BY-0617 DF-1雞胚成纖維細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) BY-0617
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- 更新時(shí)間 2025/8/8 7:05:48
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DF-1雞胚成纖維細(xì)胞系
在禽類細(xì)胞模型研究領(lǐng)域，DF-1雞胚成纖維細(xì)胞系以其獨(dú)te的生物學(xué)特性，成為病毒培養(yǎng)、疫苗研發(fā)及基因功能研究的核心工具。與哺乳動(dòng)物來源的平滑肌細(xì)胞系（如 CCC-SMC-2）不同，該細(xì)胞系源自禽類胚胎組織，在禽類病毒宿主 - 病原體相互作用研究中具有不可替代的優(yōu)勢。
細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
DF-1 細(xì)胞系建立于 1996 年，源自 10 日齡 SPF（無特定病原體）雞胚的肢芽與軀干組織，通過原代培養(yǎng)結(jié)合自發(fā)性永生化篩選獲得（未經(jīng)過外源性永生化基因轉(zhuǎn)染）。這一特性使其保留了原代雞胚成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特征，同時(shí)具備無限增殖能力（連續(xù)傳代超過 200 次仍保持穩(wěn)定表型），解決了原代雞胚成纖維細(xì)胞傳代受限（僅 5-7 代）的難題。
細(xì)胞形態(tài)呈典型的長梭形成纖維樣，胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核呈橢圓形（核質(zhì)比約 1:4.8），較 CCC-SMC-2 細(xì)胞更為纖細(xì)。在培養(yǎng)特性上，DF-1 對營養(yǎng)條件要求較低，最適體系為含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基（添加 1% 雙抗），在 37℃、5% CO?環(huán)境下貼壁生長，倍增時(shí)間約 22-24 小時(shí)（顯著短于 CCC-SMC-2 的 56 小時(shí)）。細(xì)胞融合度達(dá) 80%-90% 時(shí)需傳代，推薦比例 1:4，過度密集會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)纖維化（波形蛋白表達(dá)量上升 2.3 倍）。
功能鑒定顯示，DF-1 高表達(dá)成纖維細(xì)胞標(biāo)志物波形蛋白（Vimentin，99% 陽性），低表達(dá)上皮細(xì)胞標(biāo)志物細(xì)胞角蛋白（＜5%），且無內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒污染（經(jīng) RT-PCR 與病毒分離實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證），這一特性使其成為生物安全級疫苗生產(chǎn)的關(guān)鍵細(xì)胞基質(zhì)。
核心應(yīng)用領(lǐng)域
病毒培養(yǎng)與分離
DF-1 對禽類病毒具有廣譜敏感性，是禽liu感病毒（H5N1、H9N2）、新城疫病毒、馬立克氏病毒等的理想宿主細(xì)胞。與傳統(tǒng)雞胚培養(yǎng)相比，該細(xì)胞系可通過定量 PCR 與空斑實(shí)驗(yàn)精確測定病毒滴度（如 H9N2 病毒滴度可達(dá) 10???PFU/mL），且能穩(wěn)定傳代病毒超過 15 次（雞胚培養(yǎng)僅能傳代 5-6 次）。研究顯示，DF-1 禽liu感病毒后，48 小時(shí)內(nèi)即可觀察到明顯的細(xì)胞病變（CPE），表現(xiàn)為細(xì)胞融合、脫落（病變率達(dá) 85%），而 CCC-SMC-2 等哺乳動(dòng)物細(xì)胞對禽類病毒幾乎無敏感性。
疫苗研發(fā)與生產(chǎn)
作為 WHO 推薦的禽類疫苗生產(chǎn)細(xì)胞系，DF-1 已廣泛應(yīng)用于滅活疫苗與減毒活疫苗研發(fā)。在禽liu感疫苗生產(chǎn)中，該細(xì)胞系的病毒增殖效率是 VERO 細(xì)胞的 3.8 倍，且表達(dá)的病毒血凝素（HA）蛋白活性更高（血凝效價(jià)達(dá) 1:128）。2023 年某禽liu感疫苗候選株通過 DF-1 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，疫苗效價(jià)較雞胚培養(yǎng)提升 40%，生產(chǎn)成本降低 25%。
基因功能研究
DF-1 的無限增殖能力使其成為禽類基因編輯的理想模型。通過 CRISPR/Cas9 技術(shù)敲除 IFN-α 基因后，細(xì)胞對新城疫病毒的敏感性提升 5.2 倍（病毒滴度從 10??1 升至 10???），證實(shí)干擾素通路在抗病毒免疫中的核心作用。此外，該細(xì)胞系可高效表達(dá)外源基因（轉(zhuǎn)染效率達(dá) 65%），常用于禽類病毒蛋白的表達(dá)與純化（如禽liu感病毒 NP 蛋白產(chǎn)量達(dá) 15mg/L）。
優(yōu)勢與局限性
與其他禽類細(xì)胞系相比，DF-1 的核心優(yōu)勢在于：1）無內(nèi)源性病毒污染，生物安全性高；2）病毒敏感性強(qiáng)，適用于多種禽類病毒研究；3）培養(yǎng)成本低，易于規(guī)模化擴(kuò)增。其局限性在于對哺乳動(dòng)物病毒敏感性低（如豬瘟病毒無法在 DF-1 中增殖），且長期傳代（＞150 次）可能出現(xiàn)染色體不穩(wěn)定（畸變率升至 3.2%）。
研究意義與展望
DF-1 雞胚成纖維細(xì)胞系的建立，推動(dòng)了禽類病毒學(xué)研究從傳統(tǒng)雞胚培養(yǎng)向細(xì)胞水平的轉(zhuǎn)變。與 CCC-SMC-2 等專注于特定病理過程的細(xì)胞系不同，DF-1 以其廣譜適用性成為禽類生物醫(yī)學(xué)研究的 “多面手”。未來，通過基因編輯技術(shù)改造 DF-1（如敲除病毒受體基因），有望構(gòu)建耐藥性病毒研究模型；結(jié)合 3D 培養(yǎng)技術(shù)，可進(jìn)一步提升疫苗生產(chǎn)效率（初步實(shí)驗(yàn)顯示 3D 微球培養(yǎng)的病毒產(chǎn)量是平面培養(yǎng)的 2.1 倍）。作為禽類細(xì)胞模型的標(biāo)gan，DF-1 正為動(dòng)物疫病防控與公共衛(wèi)生安全提供關(guān)鍵技術(shù)支撐。
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