人凝血因子X（fx）elisa試劑盒

目的凝血因子Ⅻ (FⅫ),曾被稱為Hageman因子,是內(nèi)源性凝血途徑接觸激活系統(tǒng)系統(tǒng)的重要組成之一.遺傳性FXII缺乏是一種罕見凝血因子缺陷癥,通常為常染色體隱性遺傳,部分呈現(xiàn)顯性遺傳.與其他凝血因子不同,即使是嚴(yán)重的遺傳性FXII缺乏者,臨床上并無明顯出血表現(xiàn),而僅表現(xiàn)為APTT延長.因此,目前該病在人群中的發(fā)病率并不明確.迄今為止,中國人群大規(guī)模FXII活性水平研究數(shù)據(jù)較少,臨床中FXII活性減低標(biāo)準(zhǔn)也僅參照國外檢測儀器或試劑提供的臨界值,不能真實反映中國人群FXII水平.研究表明FXII基因中存在46C/T多態(tài)性位點,且該多態(tài)性位點與FXII活性水平相關(guān).該位點在日本人群中的等位基因頻率為0.27/0.73,而在高加索人中為0.8/0.2.純合子46T/T FXII蛋白表達量常低于雜合子46C/T FⅫ蛋白表達量,高加索人群的FXII活性高于日本人群考慮與46C/T頻率低有關(guān).本文通過大樣本橫斷面研究探討中國人群FXII活性正常值范圍,并對FXII活性減低者進行基因檢測,有助于明確中國人群FXII活性水平,并在DNA水平認(rèn)識疾病,探討FXII缺乏癥的分子發(fā)病機制.研究對象和方法1受試者招募2014年4月-8月北京協(xié)和醫(yī)院健康查體人群,罹患癌癥等,肝腎損害,口服避孕藥物或激素替代治療者,有靜脈和/或動脈血栓性疾病史人群將排除入組,所有受試者均需簽署書面知情同意書.該研究經(jīng)北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院倫理委員會審批,編號為S-686.2方法2.1資料采集受試者入組后,

收集其人口學(xué)特征及臨床特征資料,涵蓋性別,年齡,用藥史,血栓疾病的個人史和家族史等.2.2標(biāo)本采集按照如下方式收集靜脈血:收集所有受試者空腹枸櫞酸鈉抗凝血2.7ml,在室溫下2000g離心20分鐘,分離乏血小板血漿于-80℃冷藏,用于APTT,FⅫ舌性分析和LA檢測.剩余血細(xì)胞采用DNA提取試劑盒進行DNA收集.溶血及脂血標(biāo)本棄用.2.3 FXII活性與抗原測定FⅫ活性檢測采用法國STAGO公司試劑盒,于STA-R全自動凝血酶儀(STAGO公司產(chǎn)品)測定,所有操作步驟均嚴(yán)格按照試劑說明書進行.采用ELISA試劑盒(ab108835,Abcam(?)公司)進行FXII抗原檢測.2.4基因檢測在FⅫ活性降低者進行FXII基因檢測.根據(jù)FXII基因序歹(GenBank AF538691),應(yīng)用primer5軟件共設(shè)計7對引物以覆蓋FXII基因的所有外顯子區(qū)域及其側(cè)翼序列.在PCR擴增儀上進行擴增,產(chǎn)物回收純化自備測序模板,測序結(jié)果與美國NCBI基因庫所公布的FXII基因序列(GenBank AF538691)進行對比.結(jié)果1.共納入549例(男264例,女285例)受試者,年齡范圍16-79歲,中位年齡43歲.2.中國人群FXII活性正常值范圍是47%-160.25%,FXII活性的平均值是91.02±29.53%,與年齡及性別無相關(guān)性.3.46T/T基因型受試者FXII活性及抗原水平均明顯低于46C/T或46C/C基因型受試者.中國健康人群中46C/T等位基因頻率為0.3I/0.69.4.基因測序發(fā)現(xiàn)2個錯義突變和一個無義突變,考慮可能與FXII活性降低有關(guān).結(jié)論該研究明確了中國人群FXII活性正常值范圍是47%-160.25%,對臨床中FXII缺乏患者的診斷具有重要意義.46T/T純合子FXII活性及抗原水平均明顯低于46C/T或46C/C,而中國人群T等位基因頻率為0.69,可能與其總體活性水平低有關(guān).該研究還發(fā)現(xiàn)了3個未報道過的突變,考慮與FXII活性降低有關(guān),對探討遺傳性FXII活性缺乏癥的分子機制有重要意義.

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