來源與構(gòu)建：該細(xì)胞系以 CHO-K1 細(xì)胞為親本（CHO 細(xì)胞的經(jīng)典亞株，源自中國倉鼠卵巢組織），通過慢病毒載體介導(dǎo)將 CAF13 基因?qū)爰?xì)胞基因組，經(jīng) G418 抗性篩選及單克隆純化獲得均一細(xì)胞群體?！癈AF13” 明確標(biāo)識(shí)其表達(dá)的靶蛋白，確保細(xì)胞系功能的特異性與可追溯性。構(gòu)建過程中采用 CMV 強(qiáng)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng) CAF13 基因表達(dá)，顯著提升蛋白合成效率，經(jīng)多輪篩選后獲得表達(dá)穩(wěn)定的單克隆細(xì)胞株。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長，細(xì)胞呈多邊形，排列緊密，形態(tài)與親本 CHO-K1 細(xì)胞一致，無明顯形態(tài)變異。在 37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 24-32 小時(shí)，可適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 F12K 培養(yǎng)基，兼容無血清培養(yǎng)體系，傳代 60 次以上仍能維持穩(wěn)定的生長狀態(tài)與形態(tài)特征，貼壁能力強(qiáng)，為長期實(shí)驗(yàn)與規(guī)?；囵B(yǎng)提供保障。

表達(dá)特征：CAF13 蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)（部分亞型可定位于細(xì)胞核），表達(dá)量達(dá) 8-12μg/10?細(xì)胞 / 24 小時(shí)（通過 Western blot 定量），長期傳代（＞50 代）后表達(dá)量波動(dòng)＜8%，遠(yuǎn)低于普通瞬時(shí)轉(zhuǎn)染系統(tǒng)的變異率。該蛋白保留天然構(gòu)象與生物學(xué)活性，能與特異性配體或抗體結(jié)合，其翻譯后修飾（如磷酸化、乙酰化）與體內(nèi)天然蛋白一致，為功能研究奠定基礎(chǔ)。

優(yōu)勢(shì)：CAF13 蛋白表達(dá)穩(wěn)定，長期傳代后功能無明顯衰減，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性優(yōu)于瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)；遺傳背景清晰，與 CHO-K1 細(xì)胞高度同源，便于對(duì)比分析 CAF13 蛋白的特異性作用；培養(yǎng)適應(yīng)性強(qiáng)，可通過懸浮馴化實(shí)現(xiàn)生物反應(yīng)器規(guī)?；囵B(yǎng)，滿足大量蛋白制備需求；蛋白翻譯后修飾接近天然狀態(tài)，生物活性保留完整，適合功能研究與應(yīng)用開發(fā)。

局限性：需持續(xù)維持抗性篩選壓力（如 G418），增加培養(yǎng)成本；部分 CAF13 蛋白的細(xì)胞內(nèi)定位可能受培養(yǎng)條件影響，需優(yōu)化檢測(cè)方法；與人類細(xì)胞相比，蛋白修飾存在細(xì)微差異，結(jié)果外推至人體需結(jié)合人源模型驗(yàn)證。

培養(yǎng)條件：基礎(chǔ)培養(yǎng)基為含 10% 胎牛血清的 F12K 培養(yǎng)基，添加 G418（400μg/mL）維持抗性篩選，同時(shí)加入谷an酰胺與非必需氨基酸促進(jìn)細(xì)胞代謝。傳代時(shí)控制融合度在 70%-80%，采用 0.25% yi酶 - EDTA 消化，避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞活性下降。懸浮培養(yǎng)可采用無血清培養(yǎng)基逐步馴化，最終細(xì)胞密度可達(dá) 2.5×10?個(gè) /mL，蛋白表達(dá)量無明顯降低。

蛋白檢測(cè)與質(zhì)控：通過 Western blot 驗(yàn)證 CAF13 蛋白分子量及表達(dá)量，免疫熒光檢測(cè)其細(xì)胞內(nèi)定位；定期進(jìn)行支原體檢測(cè)與 STR 鑒定，確保細(xì)胞純度與遺傳穩(wěn)定性。凍存時(shí)使用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基，液氮保存，復(fù)蘇后傳代 2-3 次待狀態(tài)穩(wěn)定后再用于實(shí)驗(yàn)，保證結(jié)果可靠性。