Histamine(組胺)ELISA Fast Track
參考價 | ¥ 3460 |
訂貨量 | ≥1 件 |
- 公司名稱 上海冠泰生物科技有限公司
- 品牌 LDN
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2019/9/16 15:18:09
- 訪問次數(shù) 256
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供貨周期 | 兩周 | 規(guī)格 | 1 kit |
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貨號 | BA E-1700 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 可以檢測人,大鼠,小鼠,各種種屬樣本中的組胺含量 |
Histamine(組胺)ELISA Fast Track
貨號: BA E-1700
試劑盒可用于尿液和細(xì)胞上清中,以及全血中的組胺(Histamine)的定量檢測。試劑盒可用于大鼠組胺(Histamine),小鼠組胺(Histamine)和人組胺(Histamine),以及其他動物的組胺(Histamine)的檢測。組胺沒有種屬特異性,是否能用于檢測主要和樣本類型有關(guān),以及與樣本中的含量有關(guān)。
在程序的開始部分,組胺被定量?;?。 隨后的競爭性ELISA試劑盒使用微孔板格式。 抗原與微孔板的固相結(jié)合,?;瘶?biāo)準(zhǔn)品、對照品和樣品以及固相結(jié)合分析物競爭固定數(shù)目的抗血清結(jié)合位點(diǎn)。 在體系平衡后,通過洗滌除去游離抗原和游離抗原-抗血清復(fù)合物。與固相結(jié)合的抗體被檢測。以TMB為底物的抗兔IgG-過氧化物酶偶聯(lián)物。 在450nm處監(jiān)測反應(yīng)。
通過已知的濃度的標(biāo)準(zhǔn)品制定標(biāo)準(zhǔn)曲線,未知樣品的定量是通過將其吸光度與標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸進(jìn)行計算。
- 實(shí)驗(yàn)建議
2.1 測試結(jié)果的可靠性
為了確保對測試結(jié)果進(jìn)行可靠的評估,必須根據(jù)所包含的說明以及當(dāng)前的規(guī)則和指南(GLP, RILIBÄK等)進(jìn)行評估。
在測試過程中,必須特別注意control 的精度和正確性的結(jié)果;這些control的結(jié)果必須在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。如果提供的質(zhì)控報告(pre-set assay)與實(shí)際結(jié)果之間存在顯著差異,請聯(lián)系試劑盒制造商以獲得進(jìn)一步建議。
建議每個實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考區(qū)間。本測試說明中報告的值僅用于參考。
本試劑盒獲得的結(jié)果不應(yīng)被視為任何治療結(jié)果的主要原因,而必須與其他診斷試驗(yàn)和臨床觀察相關(guān)聯(lián)。
<>2.2投訴
<>2.3質(zhì)量保證
該試劑盒根據(jù)新的技術(shù)生產(chǎn),并經(jīng)過嚴(yán)格的內(nèi)部和外部質(zhì)量控制檢查來進(jìn)行保證。檢測試劑盒或檢測操作步驟的任何改變以及不同批號試劑的混用可能會對檢測結(jié)果產(chǎn)生負(fù)面影響,因此不在質(zhì)保范圍內(nèi)。制造商對運(yùn)輸過程中發(fā)生的損壞不承擔(dān)責(zé)任。
<>2.4試劑盒殘余物的處理
<>2.5干擾
不要混合不同批次的試劑和溶液??紤]不同的運(yùn)輸和儲存條件,測試樣品處理不當(dāng),或?qū)嶒?yàn)操作不恰當(dāng)都會影響結(jié)果。不要使用過期試劑盒。避免試劑和洗滌水受到微生物污染。溫育和洗滌對實(shí)驗(yàn)會有影響。
<>2.6預(yù)防措施
- protocol執(zhí)行。只有使用校準(zhǔn)過的移液器,才能獲得好的測試結(jié)果。Sodium azide可能與鉛和銅管發(fā)生反應(yīng),并可能形成高度爆炸性的金屬疊氮化物。清理時,用大量水*沖洗,以防止這種形成。
<>3.保存條件和穩(wěn)定性
儲存2-8℃。請勿使用超出標(biāo)簽上標(biāo)明的過期日的試劑盒組分。
<>4.試劑盒
4.1 試劑盒成分

4.2 需要但試劑盒中沒有提供的材料和設(shè)備
- 可調(diào)微量移液器 (e.g. 10-100 µL / 100-1000µL)
- 洗板機(jī)
- 可 450 nm 和 620 或 650 nm讀數(shù)的酶標(biāo)儀
- 可吸水物 (紙塔)
- 雙蒸水
- 混勻器
試劑盒實(shí)驗(yàn)時可以振蕩溫育或者不振蕩。如果要振蕩,請按照以下參數(shù):shaking amplitude 3mm; approx. 600 rpm.
