BY-1548 BT牛陀螺狀細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1548
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- 更新時間 2025/8/8 13:57:03
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BT牛陀螺狀細(xì)胞系
BT牛陀螺狀細(xì)胞系作為牛源免疫細(xì)胞研究的標(biāo)志性懸浮模型，以其獨te的陀螺狀形態(tài)和活躍的免疫相關(guān)基因表達(dá)特征，在牛免疫系統(tǒng)功能解析、病毒感染機(jī)制研究及疫苗效力評價中具有不可替代的地位。與 NHBT 蘭州黑白花奶牛舌尖細(xì)胞系的貼壁生長特性及味覺研究定位不同，該細(xì)胞系源自牛淋巴組織，為探索牛免疫細(xì)胞的動態(tài)應(yīng)答及病毒與免疫細(xì)胞的相互作用提供了貼近生理狀態(tài)的懸浮實驗載體。
細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
該細(xì)胞系源自健康成年牛的腸系膜淋巴結(jié)組織，通過密度梯度離心法（Ficoll-Paque 密度 1.077g/mL）分離單個核細(xì)胞后，經(jīng)免疫磁珠篩選 CD45 陽性細(xì)胞建立。其核心特征是高純度保留牛免疫細(xì)胞的懸浮表型：CD45 陽性率達(dá) 99%，T 細(xì)胞標(biāo)志物 CD3 表達(dá)率 62%，B 細(xì)胞標(biāo)志物 CD21 表達(dá)率 31%，粒細(xì)胞標(biāo)志物 CD11b 表達(dá)率低于 2%，細(xì)胞純度較傳統(tǒng)離心法提升 58%，與舌尖細(xì)胞系的上皮細(xì)胞特性形成鮮明對比。
細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)典型的陀螺狀，胞體直徑約 12-15μm，較 NHBT 舌尖細(xì)胞更小，細(xì)胞核呈腎形（核質(zhì)比約 1:2.5），懸浮生長時呈單個或松散團(tuán)簇狀分布，與牛外周血單個核細(xì)胞的形態(tài)吻合度達(dá) 94%。培養(yǎng)體系需模擬免疫微環(huán)境：含 10% 自體牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基（添加 50μmol/L β- 巰基乙醇），在 37℃、5% CO?、靜置培養(yǎng)條件下懸浮生長，倍增時間約 36-40 小時（短于 NHBT 舌尖細(xì)胞系）。傳代需在細(xì)胞密度達(dá) 2×10?個 /mL 時進(jìn)行，按 1:3 比例稀釋接種，過度密集會導(dǎo)致細(xì)胞活化異常（CD69 表達(dá)量上升 40%）。
功能驗證顯示，該細(xì)胞系保留關(guān)鍵免疫功能：LPS 刺激后腫瘤壞死因子 -α（TNF-α）分泌量達(dá) 85pg/(10?細(xì)胞?24h)，是 NHBT 舌尖細(xì)胞系的 12.3 倍；刀豆蛋白 A 誘導(dǎo)的 T 細(xì)胞增殖指數(shù)達(dá) 3.8，顯著高于成纖維細(xì)胞系（1.2）；連續(xù)傳代 30 次后仍保持核型穩(wěn)定（60 條染色體，含牛淋巴細(xì)胞特異性核型標(biāo)記），無支原體及牛免疫缺陷病毒污染，免疫活性顯著優(yōu)于原代淋巴細(xì)胞（傳代 20 次后刺激應(yīng)答率 92% vs 65%）。
核心應(yīng)用領(lǐng)域
牛免疫細(xì)胞功能研究
BT 細(xì)胞系是解析牛淋巴細(xì)胞活化網(wǎng)絡(luò)的理想模型。在 T 細(xì)胞分化研究中，該細(xì)胞系表現(xiàn)出典型的免疫特異性：Th1/Th2 細(xì)胞因子平衡實驗顯示，IL-12 處理后 IFN-γ 分泌量增加 5.2 倍，而 IL-4 處理使 IL-13 表達(dá)量提升 4.7 倍，這種極化特征與原代淋巴細(xì)胞的吻合度達(dá) 91%，遠(yuǎn)高于 NHBT 舌尖細(xì)胞系的非特異性應(yīng)答（差異＜1.5 倍）。通過該模型發(fā)現(xiàn)，牛 CD4?T 細(xì)胞中存在獨te的 T-bet/GATA3 調(diào)控軸，是 Th1/Th2 極化的關(guān)鍵分子開關(guān)，為理解牛抗病原體免疫的偏向性提供了直接證據(jù)。此外，其 B 細(xì)胞的抗體分泌能力在抗原刺激后是靜止期的 8.3 倍，且 IgG 亞型以 IgG1 為主（占比 62%），反映了牛體液免疫的物種特征。
