兔SP試劑盒,兔鏈霉卵白素-生物素法檢測(cè)系統(tǒng)
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海滬鼎生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地 上海滬鼎
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2019/1/24 11:07:14
- 訪問次數(shù) 2261
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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存儲(chǔ)條件: | 2~8℃暗處保存。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
檢驗(yàn)原理: | 生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG聚合物與結(jié)合在組織片上的一抗反應(yīng)形成免疫復(fù)合物,辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素與生物素免疫復(fù)合物結(jié)合進(jìn)一步形成聚合物,聚合物上的辣根酶(HRP)催化顯色底物(DAB或AEC)形成不溶性色原,從而在顯微鏡下顯示出組織片中的特定抗原的位點(diǎn)。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
試劑盒內(nèi)容: |
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檢驗(yàn)方法: | 1、檢驗(yàn)所需儀器、設(shè)備:移液器、恒溫箱、修復(fù)儀、免疫組化筆、計(jì)時(shí)器、孵育盒、染色架、蓋玻片、光學(xué)顯微鏡、洗瓶。 2、試劑準(zhǔn)備:DAB顯色液需要在使用前配制。 3、操作程序: a) 脫蠟和水化 石蠟切片置于新鮮二甲苯中,浸泡10分鐘×3次;去除多余的液體后,置于無水乙醇中,浸泡3分鐘×3次;去除多余的液體后,置于95%乙醇中,浸泡3分鐘×2次;去除多余的液體后,置于75%乙醇中,浸泡3分鐘×2次;蒸餾水沖洗1分鐘,置于PBS緩沖液中。 b) 抗原修復(fù),參見一抗說明書。 c) 阻斷內(nèi)源性過氧化物酶 加入適量的內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑,室溫孵育10分鐘;PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。 d) 滴加封閉用正常山羊血清工作液 滴加100μL或適量的封閉用正常山羊血清工作液,室溫孵育10~15分鐘,傾去血清,勿洗。 e) 滴加一抗 根據(jù)組織大小,滴加100μL或適量的一抗,37℃孵育60分鐘;PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。 f) 滴加生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG聚合物 滴加100μL或適量的生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG聚合物,室溫孵育10~15分鐘;PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。 g) 滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液 滴加100μL或適量的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液,室溫孵育10~15分鐘;PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。 h) 顯色 加入適量新鮮配制的DAB或AEC顯色液,室溫孵育5~8分鐘。 i) 復(fù)染 自來水沖洗,蘇木素染色液孵育20秒;分化、沖洗返藍(lán)。 j) 脫水、透明、封片 k) 閱片。 4、結(jié)果判定,染色結(jié)果須由有資質(zhì)的病理醫(yī)生對(duì)染色后的組織片在光學(xué)顯微鏡下觀察并進(jìn)行判讀。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
檢驗(yàn)結(jié)果的解釋: | 1、抗原修復(fù)、孵育時(shí)間、溫度的修改或使用其他方法均有可能得出錯(cuò)誤結(jié)果。 2、在每一次染色過程中,必須有空白對(duì)照和陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行。 3、如果陽性組織對(duì)照不能顯示適當(dāng)?shù)年栃匀旧?,?yīng)判定該批次樣本的檢測(cè)結(jié)果無效。 4、若生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG聚合物和辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液孵育溫度過高或孵育時(shí)間過長(zhǎng),可能導(dǎo)致染色過強(qiáng)及背景染色。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
檢驗(yàn)方法的局限性: | 1、免疫組織化學(xué)染色是一種需通過多個(gè)操作步驟完成的檢測(cè)過程。在組織前期處理和實(shí)驗(yàn)過程中的不規(guī)范操作,有可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 2、專業(yè)的操作人員、經(jīng)過認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室和標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)流程,可以減少各種外界因素造成的操作偏差。 3、紅細(xì)胞和細(xì)胞色素 C可能會(huì)造成假陽性結(jié)果。 4、某些組織中內(nèi)源性生物素含量比較高,可能導(dǎo)致染色過強(qiáng)及背景染色。 5、陰性結(jié)果表示未檢出抗原,不一定表示樣本中無該抗原存在。待測(cè)抗原編碼基因變異、抗原低表達(dá)或抗原修復(fù)不當(dāng)?shù)?,都?huì)造成抗原無法檢出。 6、本試劑僅對(duì)10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋的組織進(jìn)行了驗(yàn)證,不作其他用途。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
產(chǎn)品性能指標(biāo): | 1、裝量:試劑盒各組份的溶液裝量應(yīng)不少于標(biāo)示裝量。 2、符合性:取符合性組織片(包括陽性組織對(duì)照和陰性組織對(duì)照),經(jīng)相應(yīng)的免疫組化實(shí)驗(yàn)后,應(yīng)陽性著色定位準(zhǔn)確,且無背景染色;同時(shí),空白對(duì)照和陰性對(duì)照染色結(jié)果為陰性。 3、批內(nèi)重復(fù)性:取同一批次的試劑盒,檢測(cè)組織片3片,染色強(qiáng)度和定位無明顯差異。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
標(biāo)本染色: | 1. 石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水。 2. 如需采用抗原修復(fù),在此步驟后進(jìn)行。 3. 3% H2O2去離子水(無色液體)孵育5~10分鐘,以消除內(nèi)源性過氧化物酶活性。PBS沖洗,3分鐘 3次。 4. 滴加試劑A(藍(lán)色液體)室溫孵育10~15分鐘,傾去,勿洗。 5. 滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗,37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過夜。 6. PBS沖洗,3分鐘 3次。 7. 滴加試劑B(黃色液體)室溫或37℃孵育10~15分鐘。 8. PBS沖洗,3分鐘 3次。 9. 滴加試劑C(橙色液體),室溫或37℃孵育10~15分鐘。 10. PBS沖洗,3分鐘 3次。 11. 顯色劑顯色(DAB或AEC)。 12. 自來水充分沖洗。 13. 如果需要,可進(jìn)行復(fù)染,脫水,透明。 14. 選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?/span> |
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