猴Ⅰ型膠原N末端肽（NTX）elisa試劑盒

目的:因腫瘤,感染,生理功能減退等多種原因?qū)е碌慕M織缺損發(fā)病率很高,使用具有良好引導(dǎo)組織再生作用的膠原材料治療是一種行之有效的方法,而對(duì)其免疫原性的控制是該類材料制備工藝的關(guān)鍵所在,目前尚無相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn).本研究利用無花果蛋白酶去除牛腱Ⅰ型膠原蛋白末端肽,并對(duì)其去除效果進(jìn)行驗(yàn)證.rn 方法:采用一定濃度無花果蛋白酶對(duì)牛腱腱片進(jìn)行酶解,并在不同作用時(shí)間收集酶解液,使用ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定溶液中C,N末端肽(NTX和CICP)水平,觀察無花果蛋白酶對(duì)膠原蛋白末端肽的去除效果.rn 結(jié)果:在初始時(shí),實(shí)驗(yàn)組隨時(shí)間增加NTX,CICP濃度不斷增加,至第16h達(dá)到0.476±0.042 nmol/L后濃度不再變化,第16,18,20,22 h與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05).rn 結(jié)論:牛腱Ⅰ型膠原NTX和CICP在無花果蛋白酶作用下經(jīng)16h即*酶解,采用此酶解工藝生產(chǎn)的膠原類產(chǎn)品可*醫(yī)用植入性材料對(duì)免疫原性的控制要求.

背景:Ⅰ型膠原蛋白的免疫原性主要分布在分子鏈的端肽區(qū)域,可在膠原蛋白提取過程中通過水解或是去除而使其失活,制備去端肽Ⅰ型膠原蛋白,降低其免疫原性.目的:評(píng)價(jià)去端肽Ⅰ型膠原蛋白的免疫原性.方法:采用酶切,鹽析,透析工藝制備去端肽Ⅰ型膠原蛋白,通過考馬斯亮藍(lán)對(duì)牛血清白蛋白染色極限的分析,鑒定去端肽Ⅰ型膠原蛋白的純度,依據(jù)YY/T 0606.25-2014中規(guī)定的方法,利用Quant-IT PicoGreendsDNA Reagent and Kits試劑盒測(cè)定去端肽Ⅰ型膠原蛋白的DNA殘留量,利用ELISA試劑盒分析去端肽Ⅰ型膠原蛋白的端肽去除效果,依據(jù)YY/T 1561-2017標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)去端肽Ⅰ型膠原蛋白的α-Gal抗原含量.結(jié)果與結(jié)論:去端肽Ⅰ型膠原蛋白的純度可達(dá)99.8%,DNA殘留量為4μg/g,C,N末端肽濃度低于試劑盒檢測(cè)限,α-Gal抗原含量低于檢測(cè)限.通過酶切,鹽析,透析工藝制備的去端肽Ⅰ型膠原蛋白,可顯著去除天然膠原蛋白的免疫原性根源,有效控制膠原蛋白臨床應(yīng)用的免疫原性風(fēng)險(xiǎn).猴Ⅰ型膠原N末端肽（NTX）elisa試劑盒