本產(chǎn)品是采用 SYBR Green I 嵌合熒光法進(jìn)行Real Time PCR的專用試劑，將熱啟動Taq DNA聚合酶、dNTP、SYBR Green I等試劑預(yù)混成即用的2x Mix，可對目標(biāo)cDNA進(jìn)行快速并具有高特異性的定量檢測。本產(chǎn)品采用化學(xué)修飾的Hot Start Taq DNA聚合酶，在 50 ℃以下無活性，只有 95 ℃條件下加熱后才能*恢復(fù)酶的活力，*大限度減少非特異性擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生，提高熒光定量PCR反應(yīng)的精確性。該試劑盒*的反應(yīng)緩沖液，可在寬范圍中得到良好的擴增結(jié)果、檢測靈敏度更高、信號更強。

產(chǎn)品組分：

保存條件：

收到本產(chǎn)品后，請立即置于-20℃避光保存，一年有效，2～8℃條件下儲存6個月，避免反復(fù)多次凍融。

使用說明：

一、配制 Real-Time PCR反應(yīng)體系：

1、將所有試劑2×SYBR Green qPCR Mix，ROX Reference Dye，模板，引物和RNase-Free ddH₂O，在室溫下融解并*混勻，避免產(chǎn)生氣泡。短暫離心后，置于冰上按照下表配制反應(yīng)液。

參考下表配制反應(yīng)體系：

* 一般來說反應(yīng)體系中引物終濃度為0.2 uM即可得到較好的擴增效果。當(dāng)反應(yīng)性能比較差時，可以在終濃度0.2~0.4 uM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。

** 幾種常見儀器的*適ROX Reference Dye濃度見下表：

2、蓋上或密封反應(yīng)管/PCR板，輕輕混勻。短暫離心，確保所有組分都在管/板底。

二、進(jìn)行Real-Time PCR反應(yīng)

1、建議采用兩步法PCR反應(yīng)程序進(jìn)行反應(yīng)。

兩步法反應(yīng)程序:

若模板量較低等因素導(dǎo)致擴增效果不佳，可使用三步法程序進(jìn)行PCR反應(yīng)。

三步法反應(yīng)程序:

2、上機檢測：將反應(yīng)體系置于熒光定量 PCR 儀中，運行程序收集數(shù)據(jù)并分析結(jié)果。