BY-1439 4A11細胞系
- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1439
- 產(chǎn)地
- 廠商性質 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/8/8 8:52:06
- 訪問次數(shù) 244
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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來源與建立背景
形態(tài)與生長特征
功能特性
抗體分泌與特異性：穩(wěn)定分泌 IgG1 型單克隆抗體，分泌量達 45μg/10?細胞 / 天（MH-SCD163 無抗體分泌功能）；通過 Western blot 驗證，僅與 PRRSV GP5 蛋白（25kDa）特異性結合，與豬圓環(huán)病毒、豬流感病毒等無交叉反應，對 PRRSV 1 型和 2 型的識別率達 100%，但可區(qū)分 2 型內(nèi)的不同亞型（如 VR-2332 與 JXA1 株的結合力差異達 3 倍），特異性顯著優(yōu)于多克隆抗體。
抗原識別表位：識別 GP5 蛋白的線性表位（第 37-51 位氨基酸），該區(qū)域為 PRRSV 的主要中和抗原位點，與 MH-SCD163 細胞表達的 CD163 受體結合區(qū)域無重疊；競爭實驗證實，4A11 抗體可阻斷 PRRSV 對 MH-SCD163 細胞的吸附（抑制率達 75%），具備中和活性，且對變異株的識別能力優(yōu)于靶向其他抗原的抗體。
免疫學檢測性能：在間接 ELISA 中，抗體效價達 1:512000，檢測 PRRSV 的線性范圍 0.05-200ng/mL；在免疫熒光實驗中，與 MH-SCD163 感染的 PRRSV 共定位率達 99%，熒光強度是多克隆抗體的 4 倍，適合病毒定位與定量分析，且對不同亞型的熒光強度差異可用于分型鑒別。
PRRSV 檢測與分型技術開發(fā)
ELISA 檢測試劑盒：以 4A11 抗體為核心構建雙抗夾心 ELISA，檢測 MH-SCD163 培養(yǎng)的 PRRSV 靈敏度達 0.05ng/mL，批間變異系數(shù)＜3%，與豬血清中 PRRSV 的檢出符合率達 98%（傳統(tǒng)方法為 85%）。該試劑盒已廣泛應用于基層獸醫(yī)站，使 PRRSV 早期診斷率提升 40%，為疫情快速處置提供依據(jù)。
亞型鑒別體系：利用 4A11 抗體對不同 PRRSV 亞型的結合力差異，建立基于抗體親和力的分型方法，可在 24 小時內(nèi)區(qū)分高致病性與經(jīng)典毒株（親和力比值＞2.5），與基因測序結果的一致性達 96%（MH-SCD163 感染模型驗證），較傳統(tǒng)分型方法時間縮短 72 小時。
PRRSV 疫苗研發(fā)與質量控制
疫苗效價評估：作為 PRRSV 疫苗中和抗體檢測的標準抗體，4A11 與 MH-SCD163 細胞配合使用，可精準測定疫苗誘導的中和抗體效價，與仔豬攻毒保護率的相關性達 97%（傳統(tǒng)方法為 80%），被農(nóng)業(yè)部列為疫苗批簽發(fā)強制檢測試劑。
疫苗生產(chǎn)監(jiān)控：在 ST-2014S 細胞的 PRRSV 疫苗生產(chǎn)中，4A11 抗體用于監(jiān)測病毒抗原含量，可確定最佳收獲時間（GP5 蛋白含量達 5μg/mL 時），較經(jīng)驗性收獲提高疫苗免疫原性 30%，降低生產(chǎn)成本 20%。
PRRSV 抗原變異與免疫逃逸研究
變異株監(jiān)測：通過 4A11 抗體與臨床分離株的結合力測定，發(fā)現(xiàn) 2020 年后流行的 PRRSV 毒株 GP5 蛋白第 44 位氨基酸突變（R→K）可使結合力下降 60%，該突變株在 MH-SCD163 細胞中的復制能力提升 2 倍，提示免疫逃逸風險，已指導疫苗株更新。
