來源與構(gòu)建：該細(xì)胞系以 CHO-BAT-KF 細(xì)胞為親本（本身具有高表達(dá)重組蛋白的特性），通過 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)靶向敲除 fut8 基因，經(jīng)嘌呤霉素抗性篩選及測序驗(yàn)證獲得雙等位基因敲除株，“fut8 (-/-)” 明確標(biāo)識其基因敲除特征。構(gòu)建過程中采用 sgRNA 靶向 fut8 基因第 2 外顯子，結(jié)合同源定向修復(fù)（HDR）引入終止密碼子，確保巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性缺失，巖藻糖修飾水平下降 95% 以上（通過 LC-MS 檢測）。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈上皮樣形態(tài)，以懸浮生長為主，可形成松散小聚集體（直徑＜50μm），細(xì)胞圓潤飽滿，活力長期維持在 90% 以上。在 37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 30-36 小時(shí)，適應(yīng)無血清化學(xué)限定培養(yǎng)基（如 CD CHO Medium），高密度培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞密度可達(dá) 8×10?個(gè) /mL，傳代 60 次以上仍保持穩(wěn)定生長速率，巖藻糖修飾水平無反彈。

表達(dá)特征：該細(xì)胞系生產(chǎn)的重組蛋白（如單克隆抗體）具有特定糖譜：N - 糖鏈巖藻糖含量＜5%（親本細(xì)胞約 30%-50%），同時(shí)保留核心巖藻糖以外的其他糖基化修飾（如半乳糖、唾液酸）。以抗 HER2 抗體為例，其 ADCC 活性比親本細(xì)胞生產(chǎn)的抗體提升 3-5 倍（通過 NK 細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證），且熱穩(wěn)定性與半衰期無明顯變化，生物活性更接近理想治療特性。

優(yōu)勢：fut8 基因敲除效果穩(wěn)定，巖藻糖修飾水平極低且穩(wěn)定，長期傳代后無反彈；生產(chǎn)的重組蛋白 ADCC 活性顯著提升，無需額外工程化改造即可優(yōu)化藥效；兼容懸浮高密度培養(yǎng)，重組蛋白表達(dá)量達(dá) 3-5g/L（與親本細(xì)胞相當(dāng)），滿足工業(yè)化生產(chǎn)需求；糖基化均一性高，批間差異小，降低藥物質(zhì)量控制難度。

局限性：敲除 fut8 可能導(dǎo)致部分蛋白的分泌效率下降（約 10%-15%），需通過培養(yǎng)基優(yōu)化補(bǔ)償；缺失巖藻糖修飾可能影響少數(shù)蛋白的構(gòu)象穩(wěn)定性，需針對具體靶點(diǎn)驗(yàn)證；培養(yǎng)成本高于普通 CHO 細(xì)胞，無血清培養(yǎng)基需添加特定營養(yǎng)因子（如脂類混合物）維持活性。

培養(yǎng)條件：使用無血清化學(xué)限定培養(yǎng)基，添加 1× 抗結(jié)塊劑，37℃、5% CO?懸浮培養(yǎng)（攪拌速率 120-150 rpm）。傳代時(shí)維持細(xì)胞密度在 2×10?-6×10?個(gè) /mL，避免過度稀釋影響增殖。流加培養(yǎng)時(shí)補(bǔ)加葡萄糖與氨基酸混合物，可進(jìn)一步提升蛋白表達(dá)量。

質(zhì)控與安全：定期通過測序驗(yàn)證 fut8 基因敲除狀態(tài)，LC-MS 檢測重組蛋白巖藻糖修飾水平（確保＜5%）；STR 鑒定排除交叉污染，支原體檢測陰性。凍存使用含 10% DMSO 的無血清凍存液，梯度降溫后保存于液氮，復(fù)蘇后傳代 3 次待狀態(tài)穩(wěn)定后用于生產(chǎn)，保證蛋白質(zhì)量一致性。