檢測全血中的組胺,需要以下試劑(需另購):
BA E-1726 Release Buffer 1 x 250 mL ready for use
<>5.樣本采集和保存
樣本避免反復(fù)凍融
細(xì)胞上清:在2-8℃下多6小時;在-20℃或者-80℃下*(長6個月)。
儲存:在2-8℃下多6小時;在-20℃下*(長6個月)。
尿液:可以使用收集在含有10-15毫升6 M鹽酸的瓶中的自發(fā)性尿液或24小時尿液。儲存:在-20℃下儲存更長時間(長6個月)。避免直接暴露在陽光下。
全血:組胺的釋放是用肝素化的全血進(jìn)行的。
保存:20-25度;遠(yuǎn)離陽光和直接的熱源;
穩(wěn)定性:24小時。不能冷藏,白細(xì)胞會凝結(jié)。
<>6.實(shí)驗(yàn)protocol
讓所有試劑和樣品達(dá)到室溫。建議進(jìn)行雙重復(fù)測試。
6.1 準(zhǔn)備試劑
Wash Buffer洗滌緩沖液
用蒸餾水將20毫升Wash Buffer Concentrate稀釋至終體積為1000毫升。
儲存:6個月2–8℃;
酰化試劑Acylation Solution:
Acylation Solution具有18.5℃的冰點(diǎn)。為了確保Acylation Solution在使用時是液體,必須確保已經(jīng)達(dá)到室溫,并且在使用前形成均勻、無晶體的溶液。替代地,酰化稀釋劑可以儲存在室溫(20–25℃)下,與其他試劑盒組分分開。
全血
為了測定全血中總組胺,用Release Buffer (BA E-1726)稀釋肝素化全血1:20,并在90℃孵育10分鐘(例如50ul全血加1毫升釋放緩沖液。)
在2–8℃孵育10分鐘,讓樣品冷卻。
在700 x g下離心10分鐘(制動器關(guān)閉)
6.2
1. 樣品制備和?;?/span> 吸移管100µL 的standards ,control 以及血漿樣品 ,20µL 的細(xì)胞上清液或尿樣, 或100µL 的 預(yù)處理的全血樣本(見6.1)加入reaction plate的孔中;
2. 細(xì)胞上清液或尿液孔中加入80µL 的Diluent (補(bǔ)足100ul)。
3. 加入25µL 的?;芤海?/span>Acylation Solution)到所有孔中。
5.每孔加入200µL 的Acylation Buffer。
6. 在振蕩器上(approx. 600 rpm)溫育15分鐘, 室溫 (20-25°C)。
取25µL制備品進(jìn)入下一步ELISA 實(shí)驗(yàn)
6.3 histamine ELISA
Discard or aspirate the contents of the wells and wash each well 3 times thoroughly with 300 µL Wash
Buffer. Blot dry by tapping the inverted plate on absorbent material.
shaker(振蕩器)的使用不是強(qiáng)制性的。提供沒有shaker的替代方案;
<>1.向Histamine Microtiter Strips的相應(yīng)板條的孔中加入 25 µL ?;玫臉?biāo)準(zhǔn)品,controls 和樣品;
<>2.加入100 µL 的Histamine Anti serum 到各個孔中;封板;
<>3.在振蕩器上孵育30分鐘(20-25℃)(大約600轉(zhuǎn)/分);
不使用振蕩器: 用手輕輕搖動旋轉(zhuǎn)微孔板,并在室溫(2-8℃)下孵育40分鐘;
<>4.撕掉膜,倒掉孔里的液體,用洗液洗板洗三次,每次300ul 洗液每孔。在紙塔上拍干;
<>5.加入100 µL的Enzyme Conjugate到每孔中;
<>6.在振蕩器上孵育10分鐘(20-25℃)(大約600轉(zhuǎn)/分);
<>7.倒掉孔里的液體,用洗液洗板洗三次,每次300ul 洗液每孔。在紙塔上拍干;
<>8.加入100 µL的底物液到每孔中;
<>9.在振蕩器上孵育15 ± 2 min (20-25℃)(大約600轉(zhuǎn)/分);避光;
<>10.加入100 µL的Stop solution 到每孔中;振蕩微孔板,保證溶液的均勻;
<>11.在10分鐘內(nèi),使用酶標(biāo)儀450nm讀數(shù),可設(shè)置參比波長為620nm 或650nm;
<>7.計算結(jié)果;

校準(zhǔn)曲線是通過將標(biāo)準(zhǔn)品(線性,Y軸)的吸光度讀數(shù)(計算平均吸光度)與相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)濃度(對數(shù),X軸)作圖而獲得的。
使用非線性回歸進(jìn)行曲線擬合(例如,樣條,4參數(shù),Akima)。
質(zhì)控可直接從校準(zhǔn)曲線讀取。
尿液中的組胺讀數(shù)必須乘以5;
24h尿中組胺排泄總量計算如下: µg/24h=µg/L x L/24h
細(xì)胞上清中的組胺讀數(shù)必須乘以5;
全血樣本中的組胺讀數(shù)必須乘以21;
在溢出的情況下,使用設(shè)置為405nm的酶標(biāo)儀讀數(shù),在10分鐘內(nèi)讀取孔中溶液的吸光度。
7.3典型校準(zhǔn)曲線(僅供參考)
預(yù)期值: