豬 CD163 表達(dá)與定位：高表達(dá)豬 CD163 受體（膜表面分子數(shù)達(dá) 7.5×10?/ 細(xì)胞，親本 MH-S 細(xì)胞幾乎不表達(dá)），主要定位于細(xì)胞膜與內(nèi)體膜（與 4H11 抗體識(shí)別的病毒抗原定位模式不同）；Western blot 驗(yàn)證顯示，表達(dá)的豬 CD163 分子量為 130kDa，與天然豬肺泡巨噬細(xì)胞的 CD163 分子量一致，且能被抗豬 CD163 單克隆抗體特異性識(shí)別（4H11 抗體無(wú)交叉反應(yīng)）。

PRRSV 復(fù)制支持能力：對(duì) PRRSV 的感染效率達(dá) 98%（親本 MH-S 細(xì)胞＜1%），病毒復(fù)制周期縮短至 16 小時(shí)（4H11 細(xì)胞無(wú)法支持病毒復(fù)制），胞內(nèi)病毒 RNA 拷貝數(shù)達(dá) 101? copies/mL（是 ST-2014S 細(xì)胞的 5 倍）；病毒釋放效率達(dá) 75%，滴度穩(wěn)定在 10?.2 TCID??/mL，可觀察到典型的細(xì)胞融合病變（親本細(xì)胞無(wú)病變），與豬肺泡巨噬細(xì)胞的病毒復(fù)制特征一致性達(dá) 90%。

免疫功能保留：保留小鼠巨噬細(xì)胞的天然免疫特征，表達(dá) TLR4、TLR7 等模式識(shí)別受體，PRRSV 感染后分泌 TNF-α 達(dá) 650pg/10?細(xì)胞 / 24h（是 4H11 細(xì)胞的 30 倍），Ⅰ 型干擾素（IFN-β）表達(dá)量是親本細(xì)胞的 1.5 倍，可模擬病毒感染引發(fā)的免疫應(yīng)答，較單純表達(dá)受體的非免疫細(xì)胞更接近在體狀態(tài)。

受體介導(dǎo)的宿主限制突破：通過(guò)該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)，豬 CD163 的 scavenger receptor cysteine-rich（SRCR）域 5 是 PRRSV 跨種感染的關(guān)鍵（刪除后病毒復(fù)制下降 99%），與小鼠同源蛋白的差異氨基酸位點(diǎn)（第 561 位亮an酸）決定了感染能力，4H11 抗體檢測(cè)證實(shí)該過(guò)程不依賴 PCV2 等其他病毒輔助，揭示 PRRSV 宿主范圍限制的分子基礎(chǔ)。

病毒適應(yīng)性變異追蹤：在 MH-SCD163 細(xì)胞中連續(xù)傳代 PRRSV 50 次后，病毒 ORF5 基因出現(xiàn) E159K 突變，與豬 - 鼠跨種傳代實(shí)驗(yàn)的變異規(guī)律一致（R2=0.92），該突變使病毒對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞的感染效率提升 8 倍，為評(píng)估 PRRSV 跨種傳播風(fēng)險(xiǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

病毒入侵路徑驗(yàn)證：利用該細(xì)胞系結(jié)合 4H11 抗體（作為陰性對(duì)照），證實(shí) PRRSV 通過(guò) CD163 介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑入侵，與網(wǎng)格蛋白共定位率達(dá) 85%，內(nèi)體酸化抑制劑可使入侵率下降 70%，明確 CD163 在病毒進(jìn)入階段的核心作用，研究結(jié)果較傳統(tǒng)豬源細(xì)胞更易進(jìn)行基因編輯驗(yàn)證。

受體調(diào)控網(wǎng)絡(luò)發(fā)現(xiàn)：通過(guò)轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn)，CD163 表達(dá)可上調(diào)小鼠巨噬細(xì)胞中 120 個(gè)與病毒復(fù)制相關(guān)的基因，其中 PI3K/Akt 通路激活是 PRRSV 復(fù)制的關(guān)鍵（抑制劑處理后病毒滴度下降 10?倍），為開發(fā)靶向宿主因子的抗病du藥物提供靶點(diǎn)。

受體阻斷劑篩選：建立基于 PRRSV-GFP 報(bào)告病毒的高通量篩選模型，某小分子化合物可特異性阻斷 CD163 與 PRRSV 的結(jié)合（IC??=2.3μM），在 MH-SCD163 細(xì)胞中使病毒復(fù)制下降 98%，且對(duì) 4H11 細(xì)胞無(wú)毒性（CC??＞100μM），豬肺泡巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其抑制率達(dá) 90%，具備開發(fā)潛力。

跨種抗病毒策略評(píng)估：在該細(xì)胞系中篩選出的 CD163 單克隆抗體，可同時(shí)抑制 PRRSV 對(duì)豬巨噬細(xì)胞（抑制率 85%）和 MH-SCD163 細(xì)胞（抑制率 90%）的感染，與 4H11 抗體的病毒檢測(cè)功能結(jié)合，可實(shí)現(xiàn) “阻斷 - 驗(yàn)證” 一體化評(píng)價(jià)，加速?gòu)V譜抗病du藥物研發(fā)。

培養(yǎng)基與篩選：使用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，添加 5μg/mL 嘌呤霉素（維持 CD163 表達(dá)），pH 維持在 7.2-7.4；與 4H11 細(xì)胞不同，需定期通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) CD163 表達(dá)（陽(yáng)性率應(yīng)＞95%），避免基因沉默導(dǎo)致功能丟失。

傳代與維護(hù)：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá) 1×10?個(gè) /mL 時(shí)，按 1:4 比例稀釋傳代（無(wú)需離心），24 小時(shí)存活率超 90%；為保持巨噬細(xì)胞功能，每周添加 10ng/mL M-CSF，可使吞噬能力提升 20%（4H11 細(xì)胞無(wú)需此步驟）。

凍存與復(fù)蘇：采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基，細(xì)胞密度 5×10?個(gè) /mL，程序降溫至 - 80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮，復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴 1 分鐘，48 小時(shí)后檢測(cè) CD163 表達(dá)（應(yīng)恢復(fù)至凍存前水平），病毒敏感性驗(yàn)證顯示 PRRSV 滴度波動(dòng)＜10%。

PRRSV 感染優(yōu)化：細(xì)胞以 2×10?個(gè) / 孔接種 24 孔板，接種 PRRSV（MOI=0.1）后 37℃孵育 1 小時(shí)，換液后培養(yǎng) 48 小時(shí)，病毒滴度可達(dá) 10?.2 TCID??/mL（4H11 細(xì)胞無(wú)法檢測(cè) PRRSV），結(jié)果變異系數(shù)＜7%，適合藥物篩選實(shí)驗(yàn)。

受體功能驗(yàn)證：通過(guò) CRISPR 技術(shù)在 MH-SCD163 細(xì)胞中敲除 CD163，病毒感染率從 98% 降至 5% 以下，可作為陰性對(duì)照驗(yàn)證受體依賴性，較 4H11 抗體的病毒檢測(cè)更能反映功能本質(zhì)。

優(yōu)勢(shì)：

局限性：