BY-1509 RNH/HL-034兔正常肝細(xì)胞系
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- 型號(hào) BY-1509
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- 更新時(shí)間 2025/8/5 14:22:33
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RNH/HL-034兔正常肝細(xì)胞系
RNH/HL-034兔正常肝細(xì)胞系作為兔源肝臟研究的標(biāo)準(zhǔn)模型，以其純正的正常肝細(xì)胞特性和穩(wěn)定的肝功能表現(xiàn)，在兔肝臟生理機(jī)制解析、肝病模型對(duì)照及藥物肝毒性評(píng)價(jià)中具有不可替代的地位。與 LC-L3 豹貓肺細(xì)胞系的肺部研究定位不同，該細(xì)胞系源自家兔健康肝臟的實(shí)質(zhì)區(qū)域，為探索兔肝臟的獨(dú)te生理功能及疾病發(fā)生機(jī)制提供了專屬實(shí)驗(yàn)載體。
細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
該細(xì)胞系源自 SPF 級(jí)健康家兔的肝小葉實(shí)質(zhì)組織，通過(guò)兩步膠原酶灌流法獲得原代肝細(xì)胞后，經(jīng)肝細(xì)胞特異性標(biāo)志物 ASGPR（去唾液酸糖蛋白受體）免疫磁珠分選純化建立。其核心特征是高純度保留肝細(xì)胞的功能表型：白蛋白（ALB）陽(yáng)性率達(dá) 96%，細(xì)胞色素 P450 酶系（CYP3A4）表達(dá)率 95%，而膽管上皮標(biāo)志物 CK19 陽(yáng)性率低于 1%，細(xì)胞純度較傳統(tǒng)密度梯度離心法提升 58%。
細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)典型的多邊形上皮樣，胞體直徑約 22-26μm，細(xì)胞核大而圓（核質(zhì)比約 1:3.5），可見 2-3 個(gè)核仁，與體內(nèi)肝細(xì)胞的形態(tài)吻合度達(dá) 91%。培養(yǎng)體系需嚴(yán)格控制：含 10% 胎牛血清的 Williams'E 培養(yǎng)基（添加 20ng/mL 肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子和 1μmol/L 地塞mi松），在 37℃、5% CO?環(huán)境下貼壁生長(zhǎng)，倍增時(shí)間約 54-58 小時(shí)（長(zhǎng)于 LC-L3）。傳代需在細(xì)胞融合度達(dá) 60%-70% 時(shí)進(jìn)行，采用 1:2 比例接種，過(guò)度密集會(huì)導(dǎo)致肝細(xì)胞功能衰退（白蛋白分泌量下降 40%）。
功能驗(yàn)證顯示，該細(xì)胞系保留關(guān)鍵肝功能：尿素合成速率達(dá) 12μmol/(10?細(xì)胞?24h)，糖原合成能力是成纖維細(xì)胞的 8.3 倍，連續(xù)傳代 15 次后仍保持核型穩(wěn)定（44 條染色體，無(wú)異常核型），無(wú)支原體及兔源病原體污染。
核心應(yīng)用領(lǐng)域
兔肝臟生理功能研究
RNH/HL-034 細(xì)胞系是解析兔肝臟te有代謝功能的理想模型。在兔脂類代謝研究中，該細(xì)胞系表現(xiàn)出典型的高膽gu醇合成特性，HMG-CoA 還原酶活性是大鼠肝細(xì)胞系的 2.3 倍，且對(duì)兔源載脂蛋白 E 的響應(yīng)性顯著高于其他物種肝細(xì)胞（差異達(dá) 3.1 倍）。通過(guò)該模型發(fā)現(xiàn)，兔肝臟中獨(dú)te的膽汁酸合成途徑（以膽酸為主要產(chǎn)物）受 FXR 受體調(diào)控，為理解兔肝臟代謝特異性提供了直接證據(jù)。
兔肝病研究的陰性對(duì)照
在兔肝纖維化模型中，該細(xì)胞系作為正常對(duì)照的價(jià)值尤為突出。對(duì)比 RNH/HL-034 與肝纖維化細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)，后者的 α- 平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)量是正常細(xì)胞的 7.8 倍，膠原蛋白分泌量增加 6.5 倍，而 LC-L3 因器官特異性差異，wan全無(wú)法作為肝臟研究的對(duì)照。在藥物性肝損傷研究中，該細(xì)胞系可清晰反映正常肝細(xì)胞與損傷細(xì)胞的差異：損傷模型細(xì)胞的 ALT 活性是其 5.2 倍，而 LC-L3 的基礎(chǔ) ALT 水平僅為其 1/8，不適合作為對(duì)照基準(zhǔn)。
藥物肝毒性的特異性評(píng)價(jià)
該細(xì)胞系為兔用藥物的肝毒性測(cè)試提供了專屬平臺(tái)。在兔專用驅(qū)蟲藥的安全性評(píng)價(jià)中，RNH/HL-034 細(xì)胞系的半數(shù)中毒濃度（TC??）與家兔體內(nèi)肝損傷程度的相關(guān)性達(dá) 0.92，顯著高于人源肝細(xì)胞系（0.67）。某新型兔用抗生素測(cè)試顯示，當(dāng)濃度超過(guò) 50μg/mL 時(shí)，該細(xì)胞系的 CYP3A4 活性下降 55%，白蛋白合成減少 42%，提示可能存在肝毒性風(fēng)險(xiǎn)，為臨床劑量設(shè)計(jì)提供了關(guān)鍵參考。
與 LC-L3 細(xì)胞系的差異及協(xié)同
兩者雖同屬哺乳動(dòng)物正常細(xì)胞系，但功能定位截然不同：RNH/HL-034 專注于肝臟代謝與解毒功能研究，而 LC-L3 聚焦肺部氣體交換與屏障功能；在兔全身性感染研究中（如兔出血癥病毒感染），兩者可分別模擬肝臟壞死和肺部出血的病理過(guò)程，形成跨器官的疾病模型體系。
優(yōu)勢(shì)與局限性
優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在：高度模擬兔肝細(xì)胞的體內(nèi)代謝特性，尤其適合兔特異性肝功能研究；作為標(biāo)準(zhǔn)化正常對(duì)照，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)重復(fù)性優(yōu)于原代肝細(xì)胞（CV 值＜8%）；對(duì)兔源藥物的毒性響應(yīng)更接近在體狀態(tài)。局限性包括：增殖能力有限（傳代上限 15 代，低于 LC-L3）；培養(yǎng)成本較高（專用培養(yǎng)基價(jià)格是常規(guī)培養(yǎng)基的 3 倍）；對(duì)非肝靶向病毒的敏感性低（如兔痘病毒感染率僅為腎細(xì)胞系的 12%）。
研究意義與展望
該細(xì)胞系的建立填bu了兔正常肝細(xì)胞模型的空白，目前已被用于 5 種兔專用藥物的肝毒性評(píng)價(jià)及兔肝炎病毒的宿主范圍研究。未來(lái)通過(guò)微流控芯片技術(shù)構(gòu)建 “肝小葉芯片”（目前單層培養(yǎng)的肝功能模擬度約 65%），有望更精準(zhǔn)重現(xiàn)兔肝的小葉結(jié)構(gòu)與代謝分區(qū)。作為兔肝臟研究的 “黃金標(biāo)準(zhǔn)”，它將推動(dòng)兔病模型研究從形態(tài)觀察向功能解析的深入，為兔用藥物研發(fā)和比較醫(yī)學(xué)研究提供可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
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