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輝駿生物為感謝新老客戶對我們的支持，特別定制了2022年*，pull down實驗

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Pull down概念

在Pull down實驗中，帶標簽的誘餌蛋白能被特異結合該標簽的固相親和配基捕獲，形成“次級親和支持物”，用于純化與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白。純化產(chǎn)物洗脫后，經(jīng)Western blot驗證或LC-MS/MS，即可證明或鑒定與誘餌蛋白互作的蛋白。


Pull down實驗流程

圖1. Pull down流程示意圖

Pull down實驗方案設計

1、構建含His或GST標簽的誘餌蛋白原核表達載體；

2、原核表達誘餌蛋白（我們采用自誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)細菌，能有效降低包涵體的形成）；

3、細菌裂解液過柱，帶標簽的誘餌蛋白被固相化親和配基捕獲，產(chǎn)生“次級親和支持物”；

4、待測樣品裂解液過柱孵育，與誘餌蛋白互作的蛋白被“次級親和支持物”吸附；

5、清洗，離心，去除未結合的雜蛋白；

6、洗脫，得到誘餌蛋白及其互作蛋白的復合物；

7、如要驗證某蛋白X與誘餌蛋白互作，則將6.所得的蛋白復合物與X蛋白的抗體孵育，做Western blot驗證即可；

8、如要尋找誘餌蛋白可能的互作蛋白，則需將6.所得的蛋白復合物做LC-MS/MS鑒定。

圖2. Pull down實驗流程圖

生物信息學分析

GO注釋統(tǒng)計

Pathway分析

Pull down實驗技術服務內(nèi)容

1、原核表達載體構建；

2、融合蛋白的誘導表達與純化；

3、pull down捕獲互作蛋白；

4、Western blot驗證或LC-MS/MS鑒定互作蛋白；

5、數(shù)據(jù)檢索、生物信息學分析；

6、結果分析與報告整理。

訂購Pull down技術服務須知

為保證pull down實驗順利進行，請告知您的研究背景和目的，并提供目的蛋白對應的mRNA序列或?qū)虻腘CBI登錄號，及擬用的融合標簽。


活動聲明

1、活動時間：2022.08.01—2022.10.31；非活動期間項目不享受相關優(yōu)惠；

2、本活動終解釋權歸廣州輝駿生物科技有限公司所有。