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兔干擾素w（IFN-w）ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法，雙抗體夾心原理，是基于要測(cè)試的抗原具有二價(jià)以上的特性，能識(shí)別包被抗體，同時(shí)能識(shí)別檢測(cè)抗體，具體過(guò)程如下：
（1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體，洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)，并用無(wú)關(guān)蛋白封閉空余結(jié)合位點(diǎn)。
（2）加受檢標(biāo)本使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。
（3）加生物素標(biāo)記抗體，使固相免疫復(fù)合物上的抗原與生物素標(biāo)記抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的生物素標(biāo)記抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
（4）加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素，使生物素標(biāo)記抗體與辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)記物。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
（5）加入底物顯色，即可計(jì)算標(biāo)本濃度。
（6）注：一個(gè)抗體分子上可以標(biāo)記上若干個(gè)生物素分子，一個(gè)生物素分子可以結(jié)合一個(gè)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素，從而帶來(lái)了大量的辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合到抗體上，比傳統(tǒng)的直接辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體具有更高的敏感性和放大效應(yīng)。

兔干擾素w（IFN-w）ELISA試劑盒標(biāo)本收集注意事項(xiàng)

1. 收集血液的試管應(yīng)為一次性的無(wú)熱原，無(wú)內(nèi)毒素試管。
2. 血清和血漿避免使用溶血，高血脂標(biāo)本。
3. 標(biāo)本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。
4. 標(biāo)本收集后若不及時(shí)檢測(cè)，需按一次使用量分裝，凍存于-20℃，-80℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融。
5. 可根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋（建議做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù)） 。
6. 收集標(biāo)本，盡量做到雙份的用量，避免一次實(shí)驗(yàn)失敗，重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)標(biāo)本缺失，從而耽誤實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。
7. 收集標(biāo)本時(shí)，應(yīng)該做好防護(hù)措施（比如戴手套，口罩，護(hù)目鏡等），認(rèn)為所有標(biāo)本都具有一定的潛在危險(xiǎn)性。
8. 樣本處理應(yīng)該在生物安全柜里面，并且正確使用生物安全柜。

標(biāo)本處理辦法
1. 血清：將采集的全血靜置冰箱4℃，然后1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃（1-3個(gè)月）或-80℃（3-6個(gè)月）保存。
2. 血漿：用EDTA，枸櫞酸鈉，肝素等作為抗凝劑，加入血液混勻后，1000-3000rpm離
心10分鐘，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃（1-3個(gè)月）或-80℃（3-6個(gè)月）
保存。
3. 組織勻漿：切取組織塊，0.01MPBS中過(guò)洗一次；按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例，在冰水中勻漿。勻漿完成后，5000-10000rpm離心10分鐘，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃（1-3個(gè)月）或-80℃（3-6個(gè)月）保存。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃（1-3個(gè)月）或-80℃（3-6個(gè)月）保存。
5. 尿液，腹水，腦脊液等：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃（1-3個(gè)月）或-80℃3-6個(gè)月）保存。

操作程序總結(jié)

準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)90分鐘

洗板2次，加入生物素化抗體工作液，37℃反應(yīng)60分鐘

洗板3次，加入ABC工作液，37℃反應(yīng)30分鐘

洗板5次，加入TMB顯色液，37℃反應(yīng)

加入TMB終止液

10分鐘之內(nèi)酶標(biāo)儀測(cè)OD值

計(jì)算標(biāo)本待測(cè)因子含量

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