來源與構(gòu)建：該細(xì)胞系以 CHO-S 細(xì)胞為親本，通過電穿孔轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入含 TIM-1 胞外域（IgV 與黏蛋白結(jié)構(gòu)域）與 IgG1 Fc 段的融合基因表達(dá)載體，經(jīng) Zeocin 抗性篩選及單克隆純化獲得穩(wěn)定株，“TIM-1-Fc” 明確標(biāo)識(shí)其表達(dá)的融合蛋白組成。構(gòu)建過程中采用 CMV 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)，結(jié)合信號(hào)肽優(yōu)化序列，使融合蛋白分泌效率提升 30%，且 90% 以上以可溶性形式存在于培養(yǎng)上清中，便于純化與功能研究。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈上皮樣形態(tài)，可適應(yīng)貼壁與懸浮兩種生長模式，懸浮培養(yǎng)時(shí)形成直徑 20-40μm 的松散聚集體，細(xì)胞輪廓清晰，活力長期維持在 90% 以上。在 37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 30-36 小時(shí)，適應(yīng)無血清化學(xué)限定培養(yǎng)基（如 CD OptiCHO Medium），高密度培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞密度可達(dá) 9×10?個(gè) /mL，傳代 80 次以上仍保持穩(wěn)定生長速率，融合蛋白表達(dá)量無明顯衰減，凍存復(fù)蘇后存活率超 85%。

表達(dá)特征：該細(xì)胞系分泌的 TIM-1-Fc 融合蛋白兼具 TIM-1 的病毒結(jié)合活性與 Fc 段的純化便利性：分子量約 65kDa（SDS-PAGE 檢測(cè)），TIM-1 部分可特異性結(jié)合病毒包膜蛋白（如流感病毒血凝素、登革病毒 E 蛋白），F(xiàn)c 段可通過 Protein A 親和層析高效純化（純度超 98%）。其結(jié)合常數(shù)（KD）達(dá) 1.2×10?? M（針對(duì)流感病毒 H1N1 株），與天然 TIM-1 受體活性相當(dāng)，且熱穩(wěn)定性優(yōu)異（4℃保存 30 天活性保留率超 90%）。

優(yōu)勢(shì)：TIM-1-Fc 融合蛋白表達(dá)穩(wěn)定，長期傳代后活性波動(dòng)＜8%，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性強(qiáng)；融合蛋白兼具病毒結(jié)合與 Fc 段純化優(yōu)勢(shì)，無需額外標(biāo)簽即可高效分離；可懸浮高密度培養(yǎng)，蛋白產(chǎn)量達(dá) 3-4g/L（流加培養(yǎng)），降低原料生產(chǎn)成本；對(duì)多種病毒具有結(jié)合活性，適用范圍覆蓋呼吸道病毒、蟲媒病毒等，研究?jī)r(jià)值廣泛。

局限性：融合蛋白的 TIM-1 部分為倉鼠源，與人源 TIM-1 存在細(xì)微序列差異，部分人類病毒研究需結(jié)合人源化改造株；懸浮培養(yǎng)時(shí)聚集體過大會(huì)導(dǎo)致蛋白分泌效率下降，需控制攪拌速率（100-120 rpm）；對(duì)非 TIM-1 依賴型病毒無結(jié)合活性，應(yīng)用范圍存在局限。

培養(yǎng)條件：懸浮培養(yǎng)推薦使用無血清化學(xué)限定培養(yǎng)基，添加 50μg/mL Zeocin 維持抗性篩選，37℃、5% CO?環(huán)境中攪拌培養(yǎng)。傳代時(shí)維持細(xì)胞密度在 2×10?-7×10?個(gè) /mL，避免營養(yǎng)匱乏影響蛋白表達(dá)。流加培養(yǎng)階段，補(bǔ)加葡萄糖（維持濃度 4-6g/L）與氨基酸混合液，可延長蛋白分泌期至 14 天以上。

質(zhì)控與安全：定期通過 Western blot 檢測(cè)融合蛋白表達(dá)，ELISA 驗(yàn)證病毒結(jié)合活性；STR 鑒定排除交叉污染，支原體檢測(cè)需為陰性。凍存使用含 10% DMSO 的無血清凍存液，液氮保存可維持活性 5 年以上，復(fù)蘇后傳代 2 次待狀態(tài)穩(wěn)定后用于實(shí)驗(yàn)，涉及活病毒操作需符合生物安全二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。