn)定位與DNA 結(jié)合的蛋白序列。

重組蛋白表達(dá)

有大腸桿菌、酵母、昆蟲細(xì)胞、哺乳動物細(xì)胞4種蛋白表達(dá)系統(tǒng)可供選擇。


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