中和機制解析：利用 4A11 抗體發(fā)現(xiàn)，PRRSV 通過 GP5 蛋白與 MH-SCD163 細胞表面 CD163 的相互作用依賴構象變化，抗體結合可穩(wěn)定 GP5 的閉合構象，阻止其與受體結合，該機制為設計廣譜疫苗提供了結構基礎。
基礎培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、1% 谷an酰胺，pH 維持在 7.2-7.4；為提高抗體產(chǎn)量，可添加 10ng/mL IL-4（MH-SCD163 無需此添加），使分泌量提升 30%，適合大規(guī)模懸浮培養(yǎng)。
傳代與放大：當細胞密度達 1×10?個 /mL 時，按 1:6 比例稀釋傳代（無需離心），24 小時存活率超 96%；放大培養(yǎng)采用 5L 攪拌式生物反應器，細胞密度可達 2.5×10?個 /mL，抗體總產(chǎn)量是 MH-SCD163 培養(yǎng)體系的 8 倍（按單位體積計）。
凍存與復蘇：采用含 15% DMSO 的wan全培養(yǎng)基，細胞密度 6×10?個 /mL，程序降溫至 - 80℃過夜后轉入液氮，復蘇時 37℃水浴 1 分鐘，存活率可達 92%，需通過 ELISA 驗證抗體效價（應≥1:256000）。
抗體應用與檢測操作
抗體純化：采用 Protein A 親和層析柱純化，純度達 99.5%，內(nèi)毒素含量＜0.03EU/mg，適合體內(nèi)中和實驗；純化抗體在 4℃可穩(wěn)定保存 8 個月，-20℃保存 3 年活性無顯著下降。
中和實驗優(yōu)化：在 MH-SCD163 細胞中，4A11 抗體（5μg/mL）可使 PRRSV 的 TCID??下降 10?倍，中和效價測定的變異系數(shù)＜5%，適合疫苗免疫效果評估。
優(yōu)勢：
特異性與靈敏度領xian：是目前 PRRSV 檢測的標gan抗體細胞系，與 MH-SCD163 配合使用可實現(xiàn) “感染 - 檢測” 全流程精準化，較傳統(tǒng)方法靈敏度提升 10 倍，亞型鑒別準確率達 96%。
功能雙重性突出：兼具高特異性檢測與中和活性，既可用于診斷試劑開發(fā)，又能研究病毒入侵機制，應用覆蓋 PRRSV 研究全鏈條，價值遠超普通檢測工具。
產(chǎn)業(yè)化成熟度高：抗體分泌穩(wěn)定，可通過生物反應器大規(guī)模生產(chǎn)，成本僅為進口抗體的 1/6，已實現(xiàn)國產(chǎn)替代，市場zhan有率達 80%。
局限性：
表位依賴性：僅識別 GP5 特定表位，對該表位缺失的變異株可能漏檢（需與其他抗體聯(lián)合使用），MH-SCD163 模型可輔助驗證變異株感染性。
種屬限制：鼠源抗體用于豬體內(nèi)實驗可能引發(fā)免疫反應，需通過基因工程進行人源化或豬源化改造（目前已完成嵌合抗體構建）。
依賴配套細胞系：自身無法支持病毒復制，需與 MH-SCD163 等感染模型配合使用，增加實驗設計復雜度。
4A11 細胞系的建立推動了 PRRSV 防控技術的精準化，其開發(fā)的檢測試劑盒使我國 PRRSV 亞型鑒別效率提升 3 倍。未來，通過基因編輯技術構建雙特異性抗體細胞系（同時識別 GP5 與 N 蛋白），可提高變異株檢出率；結合 MH-SCD163 的感染模型，有望開發(fā) “病毒變異預警系統(tǒng)”。作為 PRRSV 研究的核心工具，4A11 與 MH-SCD163 形成 “抗體 - 細胞” 協(xié)同體系，共同支撐豬繁殖與呼吸綜合征的科學防控與研究突破。
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