抗體/抗體片段抗原產(chǎn)生特異性和高效結(jié)合性，在生化、治療和診斷等領(lǐng)域發(fā)揮不可替代的作用。傳統(tǒng)生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤技術(shù)，由于其自身研發(fā)周期比較長，生產(chǎn)的成本相對較高，已經(jīng)成為大規(guī)模、快速生產(chǎn)抗體/抗體片段的瓶頸。近年來，隨著基因重組和生物工程技術(shù)的不斷進步，高通量篩選和大規(guī)模生產(chǎn)抗體/抗體片段成為現(xiàn)實。
抗原結(jié)合片段 （Fab） 是抗體上與抗原結(jié)合的區(qū)域。 它包含每條重鏈和輕鏈的一個恒定區(qū)和一個可變區(qū)。 只有重鏈和輕鏈的可變區(qū)融合在一起形成單鏈可變片段（scFv），其大小只有Fab片段的一半，但保留了原有的特異性。另一種小抗體片段，單域抗體，又稱域抗體、VHH、VNAR或sdAb，是一種由單個單體可變抗體結(jié)構(gòu)域組成的抗體片段，缺少常規(guī)的輕鏈和重鏈的CH結(jié)構(gòu)域。
泰克生物是一家專業(yè)的CRO服務(wù)提供商，能為我們的客戶提供高質(zhì)量的重組抗體表達服務(wù)，如scfv抗體片段、fab抗體片段、sdAb單域抗體、重鏈抗體等重組抗體構(gòu)建和表達服務(wù)。另外，泰克生物目前在建的5000平米的GMP研究中心，能夠為各類工業(yè)客戶提供批量的重組抗體生產(chǎn)服務(wù)。
█ 抗體片段特性
抗體類型 | 組分 | 分子量（kDa） | 化合價 | 半衰期（h） |
Fab | VH+CH1+VL+CL （輕重鏈利用二硫鍵連接） | 50-55 | 單體 | 12-20 |
scFv | VH+VL | 30 | 單體 | 2-4 |
sdAb | VHH | 15 | 單體 | 0.5 |
Fc融合抗體 | （抗體+CH2+CH3）*2 | / | 二聚體 | / |
di-scFv | scFv*2 | 60 | 二聚體 | 4-8 |
█ 抗體片段表達系統(tǒng)常用宿主
表達系統(tǒng) | 菌株/細胞 | 特點 |
E.coli | BL21（DE3） | Ion-ompT，有效防止重組蛋白在胞內(nèi)被水解 |
Rosetta | ||
哺乳動物細胞 | CHO-S | 是實驗室常用的細胞系，作為貼壁和懸浮培養(yǎng)生長良好，生產(chǎn)率高，是大規(guī)模培養(yǎng)和GMP程序的理想選擇；可進行許多翻譯后修飾以獲得生物仿制藥，顯示出的生物相容性和藥物活性；適用于無蛋白、無動物生產(chǎn)、無血清培養(yǎng)條件，并具有更好的穩(wěn)定性和安全性。 |
CHO-K1 | ||
Freestyle 293F | 是一類能夠在無血清中高表達蛋白的野生型293細胞系，可以高效表達蛋白。 | |
Expi 293F | 具有高度可轉(zhuǎn)染行，展示出較高的蛋白表達水平，相比標(biāo)準(zhǔn)的懸浮適應(yīng)293細胞，表現(xiàn)出更快速的細胞生長和更高的培養(yǎng)存活率。 |
█ 抗體片段高表達策略
優(yōu)化方式 | 特性 |
融合抗體 | Fab 基因表達時，5'端帶上細菌蛋白信號肽基因的Fd基因和L鏈基因，可在大腸桿菌細胞壁的周質(zhì)腔內(nèi)分泌型表達，形成完整的立體折疊。Fab片段保持了親本抗體的抗原結(jié)合特異性和生物學(xué)活性。Fd基因片段和L鏈基因可以分別構(gòu)建在兩個載體上，然后共轉(zhuǎn)染細胞，也可以構(gòu)建在一個載體上轉(zhuǎn)染細胞進行表達。 |
抗體序列本身的修飾 | 經(jīng)定點突變可以改變抗體在某些關(guān)鍵位點的氨基酸，從而優(yōu)化其穩(wěn)定性，增強與抗原的親和性，提高表達產(chǎn)量。 |
表達系統(tǒng)的選擇 | 應(yīng)考慮的因素有：實驗設(shè)備、需表達抗體毒性、所需營養(yǎng)物、是否需要抗體高產(chǎn)率、抗體純化工藝、生產(chǎn)成本、調(diào)控元件、生物安全方面等。 |
密碼子優(yōu)化 | 天然抗體/scFv來源于真核生物,其密碼子很可能不為E.coli所偏好，使用偏好密碼子能提高細胞對環(huán)境及抗體的適應(yīng)性,減少重組抗體的錯誤折疊率。 |
條件優(yōu)化 | 需要考慮的因素包括溫度、培養(yǎng)基配比、pH、培養(yǎng)時間及誘導(dǎo)條件等。 |
█ 抗體表達服務(wù)內(nèi)容
實驗內(nèi)容 | 交付 | 周期 |
基因合成＆載體構(gòu)建 | 1. 重組抗體 2. 表達載體 3. 克隆菌株 4. 實驗報告 | 6-8周 |
質(zhì)粒抽提 | ||
細胞轉(zhuǎn)染＆表達抗體 | ||
抗體純化（SDS-PAGE） |
█ 泰克可提供的服務(wù)
片段抗體構(gòu)建和生產(chǎn)服務(wù)
片段抗體包括Fab抗體、scFv和VHH抗體（駝源納米抗體）等?？蛻艨芍苯犹峁〧ab、scFv或VHH序列，交由泰克生物進行重組表達并獲得高純度產(chǎn)品。如客戶僅有靶抗原信息，則可委托泰克生物進行動物免疫并篩選scFv、VHH等抗體。
重組抗體293F/CHO細胞表達服務(wù)
全套Gibco無血清哺乳細胞培養(yǎng)，適用于科學(xué)家對天然構(gòu)象蛋白的體外重組表達需求，如糖基化修飾，磷酸化修飾等。為客戶提供滿足GMP-like體系，包括細胞種子庫來源文件記錄體系、細胞種子批檢定，動物源成分的質(zhì)控，標(biāo)準(zhǔn)化細胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)化操作流程，全套GE提供的純化填料和設(shè)備等準(zhǔn)則進行生產(chǎn)的重組蛋白。
█ 服務(wù)優(yōu)勢
? 詳細的實驗設(shè)計和論證：包含稀有密碼子分析，抗體序列分析，表達系統(tǒng)的選擇，表達載體構(gòu)建方案，抗體修飾等
? 多種標(biāo)記抗體表達：His標(biāo)簽融合表達，同位素標(biāo)記表達
? 多個種屬的重組抗體制備：包括人源，鼠源，兔源，羊源，犬源，駱駝源，羊駝源，牛源等
? 抗體修飾控制：糖基化修飾和磷酸化修飾多寡控制
? 多重表達模式：穩(wěn)定表達和瞬時表達
? 配套的哺乳體系高表達載體和各種規(guī)格的放大體系
? 低內(nèi)毒素水平：LAL檢測法<0.1EU/ug
? 完整的文件追溯體系，保證您的產(chǎn)品所有材料、試劑和制備信息可追溯
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