人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞無動物源培養(yǎng)基
虔碧生物的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞無動物源培養(yǎng)基根據(jù)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的生長需要，培養(yǎng)基包含必需和非必需氨基酸、維生素、有機(jī)和無機(jī)化合物、激素、生長因子、微量礦物質(zhì)以及其他補(bǔ)給成分。非常適用于培養(yǎng)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，無病毒和支原體，性能穩(wěn)定，使用該培養(yǎng)基能使人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在理想營養(yǎng)平衡狀態(tài)下進(jìn)行多代擴(kuò)增而不發(fā)生分化（至少10代以內(nèi)）。

 產(chǎn)品內(nèi)容

★ 使用注意事項(xiàng)

1.在配制*培養(yǎng)基前，請把間充質(zhì)干細(xì)胞無動物源生長添加劑(MSCGS-xf)、青霉素-鏈霉素(P/S)放到2-8℃冰箱過YE解凍，然后加入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。

2.在使用*培養(yǎng)基前，需要把培養(yǎng)基放到37℃恒溫水浴中預(yù)熱，注意溫度不要超過37℃。

3.請把配制好的*培養(yǎng)基放在4℃冰箱避光保存，并盡量在一個(gè)月內(nèi)使用完。若培養(yǎng)基要分幾次使用，請將間充質(zhì)干細(xì)胞無動物源生長添加劑(MSCGS-xf)、青霉素-鏈霉素 (P/S)解凍按用量分裝后保存。

4.可不包被培養(yǎng)瓶，但配合貼壁材料Attachin（貨號BW110028）使用效果更佳。

★ 培養(yǎng)條件

37℃，5% CO2，無菌恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

★ 相關(guān)操作

人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇

1.把人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞無動物源培養(yǎng)基放入37℃水浴中預(yù)熱；
2.從液氮中取出人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞迅速放入37℃水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)孵育細(xì)胞）；
3.在超凈臺中加入5ml的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞無動物源培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清，加入5ml的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞無動物源培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到T-25培養(yǎng)瓶中（帶濾芯）；
5.將培養(yǎng)瓶置于37℃，5% CO2的無菌恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

6.第二天，用新鮮的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞無動物源培養(yǎng)基給細(xì)胞換液。

人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞傳代培養(yǎng)

1.在顯微鏡下觀察細(xì)胞（細(xì)胞生長在人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞無動物源培養(yǎng)基中，且是次傳代），當(dāng)細(xì)胞融合度超過80%時(shí)，即可傳代；

2.37℃水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.在超凈臺中，棄掉T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，加入2ml PBS清洗，再加入1ml 0.25%胰酶-EDTA消化細(xì)胞；

4.在顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓，有細(xì)胞開始脫離瓶壁時(shí)，即可加入5ml人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞無動物源培養(yǎng)基終止消化；

5.用移液器輕輕吹打瓶壁上剩余的細(xì)胞，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞吹散；

6.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15ml離心管中，1000rpm離心5min；

7.棄上清，加入15-20ml的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞無動物源培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T-75細(xì)胞培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例傳到 T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。確保細(xì)胞貼壁后融合度在25-50%之間，細(xì)胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25 瓶），混合細(xì)胞懸液，確保細(xì)胞均勻分布；

8.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于37℃，5% CO2的無菌恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

9.每兩天用新鮮、預(yù)熱的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞無動物源培養(yǎng)基進(jìn)行換液。

人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞凍存

人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞凍存可用百恩維的“無DMSO無動物源細(xì)胞凍存液”,具體操作如下。

1. 細(xì)胞消化和計(jì)數(shù)，用胰酶對待凍存的細(xì)胞進(jìn)行消化，并對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

2. 1000rpm離心5分鐘，去掉上清。

3. 根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)的情況，加入適量的凍存液，使細(xì)胞密度在1×106/ml左右（或根據(jù)自己希望達(dá)到的細(xì)胞密度）。

4. 輕輕地重懸細(xì)胞（務(wù)必重懸均勻），將重懸的細(xì)胞按等份加入到滅菌的凍存管（需提前做好標(biāo)記或者貼上標(biāo)簽）中，旋緊凍存管蓋。

5. 將凍存管放入程序降溫凍存盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃。

6. 第二天將細(xì)胞從-80℃轉(zhuǎn)移到液氮中。

注：如客戶用自己配制的凍存液凍存細(xì)胞，請避免用甘油作為保護(hù)劑。

虔碧生物科技（上海）有限公司

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