ELISPOT全名為Enzyme-linked Immunospot Assay，其技術(shù)原理與ELISA相似。其實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是在96微孔培養(yǎng)盤(pán)底部披覆PVDF薄膜，用來(lái)吸附特殊挑選、且無(wú)毒性（不含內(nèi)毒素）的單克隆抗體。靜脈血PBMC細(xì)胞經(jīng)適當(dāng)分離處理后，會(huì)被分配到微孔盤(pán)上，再接受適當(dāng)?shù)目乖碳?，并將微孔盤(pán)放置于溫箱中過(guò)夜培養(yǎng)一段時(shí)間。一般而言，記憶型T細(xì)胞在受抗原刺激數(shù)小時(shí)后會(huì)開(kāi)始分泌細(xì)胞因子，此時(shí)局部(在緊靠分泌細(xì)胞的周?chē)?分泌出的細(xì)胞因子會(huì)被PVDF薄膜上特異抗體捕獲。微孔盤(pán)中的細(xì)胞被移除并清洗后，被捕獲的細(xì)胞因子可進(jìn)一步使用生物素（Biotin）標(biāo)記的二次抗體來(lái)標(biāo)志，其后再以結(jié)合堿性磷酸酶的生物素，BCIP/NBT 底物孵育后， PVDF 孔板出現(xiàn)“紫色”的斑點(diǎn)表明細(xì)胞產(chǎn)生了細(xì)胞因子。每個(gè)斑點(diǎn)代表每個(gè)分泌待測(cè)因子的細(xì)胞，斑點(diǎn)的多少可以在ELISPOT分析儀上進(jìn)行自動(dòng)化技術(shù)或在顯微鏡下進(jìn)行人工計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)膜上斑點(diǎn)的數(shù)目，除以當(dāng)初加入孔中的細(xì)胞數(shù)目，可以算出陽(yáng)性細(xì)胞的頻率。