国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

官方微信|手機(jī)版

產(chǎn)品展廳

產(chǎn)品求購(gòu)企業(yè)資訊會(huì)展

發(fā)布詢(xún)價(jià)單

化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>生命科學(xué)儀器>分子生物學(xué)儀器>其它生物/生化分析儀> 目的基因亞克隆


上?;偕锟萍加邢薰境闪⒂?013年6月,位于上海周浦時(shí)代醫(yī)創(chuàng)園,是一家銳意進(jìn)取的生物高科技創(chuàng)新型企業(yè),集生物技術(shù)研發(fā)、支持和服務(wù)為一體,為生命科學(xué)領(lǐng)域的科研人員,臨床醫(yī)學(xué)人員等提供TA克隆,亞克隆,質(zhì)粒構(gòu)建,RNAi干擾,miRNA定量,熒光定量PCR,SNP分型,STR檢測(cè),基因編輯,基因敲除,動(dòng)物造模等相關(guān)的技術(shù)服務(wù)的同時(shí),我們也在不斷摸索,積極研發(fā)自己的試劑產(chǎn)品,如分子,蛋白,細(xì)胞等方面的常規(guī)試劑,提供給我們的敬愛(ài)的科研工作者,并且我們與國(guó)內(nèi)外具有競(jìng)爭(zhēng)力的耗材儀器廠家達(dá)成協(xié)議,保持長(zhǎng)期穩(wěn)定的合作,秉承在技術(shù)方面提供支持的同時(shí),也同樣提供國(guó)內(nèi)外優(yōu)質(zhì)的試劑,耗材,常規(guī)儀器、分析儀器,滿(mǎn)足客戶(hù)的不同需求,一站式的服務(wù)是我們經(jīng)營(yíng)的理念,我們將不斷提高技術(shù)人員的技術(shù)水平,銷(xiāo)售人員的業(yè)務(wù)能力,圓滿(mǎn)完成技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目及產(chǎn)品銷(xiāo)售,同時(shí),并為廣大的科研工作者提供可靠的產(chǎn)品和全面的技術(shù)服務(wù),用我們過(guò)硬的技術(shù),優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品,完善的服務(wù)獲得每個(gè)客戶(hù)信任,支持和厚愛(ài),最后感謝各位的支持和幫助。
公司技術(shù)平臺(tái)特色:
分子生物學(xué)技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目包括
TA克隆,亞克?。毁|(zhì)粒構(gòu)建,熒光定量PCR檢測(cè);RNAi干擾;miRNA檢測(cè);SNP分型;STR檢測(cè)等;文庫(kù)構(gòu)建;高通量測(cè)序。

蛋白組學(xué)技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目包括:
蛋白抽提,蛋白純化,WB,Elisa,免疫組化,質(zhì)譜鑒定,N端測(cè)序等。

細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目包括:
細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞轉(zhuǎn)染;慢病毒包裝;腺病毒包裝; 基因編輯;基因敲除;動(dòng)物造模等;

代理銷(xiāo)售產(chǎn)品:

儀器類(lèi):移液器:Eppendorf移液器、吉爾森移液器,銳寧移液器,大龍移液器,寶予德移液器

離心機(jī):Eppendorf離心機(jī),盧湘儀離心機(jī),蜀科離心機(jī),安亭離心機(jī),ABSON迷你離心機(jī)

PCR儀:賽洛捷克PCR儀,ABI普通PCR儀、ABI 7500/ 7500Fast實(shí)時(shí)定量PCR儀

Bio-rad產(chǎn)品:凝膠成像系統(tǒng)、Bio-rad電源,Bio-rad電泳槽、Bio-rad轉(zhuǎn)移槽,玻璃板

箱體產(chǎn)品:一恒培養(yǎng)箱、一恒干燥箱,一恒恒溫?fù)u床,安泰超凈臺(tái),中科美菱超低溫冰箱

試劑類(lèi):

gegenetech醫(yī)藥中間體全線產(chǎn)品:總代理

Abbkine全線產(chǎn)品:上海區(qū)域一級(jí)代理

MCE小分子抑制劑,激動(dòng)劑全線產(chǎn)品:上海區(qū)域一級(jí)代理

Bioteke核酸提取及分子試劑全線產(chǎn)品:上海區(qū)域一級(jí)代理

Thermo scientific部分產(chǎn)品:上海區(qū)域特約經(jīng)銷(xiāo)商

NEB全線產(chǎn)品:上海區(qū)域特約經(jīng)銷(xiāo)商

耗材類(lèi):

Axygen全線產(chǎn)品:全國(guó)特約經(jīng)銷(xiāo)商

Corning全線產(chǎn)品:全國(guó)特約經(jīng)銷(xiāo)商

BD 耗材產(chǎn)品:上海區(qū)域特約經(jīng)銷(xiāo)商

NEST耗材產(chǎn)品:上海區(qū)域特約經(jīng)銷(xiāo)商








分子,蛋白及細(xì)胞技術(shù)服務(wù),生物儀器,生物試劑,生物耗材

亞克隆

已經(jīng)獲得的目的DNA條帶進(jìn)行重新克隆,其目的在于對(duì)目的DNA進(jìn)行進(jìn)一步分析,或者進(jìn)行重組改造等。

亞克隆的基本過(guò)程包括:

(1)目的DNA條帶和載體的制備;(2)目的DNA條帶和載體的連接;(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化;(4)重組子篩選。

