Bradford Protein Assay Kit 

Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本公司生產(chǎn)的Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒是根據(jù)目前廣泛應(yīng)用的蛋白濃度檢測(cè)方法之一Bradford法研制而成。其操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，檢測(cè)速度極快?？蓹z測(cè)濃度下限達(dá)25ug/ml的蛋白樣品，最小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.5ug，待測(cè)樣品體積為1-20ul。

本產(chǎn)品主要成分為考馬斯亮藍(lán)G250。

產(chǎn)品組分：

使用方法:

1、 取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配置液加入到25mgBSA的蛋白標(biāo)準(zhǔn)管中，*溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，即為25mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。配制成的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液可-20℃長(zhǎng)期保存。

2、 取適量25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，稀釋至終濃度為0.5mg/ml。標(biāo)準(zhǔn)品*好與蛋白樣品用同樣的溶液稀釋。但為了簡(jiǎn)便起見，通常使用0.9%NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。

3、 做標(biāo)準(zhǔn)曲線。將標(biāo)準(zhǔn)品按0，1，2，4，8，12，16，20ul加到96孔板中，不足20ul的加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20ul。

4、 將待測(cè)的蛋白樣品稀釋至合適濃度，加到96孔板中，使待測(cè)樣品總體積也為20ul。

5、 每孔加入考馬斯亮藍(lán)G250溶液200ul，充分混勻（可將酶標(biāo)板放在振蕩器上振蕩30s），室溫放置3-5min后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號(hào)做參比，在 595nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定，記錄各孔吸光度值。以標(biāo)準(zhǔn)品蛋白含量（ug）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

6、 如用分光光度計(jì)測(cè)定，請(qǐng)?jiān)诘谌降臅r(shí)候?qū)?biāo)準(zhǔn)品體積改為1ml，濃度梯度用生理鹽水稀釋為0，1，2，5，10，15，30ug/ml?；蚋鶕?jù)樣品調(diào)整濃度梯度。

7、將樣品稀釋至合適濃度，加到小試管中，使待測(cè)樣品總體積也為1ml。

8、 每只試管加考馬斯亮藍(lán)G250溶液3ml，充分混勻，室溫放置3-5min后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號(hào)做參比，在 595nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定，記錄各孔吸光度值。

注意事項(xiàng)：

1、 考馬斯亮藍(lán)G250溶液使用前請(qǐng)顛倒3-5次，混勻。

2、 蛋白標(biāo)準(zhǔn)請(qǐng)?jiān)谌咳芙夂笙然靹?，再稀釋成一系列不同濃度的蛋白?biāo)準(zhǔn)。

3、 將考馬斯亮藍(lán)G250溶液回復(fù)到室溫再使用，有利于提高檢測(cè)的靈敏。

4、 Bradford法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M，二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá)5mM。但受略高濃度的去垢劑影響。需確保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20,60,80低于0.015%。含去垢劑的樣品推薦使用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（BL521A）。染色時(shí)間不能太長(zhǎng)，否則活細(xì)胞會(huì)因染料積累而染成顏色，使檢測(cè)結(jié)果偏低。

5、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

保存條件：

考馬斯亮藍(lán)G250溶液室溫保存，配置好的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液-20℃凍存。效期一年。