BY-0477 COS-7非洲綠猴SV40病毒轉(zhuǎn)化的腎細胞系
- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-0477
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/8/8 7:31:23
- 訪問次數(shù) 281
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細胞株和菌株、胎牛血清、標(biāo)準(zhǔn)品和對照品、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細胞因子、技術(shù)服務(wù)、實驗耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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來源與建立背景
形態(tài)與生長特征
功能特性
SV40 大 T 抗原表達：持續(xù)高表達 SV40 病毒大 T 抗原（陽性率 100%），該蛋白可與 p53、Rb 等抑癌蛋白結(jié)合并使其失活，同時能與含 SV40 復(fù)制起點的質(zhì)粒結(jié)合，啟動質(zhì)粒在細胞內(nèi)的自主復(fù)制，使外源基因拷貝數(shù)提升 10-100 倍，表達量可達細胞總蛋白的 10%。
轉(zhuǎn)染效率：脂質(zhì)體介導(dǎo)的瞬時轉(zhuǎn)染效率達 80% 以上，電穿孔轉(zhuǎn)染效率超 90%，顯著高于同類靈長類細胞系；對多種表達載體兼容，尤其適合含 SV40 啟動子的質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染后 48-72 小時即可檢測到高豐度外源蛋白。
病毒支持能力：可支持多種 DNA 病毒（如腺病毒、皰疹病毒）的復(fù)制，對逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝效率高，可生產(chǎn)滴度達 10? TU/mL 的重組病毒，為基因遞送系統(tǒng)研究提供關(guān)鍵工具。
基因功能與蛋白質(zhì)相互作用研究
瞬時表達平臺：作為外源基因瞬時表達的 “黃金標(biāo)準(zhǔn)”，COS-7 細胞被廣泛用于驗證基因編碼產(chǎn)物的功能。例如，通過轉(zhuǎn)染熒光標(biāo)記的膜蛋白基因，可在 48 小時內(nèi)觀察到蛋白在細胞膜上的定位，共聚焦顯微鏡成像分辨率高，背景熒光低，結(jié)果重復(fù)性達 95%。
蛋白質(zhì)相互作用篩選：利用其高效表達特性，通過免疫共沉淀（Co-IP）技術(shù)研究蛋白質(zhì)相互作用，可在 1 周內(nèi)完成從轉(zhuǎn)染到結(jié)果驗證的流程。研究發(fā)現(xiàn)，某腫瘤相關(guān)蛋白與轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合強度在 COS-7 細胞中與體內(nèi)實驗一致性達 85%，顯著高于大腸桿菌表達系統(tǒng)。
病毒學(xué)研究與疫苗開發(fā)
病毒復(fù)制機制解析：因表達 SV40 大 T 抗原，可用于研究依賴該蛋白的病毒復(fù)制過程，如多瘤病毒的 DNA 復(fù)制周期；同時可作為病毒滴度測定的標(biāo)準(zhǔn)細胞系，腺病毒 TCID??檢測的變異系數(shù)＜5%，結(jié)果穩(wěn)定可靠。
重組疫苗生產(chǎn)：在基因工程疫苗研發(fā)中，COS-7 細胞可快速生產(chǎn)病毒樣顆粒（VLPs），如人乳頭瘤病毒（HPV）VLPs 的產(chǎn)量達 50μg/10?細胞，純度超 90%，免疫原性與昆蟲細胞表達系統(tǒng)相當(dāng)，但生產(chǎn)周期縮短 30%。
重組蛋白生產(chǎn)與藥物篩選
功能蛋白制備：適用于生產(chǎn)需翻譯后修飾的重組蛋白，如糖基化酶、膜受體等。某重組ren干擾素在 COS-7 細胞中的表達量達 200ng/mL，比原核表達系統(tǒng)的活性高 10 倍，且糖基化修飾與天然蛋白一致。
藥物靶點驗證：通過轉(zhuǎn)染疾病相關(guān)突變基因，構(gòu)建藥物篩選模型。在阿爾茨海默病研究中，轉(zhuǎn)染突變型 APP 基因的 COS-7 細胞可分泌 Aβ42 肽，篩選出的抑制劑可使 Aβ42 水平下降 60%，動物實驗顯示其能減少腦內(nèi)斑塊形成。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基：DMEM 高糖培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、100U/mL 青mei素、100μg/mL 鏈mei素，pH 維持在 7.2-7.4，無需添加生長因子即可維持良好生長狀態(tài)；血清濃度可降至 5% 以減少背景干擾（如用于熒光蛋白觀察）。
傳代流程：當(dāng)細胞融合度達 80% 時，用 0.25% yi酶 - EDTA 消化 3 分鐘，終止消化后按 1:8 比例接種，離心速度 1200rpm，24 小時貼壁率超 95%，避免過度融合（＞90% 會導(dǎo)致細胞形態(tài)改變）。
凍存保護：采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基，細胞密度 2×10?個 /mL，程序降溫至 - 80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮，復(fù)蘇時 37℃水浴 1 分鐘，直接接種無需離心，存活率可達 90%。
轉(zhuǎn)染與功能實驗操作
脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染步驟：細胞以 5×10?個 / 孔接種 6 孔板，培養(yǎng) 24 小時至融合度 60%-70%，將 2μg 質(zhì)粒與 5μL 脂質(zhì)體混合，室溫孵育 20 分鐘后加入細胞，6 小時后換液，48 小時檢測表達效率，轉(zhuǎn)染效率穩(wěn)定在 80% 左右。
病毒滴度測定：將重組病毒 10 倍梯度稀釋后感染 COS-7 細胞（3×10?個 / 孔，96 孔板），37℃培養(yǎng) 72 小時，通過熒光計數(shù)或細胞病變法計算滴度，每稀釋度設(shè) 8 復(fù)孔以保證結(jié)果可靠性。
優(yōu)勢：
轉(zhuǎn)染效率卓yue：瞬時轉(zhuǎn)染效率居靈長類細胞系首wei，且對多種載體兼容，是基因功能研究的shou選模型。
培養(yǎng)簡便：適應(yīng)多種培養(yǎng)基，傳代操作簡單，成本低于其他永生化靈長類細胞系，適合大規(guī)模實驗。
功能穩(wěn)定性：連續(xù)傳代后仍保持高效表達能力，實驗結(jié)果重復(fù)性高（變異系數(shù)＜5%），被全球?qū)嶒炇覐V泛驗證。
局限性：
永生化特征：因 SV40 轉(zhuǎn)化導(dǎo)致細胞增殖異常，可能丟失部分正常腎細胞功能，不適合研究細胞周期調(diào)控或抑癌基因功能。
基因組不穩(wěn)定性：染色體數(shù)目異常，可能影響長期實驗的一致性，建議短期（＜20 代）內(nèi)使用。
翻譯后修飾差異：雖然優(yōu)于原核系統(tǒng)，但與人類細胞的糖基化模式存在細微差異，重組蛋白用于臨床前研究時需謹慎驗證。
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