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產(chǎn)品名稱：MS1細(xì)胞

細(xì)胞來(lái)源：小鼠胰島內(nèi)皮

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮樣

培養(yǎng)基：DMEM 95%, Fetal Bovine Serum 5%

培養(yǎng)條件：37℃ 5% CO2

消化條件：0.25% (w/v) Trypsin-0.53mM EDTA 溶液，靜止消化 5-10min

消化比例：1：4-1：8

換液時(shí)間：2-3 天換液一次

凍存液比例：85%培養(yǎng)基，10%FBS, 5% (v/v) DMSO

凍存密度：1-3 ×10^6/管，液氮保存

MS1細(xì)胞|慧穎科研用|小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞株 全國(guó)各地均可發(fā)貨，全國(guó)統(tǒng)一價(jià)格

產(chǎn)品名稱：MS1細(xì)胞

規(guī)格：70%-80%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細(xì)胞一瓶

特點(diǎn)：細(xì)胞代數(shù)為3-5代左右

包裝：內(nèi)層無(wú)菌自封袋；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說(shuō)明書(shū)

細(xì)胞來(lái)源：ATCC

貨期：1-2周

運(yùn)輸方式：快遞運(yùn)輸

售后：收到細(xì)胞后7天，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問(wèn)題（如污染，死亡，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí)，應(yīng)出具書(shū)面質(zhì)量問(wèn)題報(bào)告并及時(shí)傳真或致銷售人員，我們將盡快為您解決。

MS1細(xì)胞|慧穎科研用|小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞株細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題分析

細(xì)胞培養(yǎng)

1、冷凍管應(yīng)如何解凍？

取出冷凍管后， 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍， 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化， 并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿， 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)， 必須注意安全， 預(yù)防冷凍管之爆裂。

2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)， 是否應(yīng)馬上去除DMSO？

除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO 敏感之細(xì)胞外， 絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞）， 在解凍之后， 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題。

3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？

不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基， 細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng)， 造成細(xì)胞無(wú)法存活。

4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？

不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源， 所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清， 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。

5、何謂FBS, FCS, CS, HS ?

FBS （fetal bovine serum） 和FCS （fetal calf serum） 是相同的意思， 兩者都是指胎牛血清， FCS 乃錯(cuò)誤的使用字眼， 請(qǐng)不要再使用。CS （calf serum） 則是指小牛血清。HS （horseserum） 則是指馬血清。

6、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5 % 或10% CO2？或根本沒(méi)有影響？

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng)， 而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2 濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10 % CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時(shí)， 則應(yīng)使用5 % CO2 培養(yǎng)細(xì)胞。

7、何時(shí)須更換培養(yǎng)基？

視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定， 或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。

8、培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？

除于特殊篩選系統(tǒng)中外， 一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下， 培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。

9、附著性細(xì)胞繼代時(shí)所使用之trypsin-EDTA 濃度？應(yīng)如何處理？

一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中， 保存于–20 ℃，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin 之活性降低， 并可減少污染之機(jī)會(huì)。

10、懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理？

一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中， 稀釋細(xì)胞濃度即可， 若培養(yǎng)液太多時(shí)， 可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高， 直到無(wú)法容納為止。分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶， 加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度， 重復(fù)前述步驟即可。

11、欲將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來(lái)，其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速？

欲回收動(dòng)物細(xì)胞， 其離心速率一般為300xg （約1,000rpm），5 - 10 分鐘， 過(guò)高之轉(zhuǎn)速， 將造成細(xì)胞死亡。

12、細(xì)胞之接種密度為何？

依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤(pán)之比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)之一重要原因。

13、細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何？

動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)zui常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5 - 10 %DMSO （dimethyl sulfoxide） 和90 - 95 % 原來(lái)細(xì)胞生長(zhǎng)用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意：由于DMSO 稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能， 故不可將DMSO 直接加入細(xì)胞液中， 必須使用前先行配制完成。

14、DMSO 之等級(jí)和無(wú)菌過(guò)濾之方式為何？

冷凍保存使用之DMSO 等級(jí)， 必須為T(mén)issue culture grade之DMSO （如Sigma D2650）， 其本身即為無(wú)菌狀況， *次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中， 保存于4°C， 避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO 之裂解而釋出有害物質(zhì)， 并可減少污

客戶問(wèn)題1：

剛剛收到細(xì)胞，貼壁少，密度低，狀態(tài)不好

回答1：

因?yàn)檫\(yùn)輸過(guò)程的影響，細(xì)胞出現(xiàn)貼壁松動(dòng)、脫落，是正常的。處理建議：把細(xì)胞放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)，更換15%血清，脫落下來(lái)的細(xì)胞離心后種在新的培養(yǎng)瓶里面，也是用15%血清，一般養(yǎng)3-4天左右，傳1-2代后，細(xì)胞即可逐漸恢復(fù)。

客戶問(wèn)題2：

消化傳代后，細(xì)胞死亡多，不貼壁

回答2：

這種情況，基本上是客戶在消化的時(shí)候，胰酶消化過(guò)度，造成細(xì)胞較嚴(yán)重的損傷。處理建議：根據(jù)胰酶實(shí)際使用效果，摸索一個(gè)*消化時(shí)間，嚴(yán)控消化過(guò)度；如果已經(jīng)操作造成消化過(guò)度，把血清調(diào)高到15%，讓存留的貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)起來(lái)，期間不要頻繁換液，維持在3-4天更換一次培養(yǎng)基即可，等細(xì)胞密度超過(guò)50%以后，再隔天換液

客戶問(wèn)題3：

細(xì)胞培養(yǎng)中有黑點(diǎn)或者亮圓點(diǎn)

回答3：

要客戶首先排除是否污染，如果這些黑點(diǎn)或者亮點(diǎn)是污染物，那么培養(yǎng)基會(huì)在1-2天內(nèi)變渾濁，同時(shí)鏡下可觀察到這些黑點(diǎn)或者亮點(diǎn)呈爆發(fā)式生長(zhǎng)。如果培養(yǎng)基不會(huì)渾濁排除污染，這些黑點(diǎn)就是細(xì)胞死亡后的碎片殘?jiān)肞BS可以把大部分清洗掉。如果PBS清洗后還是有較多附著在瓶底的碎

收到細(xì)胞株應(yīng)及時(shí)查看外包裝有無(wú)破損，鏡下觀察有異常及時(shí)拍照發(fā)給相關(guān)負(fù)責(zé)人以便及時(shí)的幫您處理。

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