猴脂多糖（LPS）elisa試劑盒

目的探討牙齦卟啉菌(Porphyromonasgingivalis)脂多糖誘導(dǎo)人粒細(xì)胞HL-60分泌IL-lβ,TNF-α,IL-6能力差異及其相關(guān)T0u樣受體和信號(hào)通路.方法采用酚水法提取牙齦卟啉菌ATCC33277株脂多糖(Pg—LPS).采用ELISA試劑盒定量檢測(cè)Pg—LPS作用的HL-60細(xì)胞分泌IL-lβ,TNF-α和IL-6水平.采用TLR2或心單克隆抗體阻斷試驗(yàn)聯(lián)合ELISA檢測(cè),了解Pg—LPS結(jié)合靶細(xì)胞上Toll樣受體的類(lèi)型.采用JNK,P38MAPK和NF-kB通路特異性阻斷劑的阻斷試驗(yàn)聯(lián)合ELISA檢測(cè),了解Pg—LPS誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分泌IL-lβ,TNF-α和IL-6的相關(guān)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路.實(shí)驗(yàn)中采用大腸桿菌O111:B4脂多糖(E-LPS)作為對(duì)照.結(jié)果1μg/ml Pg—LPS分別作用2,4,48和48h或1μg/ml E—LPS分別作用48,48和72h,HL-60細(xì)胞分泌的IL-1β,TNF-α和IL-6水平明顯升高(P〈0.01);Pg—LPS誘生的TNF-α濃度與E-LPS相近(P〉0.05),但誘生的IL-Iβ和IL-6濃度明顯高于E—LPS(P〈0.05).TLR2單抗可抑制Pg—LPS誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分泌IL-lβ,TNF-α或IL-6的活性(P〈0.05),但BLPS誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分泌上述3種細(xì)胞因子的活性?xún)H可被TLR4單抗所抑制(P〈0.05).Pg—LPS誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分泌IL-lβ,TNF-α和IL-6的信號(hào)通路分別為JNK和NF-kB,JNK和P38MAPK及NF-kB,JNK和P38MAPK(P〈0.05)

為了研制一種檢測(cè)牛布魯氏菌抗體的間接ELISA試劑盒,試驗(yàn)以提純的羊布魯氏菌WS-01株脂多糖(LPS)作為包被抗原,建立牛布魯氏菌間接ELISA方法.篩選試劑盒組分并優(yōu)化反應(yīng)條件,制備牛布魯氏菌間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒,并用該試劑盒對(duì)182份布魯氏菌病陽(yáng)性血清和143份布魯氏菌病陰性血清進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果經(jīng)SPSS17.0軟件分析,構(gòu)建受試者工作曲線(ROC)及曲線下面積,以敏感性和特異性確定臨界點(diǎn).使用布病標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清按2的倍比稀釋,采用建立的間接ELISA方法進(jìn)行檢測(cè),得出陽(yáng)性臨界值時(shí)的大稀釋倍數(shù).使用本研究建立的間接ELISA試劑盒及國(guó)外商品化試劑盒對(duì)臨床采集的411份樣品進(jìn)行比對(duì)檢測(cè),比較其符合率.結(jié)果表明:當(dāng)陽(yáng)性血清稀釋到1:128時(shí),通過(guò)建立的間接ELISA檢測(cè)結(jié)果仍為陽(yáng)性,該方法與其他常見(jiàn)病無(wú)交叉反應(yīng),重復(fù)性檢測(cè)批間變異系數(shù)均小于10%,保存期試驗(yàn)確定試劑盒可在2℃~8℃下保存12個(gè)月;選取411份樣品進(jìn)行牛布魯氏菌檢測(cè),本研究建立的試劑盒與國(guó)外試劑盒相比符合率為91.24%,說(shuō)明兩種試劑盒符合率較高,為牛布魯氏菌的臨床診斷提供了技術(shù)手段.猴脂多糖（LPS）elisa試劑盒