小鼠I型膠原C端肽(CTX-I)Elisa試劑盒

檢測(cè)原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗小鼠CTX-I抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品中的CTX-I會(huì)與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠CTX-I抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素?？剐∈驝TX-I抗體與結(jié)合在包被抗體上的小鼠CTX-I結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變黃。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，CTX-I濃度與OD₄₅₀值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中CTX-I的濃度。

標(biāo)本收集:

1. 血清：全血標(biāo)本于室溫放置2小時(shí)或4℃置夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。

2. 血漿：抗凝劑推薦使用EDTA.Na2，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)。避免使用溶血，高血脂標(biāo)本。

3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，以去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣本對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。zui后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測(cè)。

5. 其它生物標(biāo)本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)

6. 標(biāo)本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。

7. 標(biāo)本收集后若不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融，1-6月內(nèi)檢測(cè),4℃保存的應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

8. 如果您的樣本中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù))。

小鼠I型膠原C端肽(CTX-I)Elisa試劑盒

注意事項(xiàng)：

1. 保存：試劑盒中各試劑請(qǐng)按說明書提示合理存放。在儲(chǔ)存及溫育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染，否則可能會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。

1. 酶標(biāo)板：剛開啟的酶標(biāo)板孔中可能會(huì)有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
2. 加樣：加樣或加試劑時(shí)，*個(gè)孔與zui后一個(gè)孔的加樣時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)溫育”時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。每次的加樣時(shí)間控制在10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔。
3. 溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實(shí)驗(yàn)時(shí)必須給酶標(biāo)板覆膜；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)；嚴(yán)格遵守給定的溫育時(shí)間和溫度。
4. 洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在吸水紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水。在讀數(shù)前要注意清除底部殘留的液體和手指印，以免影響酶標(biāo)儀讀數(shù)。

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