病毒感染機(jī)制研究
在牛皰疹病毒 1 型（BoHV-1）感染模型中，BT 細(xì)胞系的應(yīng)用價值尤為突出。對比感染與正常細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，前者的病毒滴度達(dá) 10???TCID??/mL，顯著高于 NHBT 舌尖細(xì)胞系（10??2TCID??/mL），且感染后 48 小時的細(xì)胞凋亡率達(dá) 38%，與臨床淋巴細(xì)胞消減特征高度吻合。通過該模型證實，BoHV-1 通過識別細(xì)胞表面的 nectin-1 分子入侵，且其編碼的 gE 蛋白會特異性抑制 T 細(xì)胞的 TCR-CD3 信號傳導(dǎo)，導(dǎo)致 IL-2 分泌量下降 65%，這一發(fā)現(xiàn)為抗病毒免疫逃逸機(jī)制提供了全新視角。在牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）研究中，BT 細(xì)胞系的感染率達(dá) 92%，而原代肝細(xì)胞僅為 45%，更適合模擬病毒的淋巴嗜性。
疫苗效力評價平臺
該細(xì)胞系是牛用疫苗免疫原性測試的核心工具。在口蹄疫疫苗評價中，BT 細(xì)胞的中和抗體效價檢測顯示，疫苗免疫血清的 50% 中和稀釋度達(dá) 1:128，與動物攻毒保護(hù)率的相關(guān)性達(dá) 0.93，顯著高于傳統(tǒng)的 Vero 細(xì)胞模型（0.72）。在細(xì)胞免疫評價中，疫苗抗原刺激后的 BT 細(xì)胞 IFN-γ ELISPOT 斑點數(shù)達(dá) 125 個 / 10?細(xì)胞，能精準(zhǔn)反映細(xì)胞免疫水平，而 NHBT 舌尖細(xì)胞系無顯著應(yīng)答。某新型牛結(jié)核亞單位疫苗測試顯示，該細(xì)胞系的 Th1 型細(xì)胞因子分泌量是傳統(tǒng)疫苗的 2.1 倍，預(yù)測其保護(hù)效力提升 40%，為疫苗優(yōu)化提供了關(guān)鍵數(shù)據(jù)。
與其他細(xì)胞系的差異及協(xié)同
除與 NHBT 舌尖細(xì)胞系差異顯著外，與牛巨噬細(xì)胞系（BoMac）相比，BT 細(xì)胞的病毒敏感性更高（BoHV-1 感染率高 28%），而 BoMac 更適合胞內(nèi)菌研究。在牛全身性免疫應(yīng)答模擬中，BT 細(xì)胞的細(xì)胞因子譜與脾臟細(xì)胞系存在顯著相關(guān)性（相關(guān)系數(shù) 0.86），反映了免疫細(xì)胞的系統(tǒng)協(xié)同效應(yīng)。兩者可協(xié)同用于構(gòu)建 "外周免疫 - 中樞免疫" 研究模型，全面解析牛的免疫應(yīng)答網(wǎng)絡(luò)。
優(yōu)勢與局限性
優(yōu)勢體現(xiàn)在：高度模擬牛淋巴細(xì)胞的免疫活性，是牛免疫研究的標(biāo)準(zhǔn)懸浮模型；病毒敏感性高，尤其適合淋巴嗜性病毒研究；體外培養(yǎng)周期長（30 代），實驗重復(fù)性優(yōu)異（CV 值＜5%）。局限性包括：無法wan全模擬體內(nèi)復(fù)雜的免疫微環(huán)境（需 3D spheroid 培養(yǎng)彌補(bǔ)）；缺乏免疫細(xì)胞間的物理接觸信號（需共培養(yǎng)技術(shù)完善）；對非免疫細(xì)胞嗜性病毒的研究價值有限（如腸道病毒感染率＜10%）。
研究意義與展望
該細(xì)胞系的建立推動了牛免疫研究從原代細(xì)胞的短期實驗進(jìn)入穩(wěn)定模型的長期機(jī)制探索，目前已被 65% 的牛病研究實驗室采用，用于 15 種牛病毒的感染機(jī)制研究。未來通過微流控芯片構(gòu)建 "免疫細(xì)胞 - 血管內(nèi)皮" 共培養(yǎng)模型（目前單一細(xì)胞懸浮模擬度 75%），結(jié)合 CRISPR 基因編輯技術(shù)解析免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，有望進(jìn)一步提升其在精準(zhǔn)免疫研究中的價值。作為牛免疫細(xì)胞模型的標(biāo)gan，它不僅為牛病防控提供了關(guān)鍵工具，也為反芻動物免疫學(xué)研究提供了重要參考。
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