產(chǎn)品參數(shù)

產(chǎn)品介紹

Gelred 核酸染料（10,000× 水溶液）

核酸染料特點(diǎn)

1.    安全無毒：*油性大分子使其不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，艾姆斯氏實(shí)驗(yàn)表明，該染料的誘變性遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于EB。

2.    靈敏度高：適用于各種大小片段的電泳染色，對核酸遷移的影響小于SYBR Green I。

3.    穩(wěn)定性高： 適用于使用微波或其它加熱方法制備瓊脂糖凝膠；室溫下在酸或堿緩沖液中極其穩(wěn)定，耐光性強(qiáng)。

4.    信噪比高：樣品熒光信號強(qiáng)，背景信號低。

5.    操作簡單：與 EB 一樣，在預(yù)制膠和電泳過程中染料不降解；而電泳后染色過程也只需30 分鐘且無需脫色或沖洗 ，即可直接用紫外凝膠透射儀觀察。

6.    適用范圍廣：可選擇電泳前染色（膠染法）或電泳后染色（泡染法）；適用于瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳；可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。

7.    *兼容：與EB有相同的光譜特性，無需改變?yōu)V光片及觀察裝置：標(biāo)準(zhǔn)的 EB 濾光片或 SYBR 濾光片都適用，使用與觀察EB相同的普通紫外凝膠透射儀觀察即可，在 300nm 紫外光附近可得到*激發(fā)。

產(chǎn)品包裝： 10,000x  Gelred Nucleic Acid Dye  500uL                   

儲存條件： 2-8℃避光干燥可保存12個(gè)月。

操作步驟：

一．膠染法（*方法，用法類似EB）

 制膠時(shí)加入Gelred 核酸染料(染料靈敏，每100mL 瓊脂糖溶液中加入3～5μL Gelred 原裝液即可)。 按照常規(guī)方法電泳。

1. 實(shí)驗(yàn)室材料和試劑：

（1） 實(shí)驗(yàn)樣品：質(zhì)粒DNA，DNA marker

（2） 試劑：TAE電泳緩沖液（Tris 24.2g,冰乙酸5.71ml，EDTA 2.92g,NAOH 1.6g,PH8.0定容5000ml），溴酚藍(lán)指示劑，1%的西班牙瓊脂糖凝膠，Gelred核酸染料

（3） 儀器：電泳儀（100v），移液器(0.5～10ul)，凝膠成像儀

2. 實(shí)驗(yàn)步驟：

（1） 制膠：將0.5g瓊脂糖溶于50mLTAE電泳緩沖液中，加熱至瓊脂糖*融化。將融好的瓊脂糖溶液室溫放置40～50℃左右時(shí)加入1～2ul的Gelred凝膠電泳染料，混勻。

（2） 倒膠：將制好的瓊脂糖凝膠緩慢倒于制膠托盤內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。將點(diǎn)樣梳子垂直置于電泳膠膜的一端，距離托盤底部約1mm。放置時(shí)盡量保持平穩(wěn)，切勿晃動。

（3） 置膠：待約20分鐘左右膠體凝固后，緩慢垂直向上拔起點(diǎn)樣梳子，切勿用力過猛。

（4） 將瓊脂糖凝膠放入電泳槽內(nèi)，加入電泳緩沖液，使電泳緩沖液液面高于凝膠面約1～2mm。

（5） 將混合溴酚藍(lán)指示劑的DNA樣本（1ul溴酚藍(lán)與2ul DNA標(biāo)本混合）加入到點(diǎn)樣孔內(nèi)。

（6） 蓋上電泳槽蓋，開啟電源，使DNA從負(fù)極移向正極恒壓電泳(電壓恒定在100～120v之間，一般是5V/cm)。

（7） 當(dāng)DNA條帶距離點(diǎn)樣孔約1～2cm后關(guān)閉電源，(約30～40分鐘)取出凝膠。

（8） 用 312nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果。。

*注：此方法染色染料用量相對較少。500 μL染料大約可以做200～500塊 50mL的膠。染料加入膠中可直接使用微波爐加熱，制好的膠溶液可以在室溫下保存直至用完。

