RNAscope技術(shù)

RNAscope®技術(shù)是近年來zui火的RNA原位雜交技術(shù)，是RNA原位雜交（ISH）領(lǐng)域的一項(xiàng)重大進(jìn)步。由Advanced Cell Diagnostics公司（Newark, CA）開發(fā)，通過的雙“Z”探針設(shè)計(jì)和信號(hào)放大系統(tǒng)，使RNA原位雜交具有高度特異性、單分子檢測的敏感性并有*的信噪比，能夠在單細(xì)胞水平同時(shí)定量多個(gè)RNA的表達(dá)，在獲得單細(xì)胞中單拷貝RNA表達(dá)數(shù)據(jù)的同時(shí)提供完整的組織形態(tài)學(xué)信息。

RNAscope 方法克服了以前的RNA原位雜交技術(shù)的非特異性雜交、靈敏度低、對(duì)樣本要求高等弱點(diǎn)，可替代傳統(tǒng)的ISH/FISH RNA 原位檢測，同時(shí)單分子檢測靈敏度提供了在組織細(xì)胞原位對(duì)單個(gè)細(xì)胞中基因的表達(dá)進(jìn)行檢測，釋放RNA作為生物標(biāo)記的全部潛能，提高對(duì)疾病與標(biāo)志物之間復(fù)雜的生物學(xué)相關(guān)性的認(rèn)識(shí)，是理想的能夠用于NGS和芯片技術(shù)后期轉(zhuǎn)化研究技術(shù)平臺(tái)。

RNAscope技術(shù)步驟：

RNAscope®原位雜交是一項(xiàng)新穎的用于檢測位于組織細(xì)胞原位的目標(biāo)RNA的原位雜交（In Situ Hybridization，ISH)檢測技術(shù)。該技術(shù)進(jìn)行RNA原位雜交檢測主要分成5步。

Step 1：透化：通過RNAscope®預(yù)處理試劑盒處理載玻片上固定好的組織或細(xì)胞，暴露目標(biāo)RNA。

Step 2：探針雜交：針對(duì)靶基因設(shè)計(jì)RNAscope®Z型探針與目標(biāo)RNA雜交。

Step 3：信號(hào)放大：RNAscope®檢測試劑盒逐級(jí)信號(hào)放大。

Step 4：信號(hào)可視化：在普通光學(xué)顯微鏡或者多光譜熒光成像系統(tǒng)下，每一個(gè)目標(biāo)RNA分子以一個(gè)點(diǎn)狀信號(hào)的形式呈現(xiàn)。

Step 5：量化分析：顯微鏡下直接計(jì)數(shù)或者使用圖像分析軟件如RNAscope® SpotStudio™ 或HALO對(duì)每一個(gè)細(xì)胞中的RNA單分子信號(hào)進(jìn)行定量分析。

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