牛α干擾素（IFN-α）elisa試劑盒本文探討聚合體形式的豬干擾素α真核表達(dá)質(zhì)粒(pVAX1-PIFNα)對豬PRRSV弱毒疫苗免疫作用的增強作用.在豬免疫PRRSV弱毒疫苗的同時,注射pVAX1-PIFNα重組表達(dá)質(zhì)粒與多聚賴氨酸(PLL)的聚合體(PLL-pVAX 1-PIFNα),以研究聚合體狀態(tài)的干擾素對PRRSV免疫的增強作用.將分泌表達(dá)干擾素α的重組真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-PIFNα與PL聚合,同時免疫PRRSV弱毒疫苗和PLL-pVAX1-PIFNα聚合體,使用ELISA試劑盒檢測PRRSV中和抗體;另外,分離培養(yǎng)豬外周血白細(xì)胞(PBMC)進(jìn)行體外試驗,分析PLL-pVAX1-PIFNα聚合體刺激淋巴細(xì)胞后IFN-γ的分泌情況.中和抗體的結(jié)果表明,PLL-pVAX1-PIFNα的使用可明顯提高PRRSV活疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生PRRSV中和抗體的能力;細(xì)胞試驗的結(jié)果表明,經(jīng)PLL-pVAX1-PIFNα刺激后,明顯提高了淋巴細(xì)胞分泌表達(dá)IFN-γ的水平.在PRRSV疫苗免疫中,聚合體狀態(tài)的豬IFNα重組表達(dá)質(zhì)?？捎行岣邫C體的體液免疫和細(xì)胞免疫水平,這一結(jié)果也為干擾素或其他重組蛋白在疫苗免疫中的應(yīng)用提供了新的思路.

以純化的rHis-BoIFN-γ制備兔多抗血清,辛酸—硫酸銨兩步法對體內(nèi)誘生的抗rBoIFN-γ單抗腹水進(jìn)行純化,用美洲商陸素(Pokeweed mitogen,PWM)刺激奶牛全血產(chǎn)生的分泌性天然BoIFN-γ篩選出與之反應(yīng)的單抗5E11.將單抗5E11以40μg/mL濃度包被,與1:3 000倍稀釋的兔抗rHis-BoIFN-γ多抗血清(13.8μg/mL)配對,以1:6 000稀釋的商品化酶標(biāo)羊抗兔IgG為指示抗體,建立了BoIFN-γ抗原捕獲ELISA檢測方法,該方法可以檢出2.56 U/100μL(30.5 pg/100μL)的rHis-BoIFN-γ,8U/100μL的rBac-BoIFN-γ和1U/100μL的分泌性天然BoIFN-γ.以商品化試劑盒作為平行對照,將獲得的奶牛臨床檢測血漿樣品使用BoIFN-γ抗原捕獲ELISA法進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示兩種方法檢測符合率達(dá)到83.9%.本研究建立的BoIFN-γ抗原捕獲ELISA檢測方法可有效檢測分泌性IFN-γ,為進(jìn)一步開發(fā)BoIFN-γELISA檢測試劑盒奠定了基礎(chǔ).牛α干擾素（IFN-α）elisa試劑盒