目的DNA條帶和載體的制備
    選擇適宜的限制性核酸內(nèi)切酶,消化已知目的DNA和載體,獲得線性DNA,用于重組。根據(jù)目的DNA和載體的具體情況,選擇一種或者兩種適當(dāng)?shù)南拗泼盖懈?,分別產(chǎn)生對(duì)稱(chēng)性粘性末端(用一種限制性?xún)?nèi)切酶進(jìn)行消化而產(chǎn)生帶有互補(bǔ)突出端)、不對(duì)稱(chēng)粘性末端(用兩種不同的限制性?xún)?nèi)切酶進(jìn)行消化而產(chǎn)生帶有非互補(bǔ)突出端)、平端。在亞克隆時(shí),*不對(duì)稱(chēng)相容末端連接,次選對(duì)稱(chēng)性粘性相容性末端連接,由于平末端連接效率較低,通常很少采用。但有時(shí)目的片段的末端與載體不匹配 ,一般先將不匹配末端補(bǔ)平,然后再以平末端連接。

利用T4 DNA連接酶進(jìn)行目的DNA條帶和載體的體外連接

外源DNA條帶末端性質(zhì)

連接要求

          連接結(jié)果

不對(duì)稱(chēng)粘性末端

兩種限制酶消化后,需純化載體以提高連接效率

載體與外源DNA連接處的限制酶切位點(diǎn)??杀A?;非重組克隆的背景較低;外源DNA可以定向插入到載體中。

對(duì)稱(chēng)性粘性末端

線形載體DNA常需磷酸酶脫磷處理

載體與外源DNA連接處的限制酶切位點(diǎn)??杀A?;重組質(zhì)粒會(huì)帶有外源DNA的串聯(lián)拷貝;外源DNA會(huì)以?xún)蓚€(gè)方向插入到載體中。

平端

要求高濃度的DNA和連接酶

載體與外源DNA連接處的限制酶切位點(diǎn)消失;重組質(zhì)粒會(huì)帶有外源DNA的串聯(lián)拷貝;非重組克隆的背景較高 。

連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
⑴ 取100μl貯存于-70℃鈣化菌,冰浴化開(kāi);
⑵ 加入適量連接產(chǎn)物(一般不超過(guò)10μl,輕輕混勻,冰浴20min;
⑶ 于42℃熱休克90s,迅速轉(zhuǎn)移至冰浴中,繼續(xù)冰浴2-3min;
⑷ 加入LB液體培養(yǎng)基200μl,于37℃緩搖孵育45min;
⑸ 將培養(yǎng)物適量涂于1.5%瓊脂LB平板(根據(jù)質(zhì)粒性質(zhì)添加抗生素或/和X-Gal/IPTG),待膠表面沒(méi)有液體流動(dòng)時(shí),37℃溫箱倒置培養(yǎng)12-16hr。

重組子的篩選
   根據(jù)載體的遺傳特征篩選重組子,如α-互補(bǔ)、抗生素基因等?,F(xiàn)在使用的許多載體都帶有一個(gè)大腸桿菌的DNA的短區(qū)段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的調(diào)控序列和前146個(gè)氨基酸的編碼信息。在這個(gè)編碼區(qū)中插入了一個(gè)多克隆位點(diǎn)(MCS),它并不破壞讀框,但可使少數(shù)幾個(gè)氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能,這種載體適用于可編碼β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主細(xì)胞。因此,宿主和質(zhì)粒編碼的片段雖都沒(méi)有酶活性,但它們同時(shí)存在時(shí),可形成具有酶學(xué)活性的蛋白質(zhì)。這樣,lacZ基因在缺少近操縱基因區(qū)段的宿主細(xì)胞與帶有完整近操縱基因區(qū)段的質(zhì)粒之間實(shí)現(xiàn)了互補(bǔ),稱(chēng)為α-互補(bǔ)。由α-互補(bǔ)而產(chǎn)生的LacZ 細(xì)菌在誘導(dǎo)劑IPTG的作用下,在生色底物X-Gal存在時(shí)產(chǎn)生藍(lán)色菌落,因而易于識(shí)別。然而,當(dāng)外源DNA插入到質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)后,幾乎不可避免地導(dǎo)致無(wú)α-互補(bǔ)能力的氨基端片段,使得帶有重組質(zhì)粒的細(xì)菌形成白色菌落。這種重組子的篩選,又稱(chēng)為藍(lán)白斑篩選。如用藍(lán)白斑篩選則經(jīng)連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化的鈣化菌平板37℃溫箱倒置培養(yǎng)12-16hr后,有重組質(zhì)粒的細(xì)菌形成白色菌落。

 

 

 

該廠商的其他產(chǎn)品



化工儀器網(wǎng)

采購(gòu)商登錄
記住賬號(hào)    找回密碼
沒(méi)有賬號(hào)?免費(fèi)注冊(cè)

提示

×

*您想獲取產(chǎn)品的資料:

以上可多選,勾選其他,可自行輸入要求

個(gè)人信息:

溫馨提示

該企業(yè)已關(guān)閉在線交流功能

临夏市| 宝丰县| 东乡族自治县| 体育| 淮北市| 克拉玛依市| 千阳县| 沾化县| 文水县| 古丈县| 延庆县| 习水县| 南投市| 新巴尔虎右旗| 绵阳市| 吉木萨尔县| 茶陵县| 巴中市| 永年县| 承德县| 搜索| 于田县| 巴青县| 小金县| 雅江县| 东明县| 齐齐哈尔市| 吉林市| 望都县| 和静县| 余姚市| 左权县| 阳朔县| 永新县| 忻州市| 莱西市| 彰化市| 宣城市| 云安县| 聂荣县| 新沂市|