紅細胞裂解液

產(chǎn)品簡介：

紅細胞裂解液是一種用于從人或鼠等的血液或組織樣品中裂解并去除無細胞核紅細胞的溶液。經(jīng)過優(yōu)化配方，在裂解紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞(lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。主要有效成分為氯化銨。不適用于有細胞核紅細胞的裂解，例如鳥或禽類的紅細胞。已經(jīng)過無菌處理，處理過的血液或組織細胞樣品可以用于后續(xù)的原代培養(yǎng)、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測。

使用說明：

對于組織細胞樣品：

1、新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當方法分散成細胞懸液，離心棄上清。

2、加入3-5倍細胞體積的紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體積為1ml，則加入3-5ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。

3、400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不*，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。

5、洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500g離心2-3分鐘，棄上清?？稍僦貜?/span>1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。

6、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。

對于組織細胞樣品無需洗滌的快速操作步驟：

1、新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當方法分散成細胞懸液，離心棄上清。

2、對于0.2ml細胞沉淀加入1ml紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。

3、加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。

4、400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

5、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不*，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。

6、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。

說明：對于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程中的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時不需要大體積的離心管?？焖俨襟E少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。

對于血液樣品：

1、取新鮮抗凝血，400-500g離心5分鐘，離心棄上清。

2、加入6-10倍細胞體積的紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體積為1ml，則加入6-10ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對于鼠的血液，裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至4-5分鐘，并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。

3、 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不*，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。

5、洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500g離心2-3分鐘，棄上清?？稍僦貜?/span>1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。

6、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。

注意：對于微量或少量的血液樣品，可在*一步中不進行離心棄上清的操作，直接在第

二步中加入10倍血液體積的紅細胞裂解液，并在室溫或4℃裂解4-5分鐘。對于鼠的血液，裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10分鐘，但通常不宜超過15分鐘，并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。后續(xù)步驟相同。

對于血液樣品無需洗滌的快速操作步驟：

1、每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4-5分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對于鼠的血液，裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10分鐘，但通常不宜超過15分鐘，并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。

2、加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。

3、 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不*，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。

5、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。

注意：對于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。

注意事項：

1、本裂解液為無菌產(chǎn)品，請注意保持無菌，使用本產(chǎn)品時宜在超凈工作臺內(nèi)進行。

2、 如果經(jīng)過紅細胞裂解液處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取，在處理細胞時不必使用經(jīng)過DEPC處理過的溶液。

3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

保存條件：

4℃保存，一年有效。室溫保存，3個月有效。