優(yōu)化電泳條件參考事項(xiàng)：

ü    要得到漂亮膠圖與多種因素有關(guān)，需要在EB的基礎(chǔ)上優(yōu)化電泳條件，請嘗試：marker濃度和樣品濃度稀釋一倍；降低瓊脂糖濃度；選用更長的凝膠；降低電壓延長凝膠時(shí)間以保證邊緣清晰；改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色。Gelred染料由于染料分子偏大，會對marker的大片段遷移有一定影響，偶爾會造成拖帶，微笑條帶等情況。減少DNA上樣量。污染和微笑條帶往往是過量的DNA樣本造成的。*的泳道和已知濃度的樣品的上樣量為50-200ng/泳道。對于未知濃度的樣品，嘗試1/2或1/3的常用上樣量；減少Gelred在凝膠中的總量，比如用0.5X的濃度來代替1X的濃度。 配制百分比濃度小的瓊脂糖凝膠。高分子量的DNA在低百分比的瓊脂糖凝膠分離效果比較好。

ü    更換電泳緩沖液。新配置的電泳液效果好！ TBE緩沖液比TAE緩沖液的效果更好。

ü    染料過于靈敏，建議marker濃度稀釋一倍，特別是含大片段多的marker！目前的marker是基于EB開發(fā)的，濃度對于Gelred一般是偏高的。

ü    染料過于靈敏，建議未知濃度的樣品的稀釋一倍后上樣，特別是含大片段多的樣品。

ü    與EB相比，Gelred電泳電壓要低一些(一般是5V/cm但是不)，跑膠的時(shí)間長一些。

ü    Gelred染料和樣品混合后，點(diǎn)樣到瓊脂糖凝膠中，有時(shí)效果非常好，有時(shí)效果不好。

ü    由于Gelred具有良好的熱穩(wěn)定性，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將Gelred儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。Gelred兼容所有常用的電泳緩沖溶液。

ü    如果總是看到條帶彌散或分離不理想，為了避免染料可能對DNA遷移的干擾，建議使用電泳后染膠。使用泡染法染色以確認(rèn)問題是否與染料有關(guān)。如果染色后問題依舊存在，則說明問題與染料無關(guān)！

*此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠，對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。

二．泡染法

（1）按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。

（2）用H₂O將Gelred 10,000× 儲液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中，制成3×染色液。（例如將15μL Gelred10,000× 儲液和5mL 1M NaCl加到45mL H₂O中）。

（3）將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振蕩染色30min左右，*染色時(shí)間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含3.5～10％丙烯酰胺的凝膠，染色時(shí)間通常介于30min到1h，并隨丙烯酰胺含量增加而延長。

（4）用 312nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果。

*注意事項(xiàng)：用泡染法染色時(shí)，染料用量較多。單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右；3× Gelred染色液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。

三．核酸電泳的PAGE步驟：

1）將TBE制備的凝膠放入電泳槽中，用夾子夾住邊緣。

2）用配置凝膠溶液同一批次的5×TBE灌滿緩沖液槽。用注射器排除凝膠底部的氣泡。

3）用注射器吸取1×TBE沖洗加樣孔。將DNA樣品和適量的6×凝膠栽樣緩沖液混合，用微量移液管加入加樣孔。

4）將電極與電源相連（正極接下槽），打開電源一般90V；1～8V/cm。進(jìn)行電泳9h。

5）電泳至標(biāo)準(zhǔn)參照染料遷移至所需位置（一般是電泳到二甲苯*遷出，溴酚藍(lán)距底邊2～3cm停止）。關(guān)閉電源，拔掉插頭，棄去電泳槽中的電泳液。

6）將凝膠取下來放入，染色皿中，加3X Gelred的1X緩沖液中的振蕩染色30-60分，放置在紫外檢測即可。

*注意事項(xiàng)：與瓊酯糖凝膠不同，不能用預(yù)染或點(diǎn)染的方法；只能用泡染的方法顯色，由于聚丙烯酰胺比較致密，染料不容易深入，顯色效果沒有瓊酯糖凝膠好。

特別提醒：

如果您使用的是紫外成像儀，請選擇DuRed；如果您使用激光成像儀或希望在可見光下觀測，請選擇 GelGreen。

少數(shù)情況下質(zhì)粒經(jīng)某些酶切后的DNA樣品會出現(xiàn)拖尾和分辨率降低，建議嘗試兩種染色方法決定哪種方法更合適。

幾種核酸染料比較

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